Язва желудка и язва двенадцатиперстной кишки
Все чаще современные люди сталкиваются с такими серьезными заболеваниями желудочно-кишечного тракта как язва желудка и язва двенадцатиперстной кишки. Вредные привычки, злоупотребление табаком, алкоголем и кофеином, употребление жирной и острой пищи, нерегулярное питание — все это ощутимо усугубляет любые неполадки в пищеварительной системе организма.
Что представляют собой язва желудка и язва двенадцатиперстной кишки?
Язва желудка представляет собой местное повреждение слизистой оболочки желудка, которое происходит под воздействием кислоты, желчи и пепсина. Для язвы желудка характерны рецидивы, когда периоды обострения болезни сменяются периодами затишья (ремиссии). Как правило, язва желудка обостряется в весенне-осенний период. После заживания язвы желудка на слизистой остается рубец.
Язва двенадцатиперстной кишки случается в 4 раза чаще, чем язва желудка. Всего же от подобных заболеваний страдают не менее десяти процентов населения. Язва двенадцатиперстной кишки образуется под воздействием кислоты, желчи и пепсина на слизистую этого органа.
Лечение язвы желудка и двенадцатиперстной кишки с помощью минеральной воды Donat Mg
Лечебная минеральная вода Donat Mg нормализует кислотность, уменьшает спазмы, активизирует перистальтику и кровообращение. При язве желудка и двенадцатиперстной кишки важно также то, что Donat Mg способствует восстановлению слизистых оболочек поврежденных органов. Минеральная вода положительно воздействует на моторику пищевода и желудка, устраняя не только неприятные симптомы язвы желудка, но и благотворно влияя на основное «слабое звено».
Язва желудка и двенадцатиперстной кишки: прием Donat Mg
Время приема | Количество | Температура | Употребление | Длительность приема |
За 20 минут перед завтраком | 200 мл | В подогретом виде | Быстро | От 4 до 6 недель |
За 20 минут перед обедом | 150 мл |
Комнатной температуры |
Медленно | |
За 20 минут перед ужином | 150 мл |
Комнатной температуры |
Медленно |
При лечении язвы желудка с помощью минеральной воды Donat Mg стоит учитывать, что на начальном этапе может наблюдаться некоторое послабление стула. Это нормальное явление, которым сопровождается очистка организма от вредных шлаков.
Длительность курса лечения Donat Mg составляет не более полутора месяцев, а перерыв перед началом следующего курса — 4 недели. Подобный курс необходимо повторять как минимум 2-3 раза ежегодно.
Важно: Если Вы страдаете хроническими болезнями почек и органов пищеварения, перед началом лечения желательно получить рекомендации лечащего врача.
Противопоказания к приему Donat Mg для лечения язвы желудка и двенадцатиперстной кишки
- обострения желудочной язвы и язвы двенадцатиперстной кишки. на момент приема минеральной воды, кровотечения при язвенных процессах в анамнезе.
Лечение язвы желудка и двенадцатиперстной кишки
Язвенная болеть желудка — это заболевание хроническое, сущность которого заключается в периодически обостряющейся язве желудка и язве двенадцатиперстного кишки, зачастую, на фоне гастрита, ассоциированного инфекцией «хеликобактер пилори» (Helicobacter pylori), до 10% населения страдает этим заболеванием. Установлено, что язвы двенадцатиперстной кишки встречаются намного чаще, чем язвы желудка.
Самый первый признак язвенной болезни — это боль в области желудка: острая, жгучая, ноющая. Боль может быть неопределённой, тупой и ощущаться как чувство переполнения желудка, тяжести в желудке и может напоминать чувство голода. При язве двенадцатиперстной кишки боль возникает через какое-то время после еды, иногда ночью, иногда уменьшается сразу после еды или приёма таких средств как альмагель , что приводит к нейтрализации соляной кислоты и ослабления её раздражающего воздействия. У заболевших язвой желудка боль возникает или усиливается после еды, ощелачивающие вещества уменьшают её не так хорошо. Для больных язвой желудка характерна тошнота, рвота чаще, чем для больных с язвой двенадцатиперстной кишки. Многие худеют, так как ограничивают себя в приёме пищи из-за болевого синдрома, который появляется через 1-2 часа после еды или сразу после приема пищи.
Около половины обострений язв протекает бессимптомно. Боль часто сопровождается тошнотой, изжогой, отрыжкой.
Возможны не типичные проявления: отсутствие связи боли с приёмом пищи, отсутствие сезонности обострений (весной и осенью).
Главной причиной возникновения заболевания, является нарушение равновесия между агрессивными и защитными факторами, оказывающими воздействие на слизистую оболочку желудка или двенадцатиперстной кишки, приводят к возникновению язвы. К агрессивным факторам относят соляную кислоту, которая вырабатывается в желудке, желчные кислоты, вырабатываемые печенью и поступающие в двенадцатиперстную кишку, попадание содержимого двенадцатиперстной кишки в желудок. К защитным относится слизь, которая вырабатывается клетками слизистой оболочки, нормальное кровообращение, своевременное восстановление клеток слизистой оболочки. К преобладанию факторов агрессии приводят: присутствие хеликобактера в желудке или двенадцатиперстной кишке, прием различных лекарственных средств, стрессы, пристрастие к кофе, злоупотребление алкоголем, острая пища.
Очень важным, в развитии болезни является наследственность. Имеется в виду наличие заболевания у ваших родственников (по отцовской или материнской линии). Передается по наследству не сама болезнь, а предрасположенность к заболеванию: увеличенное количество клеток, которые синтезируют соляную кислоту, врожденная неполноценность кровеносных сосудов, снабжающих кровью слизистую желудка и двенадцатиперстной кишки, преобладание вредных факторов(алкоголь. курение) на фоне плохой наследственности приводит к заболеванию.
Большую роль имеет и инфекционный фактор. Роль хеликобактера заключается в том, что он в процессе своей жизнедеятельности вырабатывает аммиак, наличие которого ведет к увеличению продукции соляной кислоты. Также хеликобактер продуцирует вещества, повреждающие клетки слизистой желудка и двенадцатиперстной кишки, вызывая воспаление. При уничтожении инфекции признаки воспаления исчезают.
Внимание!Лечение язвы желудка и язвенной болезни двенадцатиперстной кишки наиболее рационально проводить в специализированных санаториях в период ремиссии.
На территории России наиболее востребованным в области лечения язвы желудка и язвы двенадцатиперстной кишки является санаторий им М.И.Калинина г. Ессентуки, что связано с наличием не только высококвалифицированных кадров, но и с природными факторами региона Кавказских Минеральных вод и в частности г. Ессентуки — наличием природных источников минеральной воды — Ессентуки № 4 и Ессентуки № 17 . В санатории лечение проводится с целью профилактики обострений заболевания и дальнейшего прогрессирования процесса путем нормализации нейроэндокринной регуляции организма, уменьшения функционально-морфологических и трофических нарушений. Бальнеологические факторы, используемые в санатории при лечении, воздействуют на эти основные патогенетические звенья язвенной болезни. Важную роль играют питьевые минеральные воды.
Природные гидрокарбонатные воды Ессентуков обладают ощелачивающим действием, разжижают и удаляют патологическую слизь, которая образуется при воспалительных заболеваниях желудочно-кишечного тракта, нормализуют секреторную и моторную функции желудка. Стимулируют защитные факторы слизистой оболочки желудка, способствуют выделению интестинальных гормонов (секретин, гастрин и др.), улучшают деятельность поджелудочной железы, в том числе повышают выделение бикарбонатов с соком, ощелачивающих кислое содержимое желудка.
Комплексное курортное лечение включает также минеральные ванны (углекислосероводородные), искусственные ванны (хвойно-жемчужные, йодо-бромные, каштановые и др.), души (циркулярный, Шарко) которые оказывают седативное действие, улучшают кровообращение внутренних органов, нейроэндокринную регуляцию.
Не менее важным компонентом комплексного лечения является грязелечение. Оно повышает сопротивляемость слизистой оболочки желудка и двенадцатиперстной кишки переваривающему действию желудочного сока, улучшает моторику гастродуоденальной области, кровообращение и микроциркуляцию в желудке.
Применение аппаратной физиотерапии: магнитотерапия, лекарственные форезы, КВЧ-терапия, синусомоделированные токи, магнитотурботрон, способствуют улучшению трофики желудка и двенадцатиперстной кишки, моторно-эвакуаторной функции, кровообращению и микроцupкуляции слизистой оболочки желудка двенадцатиперстной кишки.
В комплексном лечении язвенной болезни важным фактором является диетическое питание. Диетический стол №1 показан при язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки в стадии затухающего обострения и ремиссии.
Общая характеристика диеты: физиологическое содержание белков, жиров и углеводов, ограничение поваренной соли, умеренное ограничение механических и химических раздражителей ЖКТ, уменьшение стимуляторов желудочной секреции, веществ, длительно задерживающихся в желудке.
Химический состав и энергоценностъ: белков 90-100 г, жиров 90 г (из них — 25 г растительного происхождения), углеводов 300-400 г, свободной жидкости 1,5-2,0 л, поваренной соли 6-8 г.
Энергетическая ценность: 2600-2800 ккал.
Масса суточного рациона: 2,5-3 кг.
Температура пищи: горячих блюд — 57-62°С, холодных — не ниже 15°С.
Технология приготовления пищи: блюда готовят в отварном, протертом виде или на пару, некоторые блюда допустимы в запеченном виде.
В комплексное лечение входит лечебная физкультура, бассейн, климатотерапия.
Специализированное лечение больных оказывает многообразное воздействие на организм, способствует улучшению общего состояния, повышению и восстановлению трудоспособности, достигается стойкая ремиссия заболевания.
Противопоказания!Все лечебные процедуры назначает лечащий врач с учетом показаний и противопоказаний к курортному лечению.
Вода и язва желудка.
Народная медицина, как и традиционная едины во мнении, что при язве желудка полезно питье обычной и минеральной воды. Правильно подобранный напиток и схема лечения помогут избавиться от симптомов болезни, рубцеванию язвы и восстановлению тканей. Вода помогает снизить кислотность и восстанавливает работоспособность пищевода. Метод лечения водой совершенно безопасен и действенен при соблюдении рекомендаций врача.
Первым делом необходимо уменьшить кислотность желудка, что приведет к успокоению язвы желудка. Известно, что чистая вода помогает бороться со множеством болезней ЖКТ, так как слизистая желудка имеет в своем составе до 98% воды и только 2% муцинов. Повышенный рН нейтрализуется бикарбонатом натрия, который задерживает жидкость, в результате чего появляются соли, изменяющие функциональность муцинов. Из-за уязвимости слизи и появляются язвы на стенках желудка.
При язве необходимо правильное и обильное питье воды. Важным фактором является то, что вода для питья не должна быть кипяченной, обязательно сырой и выпивать воды необходимо не меньше двух литров в день. Кислотность желудка при таком методе профилактики не имеет значения и отсутствует необходимость применения каких-либо медикаментозных средств. Минеральную воду перед питьем необходимо подогреть, для уменьшения симптомов болезни.
Для терапии язвенной болезни применяют различные виды воды:
— Серебряную.
— Медовую.
— Питьевую сырую, чистую воду.
— Минеральную воду.
От степени развития язвенной болезни зависит длительность лечения. Необходимо употреблять теплую воду, рассчитанную в пропорции 30 мл на 1 кг веса пациента. Употребление воды нужно разделить на шесть приемов и пить воду за 20 минут до приема пищи, затем после еды и когда возникнет желание выпить воды. Существует другая рекомендация, подразумевающая питье одного стакана воды через каждый час.
Использование метода лечения язвы водой имеет свои противопоказания. Не рекомендуется питье воды при нарушениях эвакуаторной деятельности желудка. При острой фазе заболевания язвы желудка такая терапия также противопоказана. Запрещено пить холодную и содержащую химические соединения воду, вызывающую раздражение желудка.
Минеральная вода играет важную роль в профилактике и лечении язвенной болезни желудка. При правильном ее применении снижаются воспалительные процессы, нормализуется работа желудка и выработка кислоты. При язве желудка рекомендуется принимать лечебно-минеральные воды, такие как Боржоми, Джемрук, Славяновская и другие. Ессентуки рекомендуется применять если пониженная кислотность. Полезных минеральных вод великое множество, которые помогают в лечении и профилактики язвы желудка, но употребление таких вод необходимо только после консультации с лечащим врачом. Минеральную воду необходимо пить подогретую до сорока градусов, за полчаса до еды. Изначально необходимо выпивать по полстакана воды, постепенно доводя количество до одного литра, в течение четырех недель.
Поделиться: |
|
Лечение язвы желудка и двенадцатиперстной кишки в санаториях
Язва желудка и (или) двенадцатиперстной кишки – цикличное хроническое заболевание. Прием медикаментозных препаратов, изменение режима питания, отказ от пагубных привычек снимают болезненную симптоматику, и наступает обманчивое облегчение. Однако, чтобы исключить возникновение рецидивов, необходимо регулярно поддерживать организм санаторными процедурами.
Преимущества санаторного лечения
Основным преимуществом лечения язвы желудка на курортах является использование методик, не только благотворно влияющих на пищеварительную систему, но и способных устранить причины возникновения недуга, например, нормализовать работу нервной системы, так как стрессовые состояния – одна из основных причин возникновения язвенной болезни.
Методы лечения язвы в санаториях
В санаториях, специализирующихся на лечении заболеваний ЖКТ, используют комплексный подход к решению проблемы. Наибольший эффект достигается при сочетании природных лечебных факторов и физиотерапевтических процедур.
Питьевой режим
Все санатории при язвенной болезни предлагают пациентам прием минеральной воды внутрь. В зависимости от особенностей течения заболевания, наличия сопутствующих патологий пациенту назначается питьевой режим с использованием воды с необходимой минерализацией и химическим составом определенной температуры. Такое лечение способствует:
- улучшению моторики ЖКТ;
- усилению кровоснабжения стенок желудка;
- нормализации кислотности желудка и верхних отделов кишечника;
- ускорению заживления слизистой оболочки;
- очищению организма и лучшей эвакуации пищи.
Преимуществом санатория, в котором лечится язва двенадцатиперстной кишки или желудка, является наличие собственных источников природной минеральной воды.
Физиотерапия
Среди физиотерапевтических методик, применяемых в санаториях при лечении язвы желудка и двенадцатиперстной кишки, популярны процедуры с использованием магнитного, электромагнитного излучения, ультразвука, лазера. Наибольший эффект достигается при пунктурном использовании данных волн. Точечное воздействие на биологически активные точки способствует улучшению секреторной функции ЖКТ и заживлению язвы.
Другие методы лечения
Помимо курсового приема минеральной воды, санатории включают в комплекс лечебных мероприятий:
- Диетотерапию – полезное для желудка питание с исключением из рациона копченой, жареной, острой пищи, а также продуктов, содержащих трансжиры, консерванты и другие вредные составляющие.
- Пелоидотерапию – наложение на область эпигастрия грязевых аппликаций, снимающих воспаление и болевой синдром, а также улучшающих кровоснабжение слизистой желудка.
- Лечебную физкультуру – дыхательную гимнастику, специальные упражнения, плавание, терренкур, благотворно влияющих на работу ЖКТ.
- Прием целебных ванн, оздоровительных душей, способствующих снятию нервного напряжения, нормализации сна, повышению защитных сил организма.
- Фитотерапию – использование целебного растительного сырья для приготовления отваров, фитококтейлей, растворов для ингаляций, лечебных ванн.
Санатории, где лечат язву
ЦСТЭ рекомендует к посещению здравницы, в которых разработаны современные и эффективные программы лечения язвы желудка и двенадцатиперстной кишки и созданы прекрасные условия для комфортного отдыха:
Лечение язвы в санатории проводят, когда у заболевания отсутствуют признаки обострения. В противном случае терапия может вызвать обратный эффект.
Лечебно столовая минеральная вода
Теплую или холодную? Как принимать «Завьяловскую»?
Чтобы вышел углекислый газ, перед приемом минеральной воды дайте ей постоять в стакане около 20 минут или удалите газ, помешивая воду ложечкой.
Утро можно начинать с 1-2 стаканов минеральной воды. Выпивать теплую натощак залпом. Это обеспечит «запуск» кишечника и его своевременное опорожнение.
Стакан минеральной воды можно также принимать за 30 минут до обеда и ужина. Пить медленно. А после еды через 2,5 часа — стакан питьевой воды.
Если ваша программа снижения веса включает занятия спортом — в середине занятий и после них тоже полезно принять стакан минералки.
Почти при всех заболеваниях пить минеральную воду нужно медленно, небольшими глоточками, но при язве желудка и повышенной кислотности желудочного сока воду следует пить большими глотками.
Температура минеральной воды тоже имеет значение (неспецифическое):
- Горячую воду (40-50°C) применяют при гастритах с повышенной кислотностью, язвенной болезни.
- Холодная вода (10-15°C) полезнее, если у больного атония кишечника, склонность к запорам (она усиливает перистальтику желудка и кишечника, способствует спазму желчных путей).
- Теплая вода (33—40°C) оказывает спазмолитическое, болеутоляющее действие (способствует снятию спазма и удалению слизи).
- при пониженной секреции — за 10-20 минут до еды,
- при повышенной секреции — за 1-2 часа до еды,
- при нормальной секреции — за 40 минут до еды.
В отдельных случаях, например, если необходим дренаж желчных ходов, минеральную воду принимают натощак по 400 — 500 мл. Пить её рекомендуется в два приёма с перерывом в 25 — 40 минут.
Все статьи
Другие статьи
04.12.13
Отличается уникальной насыщенностью магнием — более 400 мг/л, кальцием — более 400 мг/л (обычно мине…
04.12.13
Минеральные воды различного химического состава и минерализации являются одним из основных компонент…
18.04.14
№ | Наименование медицинской процедуры | Количество | |
---|---|---|---|
14 дней | 21 день | ||
1 | Осмотр лечащего врача первичный | 1 | 1 |
2 | Осмотр лечащего врача повторный | 2 | 3 |
3 | Термометрия общая | 2 | 3 |
4 | Измерение роста | 1 | 1 |
5 | Измерение массы тела | 2 | 3 |
6 | Регистрация электрокардиограммы. | 1 | 1 |
Расшифровка, описание и интерпретация электрокардиографических данных | 1 | 1 | |
7 | Общий (клинический) анализ крови | 1 | 1 |
8 | Анализ мочи общий | 1 | 1 |
9 | Исследование уровня глюкозы в крови, или | 1 | 1 |
исследование общего билирубина в крови, или | 1 | 1 | |
исследование уровня холестерина в крови, или | 1 | 1 | |
исследование кала на скрытую кровь. или | 1 | 1 | |
исследование активности ферментов, или | 1 | 1 | |
исследование минерального обмена, или | 1 | 1 | |
копрограмма, или | 1 | 1 | |
исследование уровня общего белка | 1 | 1 | |
10 | Рентгенография (флюорография) органов грудной клетки | 1 | 1 |
11 | Эндоскопическое исследование органа желудочно-кишечного тракта | 1 | 1 |
12 | Ультразвуковое исследование забрюшинного пространства | 1 | 1 |
13 | Воздействие климатом | 14 | 21 |
14 | Терренкур | 12 | 18 |
15 | Назначение диетической терапии при заболеваниях пищевода, желудка и двенадцатиперстной кишки, кишечника | 1 | 1 |
16 | Психотерапия | 6 | 8 |
17 | Рефлексотерапия | 6 | 8 |
18 | Прием минеральной воды 3 раза в день | 12 | 18 |
19 | Ванны минеральные, или | 6 | 8 |
ванны жемчужные (хвойно-жемчужные, ароматические), или | 6 | 8 | |
сухие углекислые ванны, или | 6 | 8 | |
душ лечебный (циркулярный, восходящий) | 6 | 8 | |
20 | Воздействие лечебной грязью при болезнях пищевода, желудка и двенадцатиперстной кишки, или | 6 | 8 |
введение ректальных грязевых тампонов при болезнях толстого кишечника | 6 | 8 | |
21 | Массаж при заболеваниях пищевода, желудка и двенадцатиперстной кишки, или | 6 | 8 |
подводный душ-массаж | 6 | 8 | |
22 | Воздействие диадинамическими токами, или | 6 | 8 |
электросон, или | 6 | 8 | |
воздействие ультразвуковое при болезнях пищевода, желудка и двенадцатиперстной кишки, или | 6 | 8 | |
воздействие электрическим полем УВЧ, или | 6 | 8 | |
воздействие синусоидальными модулированными токами (СМТ), или | 6 | 8 | |
электрофорез лекарственных средств при заболеваниях желудка и двенадцатиперстной кишки, или | 6 | 8 | |
воздействие высокочастотными электромагнитными полями (индуктотермия), или | 6 | 8 | |
воздействие электромагнитным излучением сантиметрового диапазона (СМВ-терапия), или | 6 | 8 | |
воздействие интерференционными токами, или | 6 | 8 | |
воздействие магнитными полями | 6 | 8 | |
23 | Лечебная физкультура при заболеваниях пищевода, желудка и двенадцатиперстной кишки, или | 10 | 10 |
лечебная физкультура при заболеваниях кишечника | 10 | 10 | |
24 | Введение лекарственных средств с помощью клизмы при болезнях толстого кишечника, или | 6 | 8 |
кишечное орошение минеральной водой или лекарственными средствами при болезнях толстого кишечника | 2 | 3 | |
25 | Профилактический осмотр врачом-стоматологом | 1 | 1 |
Питьевое лечение
Питьевое лечение. Минеральную воду надо пить у источника. Этим обеспечивается полная сохранность физических, химических и других ее свойств. Кроме того, питье у источника сочетается с прогулкой и воздействием климатических факторов на человека. Если по каким-либо причинам пить воду у источника не представляется возможным, то пьют ее в санатории.
Питьевое лечение минеральными водами санаториях Ессентуков проводят о зависимости от характера заболевания желудка. Если секреция и кислотность желудочного сока понижены, то назначают воду, оказывающую стимулирующее действие на желудочную секрецию. С этой целью принимают хлоридно-натриевую воду или гидрокарбонатно-хлоридко-натриевую, особенно содержащую углекислоту (Ессентуки № 17, Арзни, Поляна Квасова и др.). При хроническом гастрите с повышенной секрецией и кислотностью, а также при язвенной болезни обычно рекомендуют гидрокарбонатно-сульфатные или гидрокарбонатно-натриевые минеральные воды с выраженным тормозящим действием — Ессентуки № 4, Боржоми, Исти-су, Смирновскую, Славяновскую и др.
В начале лечения, особенно при наклонности больного к поносу и при повышенной чувствительности его желудка, назначают минеральную воду по 1/4-1/2 стакана в теплом виде. После адаптации дозу увеличивают до полного стакана. Прием воды обычно назначают три раза в день, каждый раз перед едой (завтраком, обедом и ужином).
При хроническом гастрите с пониженной секрецией и кислотностью прием минеральной воды обычно назначают за 10-20 минут до еды (температура 25-30°). При хроническом гастрите с резким понижением секреции и отсутствием свободной соляной кислоты минеральную воду (комнатной температуры 25-30°) принимают во время еды. При хроническом гастрите с нормальной кислотностью рекомендуют пить минеральную воду за 45 минут до еды (в теплом виде). Наконец, при хроническом гастрите с повышенной секрецией и кислотностью назначают прием минеральной воды в подогретом виде (38-40°) за 1,5 часа до приема пищи.
При хроническом гастрите с пониженной секрецией и кислотностью, но с ускоренной эвакуацией (быстрым переходом пищи из желудка в кишечник) минеральную воду пыот непосредственно перед едой или во время еды. При хроническом гастрите с пониженной секрецией и кислотностью, но с замедленной эвакуацией или при явлениях атонии (пониженный тонус желудка) или при опущении желудка минеральную воду пьют за 30-40 минут до еды.
При хроническом гастрите с пониженной секрецией и кислотностью рекомендуют медленное (глотками) питье газированной минеральной воды. Это обеспечивает более длительное действие на слизистую оболочку желудка. Нахождение минеральной воды в желудке способствует удалению слизи и снижению воспалительного процесса. Определенный прием минеральной воды предупреждает также возникновение неприятного чувства тяжести в подложечной области, которое нередко отмечается при быстром ее питье.
Однако при болях в животе, при сопутствующих заболеваниях печени, желчных путей и кишечника минеральная вода должна быть теплой (38-40°).
При хроническом гастрите с повышенной секрецией и кислотностью пить воду надо теплой, подогретой до 40°, чтобы из нее ушел углекислый газ, который действует стимулирующим образом на секрецию желудка. К тому же подогретая минеральная вода уменьшает боль.
При гастрите с повышенной секрецией полезно пить воду большими глотками с целью быстрого продвижения ее в кишечник для предупреждения возбуждающего действия ее на секрецию желудка. При выраженном поносе питьевое лечение временно прекращают и возобновляют лишь по его окончании.
При хроническом гастродуодените (воспаление слизистой оболочки желудка и двенадцатиперстной кишки), язвенной болезни или при болезни оперированного желудка питьевое лечение проводят строго индивидуально по назначению врача.
Как пить воду? Минеральную воду надо пить медленно, в течение 2-5 минут, небольшими глотками, прогуливаясь в галерее или в парке. Этот метод рекомендуется больным с пониженной секрецией и обильным образованием слизи в желудке. При наличии болей в желудке рекомендуется пить горячую минеральную воду (40-45°С). Она уменьшает спазм гладкой мускулатуры, оказывает благоприятное влияние на моторную и эвакуаторную функции желудка. Когда минеральная вода имеет низкую температуру, ее необходимо подогреть. Если во время прогулки вода в стакане остыла, то ее полезно заменить. В домашних условиях минеральную воду можно подогревать добавлением в нее 50 мл крутого кипятка простой питьевой воды.
Суточный прием минеральной воды может колебаться в пределах 600- 1200 мл. Величина разовой и суточной дозировки минеральной воды должна определяться врачом, который решает этот вопрос, учитывая общее состояние организма и, в частности, сердечно-сосудистой системы и печени.
Длительность курса питьевого лечения зависит от субъективного и объективного состояния больного и реакции организма на лечение. Проводится он в течение четырех недель, но у больных, трудно поддающихся лечению, курс может быть доведен до полутора месяцев.
Питьевое лечение минеральными водами больных язвенной болезнью преследует цель, прежде всего, уменьшить кислотность и пептическую активность желудочного сока и усилить сопротивляемость слизистой оболочки желудка и двенадцатиперстной кишки. В связи с этим внутреннее применение минеральных вод следует рассматривать как весьма эффективный метод терапии. Минеральная вода должна оказывать минимальное раздражающее действие на нервные приборы слизистой желудка (механо-, хемо- и терморецепторы), тормозить образование, соляной кислоты и желудочных ферментов, нормализовать двигательную деятельность желудка, в частности устранять пилороспазмы.
Для достижения подобного терапевтического эффекта в санатории Россия больным язвенной болезнью назначают такие минеральные воды, которые не оказывают раздражающего действия на желудочные железы, обладают выраженным дуоденальным (тормозящим) действием на секреторную функцию желудка. Этим требованиям отвечают минеральные воды малой минерализации без углекислоты или с малым ее содержанием, с преобладанием гидрокарбонатного и сульфатного ионов, имеющих слабокислую, нейтральную или щелочную реакцию.
Минеральные воды назначают больным язвенной болезнью обязательно в подогретом виде (38-40°). Это позволяет достичь более выраженного антиспастического эффекта, а также уменьшить содержание в воде углекислоты.
В период обострения язвенной болезни питьевое лечение больным не назначается. В этот период проводится строгое противоязвенное лечение (диетическое и медикаментозное). После стихания острых проявлений язвенной болезни назначается питьевое лечение по щадящей методике. Применяются маломинерализованные воды в подогретом виде в количестве 100 мл за полтора-два часа до еды, вначале 1-2 раза в день, а в дальнейшем при значительном улучшении клинической картины заболевания количество минеральной воды может быть увеличено до 150-200 мл, назначаться 2-3 раза в день.
Больным язвенной болезнью в период ремиссии питьевое лечение назначается с первых же дней по приезду в санаторий Украина в Ессентуках. Однако целесообразнее начинать питьевое лечение постепенно, т. е. с малых доз (100 мл) 1-2 раза в день и постепенно доводя количество разовой дозы до 200 мл 3 раза в день. Указанной группе больных допустимо назначение хлоридных, гидрокарбонатных и сульфатных минеральных вод не только малой, но и средней минерализации (до 15 г/л), содержащих углекислоту до 2,5 г.
Противопоказанием к питьевому лечению минеральными водами является обострение заболевания желудка, сопровождающееся тошнотой, рвотой, резкими болями, нарушением моторно-эвакуаторной деятельности желудка любого происхождения. Само собой разумеется, что при назначении питьевого лечения должны учитываться и другие общие и специальные противопоказания, связанные с сопутствующими страданиями, но это дело лечащего врача.
Как это влияет на ваши зубы, кости и желудок
Потому что слишком много может отрицательно сказаться на ваших зубах, костях и желудке.
Хотя время от времени можно выпить стакан газированной или газированной воды, вода из-под крана остается самой популярной полезной жидкостью. Употребление большей части потребляемой вами воды в виде газированной воды вполне может нанести определенный вред, хотя по-разному влияет на разные части вашего тела. Вот как это сделать:
Ваши зубы
Газированная вода производится путем смешивания углекислого газа (CO²) с водой под давлением.Полученная газированная вода содержит слабую кислоту, известную как угольная кислота, которая снижает общий pH. Обычная вода имеет нейтральный pH при 7, тогда как средняя газированная вода слегка кислая при pH 5-6. Все, что ниже критического уровня pH 5,5, может вызвать деминерализацию эмали и риск разрушения зубов. Питье через соломинку поможет сохранить зубную эмаль.
Ваши кости
Теория состоит в том, что фосфаты или фосфорная кислота, содержащиеся в некоторых газированных напитках, могут мешать усвоению кальция, но исследования до сих пор не показали сильной связи между избытком фосфатов в рационе и остеопорозом.Опять же, необходимы дальнейшие исследования, прежде чем мы сможем заявить о своем здоровье. Хорошая новость заключается в том, что простая газированная вода не содержит фосфатов, в отличие от колы, диетических безалкогольных напитков колы и чая со льдом в бутылках, которые содержат высокий уровень фосфорной кислоты.
Ваш желудок
Хотя необходимо провести дополнительные исследования, чтобы определить долгосрочные результаты употребления простой газированной воды, на данном этапе влияние на слизистую оболочку желудка оказывается минимальным, если вообще.
Однако было показано, что подслащенные газированные напитки увеличивают выработку кислоты в желудке, что может привести к воспалению слизистой оболочки и, возможно, к развитию язвы желудка.Если у вас есть ранее существовавшее заболевание, такое как гастрит или рефлюкс, лучше всего свести к минимуму любые раздражители, включая газированные напитки, особенно потому, что они вызывают отрыжку, вызывая отрыжку кислоты в пищевод.
Всегда читайте этикетку
Многие газированные воды заявляют, что они «полезны», но содержат подсластители, которые придают им оттенок вкуса. Значение выше нуля для энергии, сахара или углеводов на этикетке указывает на добавление сахара. Хотя содержание натрия в простой газированной воде довольно низкое (5 мг / 250 мл), это незначительный вклад в рекомендуемое адекватное потребление натрия (460-920 мг в день) — лучше всего использовать негазированную воду.
Есть вопрос для Кейт? Напишите нам по адресу [email protected].
Раз уж мы говорим о воде, правда ли, что вы можете пить слишком много ее? Кроме того, оздоровительный напиток, который скоро заменит вашу кокосовую воду.
Знаете кого-нибудь, кому бы это понравилось? Поделись с ними.
Все продукты, представленные в этой статье, выбираются нашими редакторами, которые не являются фаворитами. Если вы что-то купите, мы можем получить скидку.Учить больше.
Здоровье воды — обезвоживание: причина пептических язв?
Используйте «водную терапию» для предотвращения язвенной болезни: употребление 2 литров воды в день и большого стакана воды перед едой может уменьшить язвенную болезнь
По оценкам Национального института здоровья (NIH), примерно у каждого десятого американца в какой-то момент жизни развивается язвенная болезнь. Язвенная болезнь — это язва на слизистой оболочке пищевода, желудка или двенадцатиперстной кишки.Пептические язвы имеют разные названия в зависимости от их расположения в желудочной системе: язва желудка (язвенная болезнь, развивающаяся в желудке), язва двенадцатиперстной кишки (язва, которая возникает в верхней части тонкой кишки) и язва пищевода (язва желудка). язва, расположенная в нижней части пищевода, которая обычно связана с гастроэзофагеальной рефлюксной болезнью).
Разногласия по поводу причин пептической язвы: бактерии Helicobacter Pylori vs.Обезвоживание и стресс
Существуют разные мнения о причинах возникновения язвенной болезни. Традиционные врачи придерживаются мнения, что вопреки распространенному мнению: язвенная болезнь не вызвана стрессом, острой пищей или чрезмерным употреблением алкоголя, хотя эти факторы, безусловно, могут усугубить уже существующую язву. Скорее, некоторые пептические язвы были связаны с длительным использованием определенных лекарств (например, нестероидных противовоспалительных средств, таких как аспирин и ибупрофен) и злокачественными опухолями желудка или поджелудочной железы.Многие исследователи и врачи считают, что большинство пептических язв вызвано бактериальной инфекцией Helicobacter pylori (H. pylori), которая атакует и ослабляет защитные слизистые оболочки желудка, пищевода и двенадцатиперстной кишки, позволяя желудочной кислоте (содержащей соляную кислоту, HCl) примерно при pH от 1 до 2), чтобы проникнуть в чувствительную подкладку под ней. И желудочная кислота, и H. pylori раздражают слизистую оболочку и вызывают язву. Ученые обнаружили, что H. pylori может выжить в жесткой кислой среде желудка, потому что он выделяет ферменты, нейтрализующие кислоту, позволяя этой спиралевидной бактерии поселиться в «безопасной» области — защитной слизистой оболочке, а затем закапываться. через подкладку.
Другая школа мысли считает, что триггеры или причины язвенной болезни — это обезвоживание и стресс. Исследователи, которые придерживаются этого мнения, отмечают, что приблизительно 40 процентов населения являются носителями бактерии H. pylori в Соединенном Королевстве (Великобритания), но только у одного из пяти человек, инфицированных этой бактерией, на самом деле развиваются пептические язвы. Таким образом, H. pylori сама по себе не является причиной язвенной болезни. Практикующие врачи, придерживающиеся этой теории, считают, что, когда люди не пьют достаточно воды, слизистая оболочка их желудка и двенадцатиперстной кишки не может образовывать толстый слой слизи, необходимый для защиты от очень кислого желудочного сока.Таким образом, слизистый слой более подвержен атакам бактерии H. pylori.
Water Health — Могут ли бактерии в моей колодезной воде вызвать язву желудка?
Загрязнение воды в бутылках
Содержит ли неочищенная колодезная вода бактерии, вызывающие язву желудка? Короче говоря, да, но только если колодезная вода заражена бактерией Helicobacter pylori. В настоящее время известно, что эта бактерия связана с высоким процентом язв желудка у людей.
Мы поговорим о язве желудка и некоторых вещах, которые, как считается, вызывают их (печально известная теперь Helicobacter pylori, особая бактерия и влияние эмоционального стресса). Но сначала нам нужно получить немного общей информации о том, что такое язва, что происходит в желудке, а затем мы поговорим о том, как может образоваться язва. Язва — это эрозия ткани (от мелкой до глубокой, воспаленная, обычно в некоторой степени круговое углубление в ткани).Перфорированная язва — это язва, которая стала достаточно глубокой, чтобы полностью проникнуть в слои ткани, и которая открывается в ткани под ними.
Хотя язвы могут возникать практически где угодно, наиболее знакомы нам те крошечные неглубокие язвы, которые часто возникают из-за вирусной инфекции, которая иногда возникает внутри нашего рта (под нижней губой или внутри щеки). Жало, как черт, не так ли? Эти язвы обычно проходят через короткое время.Однако другой вид язвы может вызывать легкие (хронический гастрит) или тяжелые (язвенная болезнь) проблемы со здоровьем — это еще один вид язвы, с которым мы, возможно, знакомы — язва желудка и двенадцатиперстной кишки. Язва желудка и язва двенадцатиперстной кишки (в самом низу структуры желудка — первые несколько дюймов от начала тонкой кишки) представляют собой эрозии ткани (слизистой), которая выстилает (формирует внутреннюю поверхность) желудочно-кишечного тракта. тракт.
Все части тела, подверженные воздействию окружающей среды, кроме кожи, имеют эту защитную подкладку.Ткань слизистой оболочки в основном состоит из так называемых эпителиальных клеток, прикрепленных к так называемой базальной мембране. Эпителиальные клетки слизистой оболочки выделяют слизь — теперь вы знаете, почему эта ткань называется слизистой тканью … слизистая — это действительно липкое вещество, о котором никто не любит говорить — но который очень защищает — помогает предотвратить попадание потенциально вредных маленьких тварей. «захват» и открытие магазина в областях, очень близких к нашим очень важным частям … В зависимости от того, где находится слизистая оболочка, например.g., дыхательных, желудочно-кишечных, мочевыводящих или половых путей или глаз, количество слизи и различные вещества, выделяемые в этой жидкости, немного различаются.
В 1982 году это ограниченное представление о причине язвы желудка начало меняться. Врач из Австралии Барри Маршалл не совсем поверил аргументам о стрессе. Биопсии (небольшие кусочки ткани) были получены из слизистой оболочки желудка пациентов, страдающих хроническим гастритом и более тяжелым заболеванием — язвенной болезнью.Ранее неидентифицированная бактерия Helicobacter pylori была культивирована (выделена и выращена) из этих биоптатов. В настоящее время считается, что этот бактериальный организм является причиной язвы желудка и двенадцатиперстной кишки. Приблизительно 95% людей с язвой желудка и 100% людей с хроническим гастритом имеют эту бактерию в желудке. У здоровых людей не обнаружен (язвы желудка и гастрита).
Известно, что эта бактерия связывается со структурой группы крови O (определенной серией сахаров), присутствующей на эпителиальных клетках желудка (у O-положительного человека вероятность развития язвы желудка примерно в два раза выше, чем у O-отрицательных людей). .Вы можете спросить, как этот организм выживает в суровых условиях желудка? H. pylori может преобразовывать вещество, называемое мочевиной, в диоксид углерода (газ) и другое вещество, называемое аммиаком. Мочевина — это нормальный химический продукт биохимического пути, который клетки нашего тела используют для удаления многих азотсодержащих соединений из нашей системы (выводятся с мочой). Если бы не этот путь, токсичное соединение, называемое аммиаком (вы знакомы с аммиаком — мы используем его в водных растворах — водных растворах — для очистки), накапливалось бы в нашей системе в результате нормального разложения азотсодержащих веществ ( весь белок, который мы едим, содержит азот в форме аминокислот — строительных блоков белков) и может вызвать смерть.H. pylori продуцирует очень активную форму фермента уреазы.
Топ 5 загрязнителей воды
Аммиак, образующийся в результате действия уреазы на мочевину, нейтрализует кислоту (это похоже на добавление пищевой соды в лимонный сок) в области роста бактерий и позволяет бактериям укорениться и расти (инфекция). внутри эпителиальной ткани. Организм производит вещества, которые вызывают повреждение тканей, а система иммунной защиты организма, борясь с инфекцией, вызывает дальнейшее локальное повреждение тканей.Через некоторое время поврежденная (эродированная) ткань больше не может должным образом выделять слизь, что позволяет кислоте и ферментам также начать атаковать ткань. В конце концов, слой слизистой оболочки разрушается, и доступ этих агрессивных веществ и воздействий к нижележащим тканевым слоям устанавливается и поддерживается. Это местное повреждение и возникающая в результате эрозия ткани представляет собой язву.
Если вы страдали от повторяющихся язв, которые, кажется, проходят каждый раз, когда вы принимаете антибиотики по поводу другой проблемы, возможно, эта бактерия попала в ваш водопровод.Простого метода проверки на наличие этого организма в воде пока нет. Любой из стандартных методов дезинфекции убьет этот организм, если он присутствует в вашей воде. Стресс по-прежнему ассоциируется с язвами, но у некоторых людей язвы исчезают, когда они переходят на муниципальную водопроводную систему или другое санитарно-питьевое водоснабжение. В настоящее время известно, что эта бактерия связана с высоким процентом язв желудка у людей.
Так какое отношение это имеет к питьевой воде? Недавнее исследование Университета штата Пенсильвания (1999) выявило связь Helicobacter pylori с колодезной водой и клинической инфекцией у людей, пьющих из этого источника.Helicobacter pylori — это организм, связанный с причиной по крайней мере 75 процентов всех язв желудка и двух типов рака желудка. Исследователи из Пенсильвании в Гаррисбурге установили связь между водой, содержащей H. pylori, и инфекцией, проведя испытания частных колодцев, снабжающих питьевой водой отдельные домохозяйства.
Интервью с жителями, которые пили воду, выявили статистически значимую корреляцию между наличием бактерии и случаями язвы желудка.Бейкер сказал, что питьевая вода обычно считается безопасной при отсутствии бактерий группы кишечной палочки. Но бактерия, вызывающая язву, была обнаружена в образцах воды, не содержащей колиформ, добавила она. «На самом деле это означает, что наши текущие методы тестирования питьевой воды могут утверждать, что с водой все в порядке, в то время как H. pylori действительно может присутствовать», — сказала она. Результаты исследования, опубликованные на собрании Американского общества микробиологов в Чикаго, были охарактеризованы командой как первые, которые «продемонстрировали прямую связь между загрязненной питьевой водой и язвой желудка».«
Бейкер сказал, что в исследовании участвовали частные источники неочищенной воды, а не муниципальные источники воды, которые с меньшей вероятностью могут содержать организм. Работая с Джоном Хегарти, аспирантом программы по контролю за загрязнением окружающей среды штата Пенсильвания в Гаррисбурге, Бейкер ранее идентифицировал присутствие H. pylori в скважинах и поверхностных водах в регионе более года назад.
В этом исследовании бактерия была обнаружена более чем в 75 процентах протестированных проб поверхностных вод.Это исследование представляет собой первый отчет о живом H. pylori в поверхностных водах в Соединенных Штатах, демонстрируя важный резервуар для этого организма за пределами человеческого тела. В Соединенных Штатах ежегодно возникает около 2,5 миллиона новых случаев инфицирования H. pylori. Язвенная болезнь поражает почти 5 миллионов человек, а затраты на лечение превышают 5 миллиардов долларов, не считая косвенных затрат, связанных с потерей работы и производительностью. Приблизительно 16 000 смертей ежегодно приписываются осложнениям язвенной болезни.
Если вы подозреваете, что вода из колодца заразила вас или вашего близкого бактериями H.pylori, лучше всего обратиться за медицинской помощью, а также изучить способы безопасной обработки источника воды из колодца. Также важно отметить, что H. pylori является наиболее частой, но не единственной причиной язвенной болезни.
Помимо H. pylori, к другим причинам пептических язв или факторам, которые могут их усугубить, относятся: Регулярное использование болеутоляющих средств.Нестероидные противовоспалительные препараты (НПВП) могут вызывать раздражение или воспаление слизистой оболочки желудка и тонкой кишки. Лекарства доступны как по рецепту, так и без рецепта. НПВП, отпускаемые без рецепта, включают аспирин, ибупрофен (Адвил, Мотрин и другие), напроксен (Алив) и кетопрофен (Орудис КТ). Чтобы избежать расстройства пищеварения, принимайте НПВП во время еды. НПВП подавляют выработку фермента (циклооксигеназы), вырабатывающего простагландины. Эти гормоноподобные вещества помогают защитить слизистую оболочку желудка от химических и физических повреждений.Без этой защиты желудочная кислота может разрушить слизистую оболочку, вызывая кровотечение и язвы.
Курение.
Никотин в табаке увеличивает объем и концентрацию кислоты в желудке, увеличивая риск язвы. Курение также может замедлить заживление во время лечения язвы.
Чрезмерное употребление алкоголя.
Алкоголь может раздражать и разъедать слизистую оболочку желудка и увеличивает выработку желудочной кислоты.Однако неясно, может ли только это перерасти в язву или должны присутствовать другие способствующие факторы, такие как бактерии H. pylori или лекарства, вызывающие язву, такие как НПВП.
Наконец … Стресс.
Хотя стресс сам по себе не является причиной язвенной болезни, он является одним из факторов. Стресс может усугубить симптомы язвенной болезни и, в некоторых случаях, замедлить заживление. Вы можете подвергнуться стрессу по ряду причин: эмоционально тревожное обстоятельство или событие, операция или физическая травма, например ожог или другая серьезная травма.
генотипирование и свойства устойчивости к противомикробным препаратам
BMC Microbiol. 2016; 16: 40.
, , , иРеза Ранджбар
Исследовательский центр молекулярной биологии, Университет медицинских наук Бакияталла, Тегеран, Иран
901 Фахам Центр молекулярных исследований, Университет медицинских наук Сабзевар, Сабзевар, Иран
Нематолла Джонаиди-Джафари
Центр медицинских исследований, Университет медицинских наук Бакияталла, Тегеран, Иран
Эбрахим Рахеними
, Факультет пищевой гигиены ветеринарной медицины, филиал Шахрекорд, Исламский университет Азад, Шахрекорд, Иран
Исследовательский центр молекулярной биологии, Университет медицинских наук Бакияталла, Тегеран, Иран
Центр клеточных и молекулярных исследований, Университет медицинских наук Сабзевар, Сабзевар, Иран
Health Resea Центр rch, Университет медицинских наук Бакияталла, Тегеран, Иран
Кафедра гигиены пищевых продуктов, факультет ветеринарной медицины, филиал Шахрекорд, Исламский университет Азад, Шахрекорд, Иран
Автор, отвечающий за переписку.Поступило 18 декабря 2015 г .; Принято 29 февраля 2016 г.
Открытый доступ Эта статья распространяется в соответствии с условиями Международной лицензии Creative Commons Attribution 4.0 (http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/), которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе, при условии вы должным образом указываете первоначального автора (авторов) и источник, предоставляете ссылку на лицензию Creative Commons и указываете, были ли внесены изменения. Отказ от лицензии Creative Commons Public Domain Dedication (http: // creativecommons.org / publicdomain / zero / 1.0 /) применяется к данным, представленным в этой статье, если не указано иное. Эта статья цитировалась в других статьях PMC.Реферат
Предпосылки
До сих пор фекально-оральный и орально-оральный пути были наиболее широко известными путями передачи H. pylori , поэтому загрязненная вода может играть важную роль в передаче H. pylori людям. Генотипирование с использованием маркеров вирулентности H. pylori — один из лучших подходов к изучению корреляций между H.pylori из разных образцов. Настоящее исследование было проведено для изучения vacA , cagA , cagE , oipA , iceA и babA2 генотипирования и свойств устойчивости к противомикробным препаратам H. pylori , выделенных из образцов минеральной воды в бутылках. Ирана.
Результаты
Из 450 исследованных образцов 8 образцов (1,77%) были заражены H. pylori . Марка С минеральной воды в бутылках имела наибольшее распространение — H.pylori (3,63%). В образцах бутилированной минеральной воды за июль месяц был самый высокий уровень заражения H. pylori (50%). Штаммы H. pylori имели самый высокий уровень устойчивости к метронидазолу (62,5%), эритромицину (62,5%), кларитромицину (62,5%), амоксициллину (62,5%) и триметоприму (62,5%). Всего 12,5% штаммов были устойчивы к более чем 6 антибиотикам. VvacAs1a (100%), vacAm1a (87,5%), cagA (62,5%), iceA1 (62.5%), oipA (25%), babA2 (25%) и cagE (37,5%) были наиболее часто обнаруживаемыми генотипами. M1as1a (62,5%), m1as2 (37,5%), m2s2 (37,5%) и S1a / cagA + / IceA2 / oipA- / babA2- / cagE- (50%) были наиболее часто обнаруживаемыми комбинированными генотипами.
Выводы
Загрязненная минеральная вода в бутылках может быть источником вирулентных и устойчивых штаммов H. pylori . Тщательный мониторинг производства минеральной воды в бутылках может снизить риск заражения H.pylori в человеческую популяцию.
Ключевые слова: Helicobacter pylori , генотипирование, свойства устойчивости к антибиотикам, минеральная вода в бутылках, Иран
Общие сведения
В день миллионы людей используют питьевую воду, а в некоторых районах качество питьевой воды из-под крана невысокое. низкий, потребление бутилированной минеральной воды является обычным явлением. Бутилированная минеральная вода является богатым источником микроэлементов, меди, цинка и железа, а также магния, фтора, натрия и кальция.Их потребление является обычным делом в отелях, ресторанах, самолетах и других транспортных средствах, а также практикующие врачи обычно прописывают такие виды воды пациентам с недоеданием. Для питьевой воды в бутылках существует низкий риск передачи передающихся через воду патогенов и химических токсинов, что со временем увеличивает их потребление. В соответствии с этим, есть некоторые сообщения о загрязнении этих видов воды опасными патогенами, такими как Helicobacter pylori , Vibrio cholera , Salmonella typhimurium и Escherichia coli [1, 2].
H. pylori — грамотрицательная, микроаэрофильная и жгутиковая бактерия, которая известна как возбудитель аденокарциномы желудка, гастрита типа B и лимфомы лимфоидной ткани слизистой оболочки [3, 4]. Фактически, колонизация H. pylori и слизистой оболочки желудка является основной причиной язв желудка и двенадцатиперстной кишки [4]. Документированные данные показали, что около 50% населения мира инфицировано H. pylori [3, 5, 6]. Соответственно, его точные пути передачи и происхождение до сих пор неизвестны [7].Исходя из фекально-орального и орально-орального путей передачи H. pylori , зараженная вода может играть важную роль в распространении H. pylori среди людей [8, 9].
Колонизация и инвазия H. pylori в слизистую желудка зависит от ряда факторов вирулентности. Некоторые из наиболее важных факторов вирулентности этой бактерии — вакуолизирующий цитотоксин ( vacA ), индуцированный контактом с эпителиальным антигеном ( iceA ), ген, связанный с цитотоксином ( cag ), антигенсвязывающая адгезия группы крови ( babA ) и внешний воспалительный белок ( oip ) [10–13].Ген vacA является полиморфным и включает вариабельные сигнальные области (тип s1 или s2 ) и средние области (тип m1 или m2 ). Тип s1 дополнительно разделен на подтипы s1a , s1b и s1c , а m1 — на подтипы m1a и m1b . Ген iceA имеет два основных аллельных варианта: iceA1 и iceA2 , но их функции еще не ясны.Ген cagA был обнаружен в образцах, взятых из тяжелых случаев язвенной болезни [10–13]. CagE — это 1 из 6 генов, расположенных на острове патогенности, который, как было показано, индуцирует секрецию хемокинов, таких как интерлейкин IL-8, и вызывает воспаление [14]. Ген oipA играет важную роль в эффективном заселении бактериями слизистой оболочки [15]. Генотипирование с использованием этих маркеров вирулентности считается одним из лучших подходов для изучения взаимоотношений между H.pylori из разных образцов.
Эффективная антибактериальная терапия — один из лучших методов лечения инфекционных заболеваний, передающихся через воду. Инфекции, передающиеся через воду H. pylori , не являются исключением из этого принципа. Однако терапевтические протоколы стали несколько ограниченными из-за присутствия штаммов этой бактерии с множественной лекарственной устойчивостью [12, 13].
Потребление бутилированной минеральной воды очень распространено среди иранцев. Кроме того, распространенность H.pylori является значительным среди иранских источников инфекции и других мест в мире [11, 16–20]. Таким образом, необходимо изучить важную роль загрязненной воды как фактора риска передачи H. pylori . Эти важные моменты, а также отсутствие исследований в сообществе в отношении модели устойчивости к антибиотикам водного H. pylori , побудили нас провести настоящее исследование, чтобы изучить точный статус vacA , cagA , iceA , oipA , cage и baba2 статус генотипов и характер устойчивости к антибиотикам H.pylori из иранских образцов бутилированной минеральной воды.
Результаты
Всего было исследовано 450 проб минеральной воды в бутылках на предмет наличия H. pylori , его генотипов и свойств устойчивости к противомикробным препаратам. В таблице показано общее распределение H. pylori в образцах бутилированной минеральной воды 4 различных марок и разных сезонов из Ирана. Из 450 отобранных проб минеральной воды в бутылках 8 проб (1,77%) были загрязнены H.pylori . Результаты культуральных методов были подтверждены с помощью ПЦР на основе 16S рРНК . В образцах воды марки С была самая высокая распространенность (3,63%) H. pylori , а в образцах воды марки А — самая низкая (0,83%). Статистически значимая разница была замечена между распределением H. pylori в различных марках бутилированной минеральной воды ( P <0,05). Мы обнаружили, что в образцах, отобранных в летний сезон, больше всего бактерий (4.54%). Значительная статистическая разница наблюдалась в отношении распространенности H. pylori между теплым и холодным сезонами года ( P <0,05). Ежемесячное распределение H. pylori в пробах бутилированной минеральной воды показано на рис. Мы обнаружили, что июльские образцы бутилированной минеральной воды имели самый высокий уровень заражения H. pylori (50%).
Таблица 1
Общее распределение Helicobacter pylori в протестированных образцах бутилированной минеральной воды
Тип бутилированной минеральной воды | No.отобранных образцов | № изолятов Helicobacter pylori (%) | № изолятов, подтвержденных с помощью ПЦР на основе 16SrRNA (%) | |
---|---|---|---|---|
Бренды | A | 120 | 120 (0,8 a | 1 (0,83) a |
B | 110 | 1 (0,90) a | 1 (0,90) a | |
C 110 4 | 9040 ) b4 (3.63) b | |||
D | 110 | 2 (1.81) a | 2 (1.81) a | |
Всего | 450 | 8 (1.40775) 8 (1.40775) ) | ||
Сезоны | Весна | 112 | 1 (0,89) a | 1 (0,89) a |
Лето | 110 | 620 904 (4.54) b | ||
Осень | 113 | 1 (0.88) a | 1 (0,88) a | |
Зима | 115 | — | — | |
Всего | 450 | 8 (1.7740) | 9099
Месячная распространенность Helicobacter pylori в протестированных образцах бутилированной минеральной воды
Результаты анализа устойчивости к противомикробным препаратам изолятов H. pylori в тестируемых образцах бутилированной минеральной воды представлены в таблице. H. pylori Штаммы бутилированной минеральной воды обладают наивысшим уровнем устойчивости к ампициллину (75%), за ним следуют метронидазол (62,5%), эритромицин (62,5%), кларитромицин (62,5%), амоксициллин (62,5%) и триметоприм. (62,5%) противомикробные средства. Распространенность устойчивости к антибиотикам против моксифлоксацина, тинидазола и ципрофлоксацина составляла 25, 50 и 50% соответственно. Были статистически значимые различия в уровнях устойчивости к антибиотикам между ампициллином и цефсулодином ( P = 0.013), ампициллин и фуразолидон ( P = 0,018), кларитромицин и фуразолидон ( P = 0,029) и ампициллин и моксифлоксацин ( P = 0,027). Распространенность множественной лекарственной устойчивости штаммов H. pylori в пробах бутилированной минеральной воды показана на рис. Все 8 штаммов H. pylori были устойчивы по крайней мере к одному из протестированных антибиотиков. Наивысшие уровни устойчивости были обнаружены только у одного изолята, устойчивого к 10 антибиотикам.
Таблица 2
Модель устойчивости к противомикробным препаратам изолятов Helicobacter pylori протестированных образцов минеральной воды в бутылках
Бренды (количество положительных) | Структура устойчивости к антибиотикам (%) | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
AM10 Met5 | ER5 | CLR2 | AMX 10 | Lev5 | Cef30 | TRP25 | FZL1 | Mox5 | Tin4 | | CIP5 9040 1 9038 | | CIP5 9038 | CIP5 9038 a | 1 (100) a | 1 (100) a | 1 (100) a | 1 (100) a | — | — | — | — | — | — | | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
B (1) | 1 (100) a | 1 (100) a | 1 (100) a | 1 (100) a | 1 (100) a | 1 (100) a | — | 1 (100) a | — | — | 1 (100) a | 100) a | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
C (4) | 2 (50) a | 2 (50) a | 2 (50) a | 2 (50) a | 2 (50) a | 2 (50) a | 1 (25) b | 3 (75) a | 1 (25) b | 1 (25) b | 2 (50) a | 2 (50) a | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
D (2) | 2 (100) a | 1 (50) a | 1 (50 ) a | 1 (50) a | 1 (50) a | 1 (50) a | 1 (50) b | 1 (50) a | 1 (50) б | 1 (50) b | 1 (50) a | 1 (50) a | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Всего (8) | 6 (75) a, * | 5 ( 62.5) a | 5 (62,5) a | 5 (62,5) a | 5 (62,5) a | 4 (50) a | 2 (25) b | 5 (62,5) a | 2 (25) b | 2 (25) b | 4 (50) a | 4 (50) a |
Бренды (кол-во положительных) | Распределение различных генотипов (%) | ||||||||||||
---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
S1a | S1b | S1c | S2 | M1a | M1b | M2 | CagA | IceA1 | IceA2 | OipA | БабА2 | CAGE | |
A (1) | 1 (100) | — | — | 1 (100) | 1 (100) | — | 1 (100) | 1 (100) | 1 (100) | — | — | — | 1 (100) |
B (1) | 1 (100) | — | — | — | 1 (100) 1 (100)— | 1 (100) | 1 (100) | 1 (100) | — | — | 1 (100) | 1 (100) | |
C (4) | 4 ( 100) | 1 (25) | — | 2 (50) | 4 (100) | 1 (25) | 1 (25) | 2 (50) | 2 (50) | 1 (25) | 1 (25) | 1 (25) | 1 (25) |
D (2) | 2 (100) | 1 (50) | — | 1 (50) | 1 (50) | 1 (50) | 1 (50) | 1 (50) | 1 (50) | — | 1 (50) | — | — |
Всего (8) | 8 (100) | 2 ( 25) | — | 4 (50) | 7 (87.5) | 2 (25) | 4 (50) | 5 (62,5) | 5 (62,5) | 1 (12,5) | 2 (25) | 2 (25) | 3 (37,5) |
Таблица 4
Распределение комбинированных генотипов Helicobacter pylori , выделенных из протестированных образцов минеральной воды в бутылках
Генотипы | Распространенность (%) * | |||
---|---|---|---|---|
M1as1b | 1 (12,5) | |||
M1bs1a | 1 (12,5) | |||
M1bs1b | — | 9040 | ||
M2s1a | 2 (25) | |||
M2s1b | 1 (12,5) | |||
M2s1c | — | |||
M2s2 | ||||
M2s2 | 35) | |||
M1bs2 | 1 (12,5) | |||
M1am2 | 2 (25) | |||
M1bm2 | — | |||
CagA | 3 (37,5) | |||
CagE + | 3 (37,5) | |||
CagE- | 5 (62,5) | |||
IceA1 | 5 (62,5) | 5 (62,5) | 9038 Ice||
IceA1 IceA2 | — | |||
OipA + | 2 (25) | |||
OipA- | 6 (75) | |||
9038babA2 | 6 (75) |
Таблица 5
Комбинированные vacA , cagA , cagE , iceA , babA2 и oipA выделенные генотипы Helicobacter pylori из протестированных образцов минеральной воды
Комбинированный генотип * | Частота (%) | |||||
---|---|---|---|---|---|---|
S1a / cagA + / IceA1 / oipA + / babA2 + / cagE + | 1 (12.5) | |||||
S1a / cagA + / IceA1 / oipA- / babA2 + / cagE + | 2 (25) | |||||
S1a / cagA- / IceA1 / oipA- / babA2 + / cagE + | S1a / cagA + / IceA1 / oipA + / babA2- / cagE + | 2 (25) | ||||
S1a / cagA + / IceA1 / oipA + / babA2 + / cagE- | 1 (12,5) | 2 (25) | ||||
S1a / cagA- / IceA1 / oipA- / babA2- / cagE- | 3 (37,5) | |||||
S1a / cagA oipA + / Ice / babA2- / cagE- | 2 (25) | |||||
S1a / cagA + / IceA1 / oipA- / babA2 + — / cagE- | 2 (25) | |||||
S1a / cagA + / Ice-A2 / oipA + / Ice-A2 / oip babA2- / cagE- | 4 (50) | |||||
S1b / cagA + / IceA1 / oipA + / babA2- / cagE + | 1 (12.5) | |||||
S1b / cagA + / IceA1 / oipA + / babA2 + / cagE- | 1 (12,5) | |||||
S1b / cagA + / IceA1 / oipA- / babA2- / cagE4 | ||||||
S2 / cagA- / IceA1 / oipA + / babA2 + / cagE + | 1 (12,5) | |||||
S2 / cagA + / IceA1 / oipA- / babA2 + / cagE + | 1 (12,5) | 1 (12,5) | ||||
S2 / cagA + / IceA1 / oipA + / babA2- / cagE + | 1 (12,5) | |||||
S2 / cagA + / cagE- | 1 (12.5) | |||||
S2 / cagA + / IceA1 / oipA + / babA2- / cagE- | 1 (12,5) | |||||
S2 / cagA + / IceA1 / oipA- / babA2 + / cagE- | 2 (2599) | |||||
S2 / cagA + / IceA1 / oipA- / babA2- / cagE + | 2 (25) | |||||
S2 / cagA + / IceA1 / oipA- / babA2- / cagE- | 3 (37,5) | 1 (12,5) | ||||
M1a / cagA- / IceA1 / oipA + / babA2 + / cagE + | 1 (12,5) | |||||
1 (12.5) | ||||||
M1a / cagA- / IceA1 / oipA- / babA2 + / cagE + | 1 (12,5) | |||||
M1a / cagA + / IceA1 / oipA + / babA2- / cagE + 1 | 9040 9038M1a / cagA + / IceA1 / oipA + / babA2 + / cagE- | 2 (25) | ||||
M1a / cagA + / IceA1 / oipA + / babA2- / cagE- | 2 (25) | 99A M1a / cagE- / IceA1 / oipA- / babA2- / cagE- | 2 (25) | |||
M1a / cagA + / IceA1 / oipA + / babA2 + / cagE- | 1 (12.5) | |||||
M1a / cagA + / IceA1 / oipA- / babA2- / cagE + | 2 (25) | |||||
M1a / cagA + / IceA1 / oipA- / babA2 + / cagE4 | 2 | |||||
M1a / cagA + / IceA2 / oipA- / babA2- / cagE- | 3 (37,5) | |||||
M1b / cagA + / IceA1 / oipA- / babA2 + / cagE + | 1 (12,599) | 1 (12,599) | cagA + / IceA1 / oipA + / babA2- / cagE + | 1 (12,5) | ||
M1b / cagA + / IceA1 / oipA + / babA2 + / cagE- | 1 (12.5) | |||||
M1b / cagA + / IceA1 / oipA- / babA2- / cagE- | 1 (12,5) | |||||
M2 / cagA + / iceA1 / oipA + / babA2 + / cagE + | M2 / cagA- / IceA1 / oipA + / babA2 + / cagE + | 1 (12,5) | ||||
M2 / cagA + / IceA1 / oipA- / babA2 + / cagE + | 1 (12,5) | cag399 9038 / cag399 9038 IceA1 / oipA- / babA2 + / cagE +1 (12,5) | ||||
M2 / cagA + / IceA1 / oipA + / babA2- / cagE + | 1 (12.5) | |||||
M2 / cagA + / IceA1 / oipA + / babA2 + / cagE- | 1 (12,5) | |||||
M2 / cagA + / IceA1 / oipA + / babA2- / cagE- | 2 | M2 / cagA + / IceA1 / oipA- / babA2 + / cagE- | 2 (25) | |||
M2 / cagA + / IceA1 / oipA- / babA2- / cagE- | 3 (37,5) |
Настоящее исследование было проведено для изучения распространенности H. pylori в образцах бутилированной минеральной воды 4 основных брендов в Иране, а также для определения распределения vacA , cagA , cagE , iceA , oipA и babA2 Статус генотипа и паттерны устойчивости к антибиотикам H.pylori . Насколько нам известно, это первый отчет о распространенности генотипирования и свойств устойчивости к противомикробным препаратам H. pylori в пробах минеральной воды в бутылках в мире. Мы обнаружили, что 1,77% проб минеральной воды в бутылках были загрязнены устойчивыми и вирулентными штаммами H. pylori . Что касается высокой точности производства минеральной воды, наши результаты свидетельствуют о серьезном беспокойстве для здоровья населения.
В отличие от результатов нашего исследования, Watson et al.(2004) [21] не удалось изолировать H.py lori из образцов питьевой воды Соединенного Королевства. Выделение H. pylori с использованием питательной среды важно из-за необходимости обнаружения жизнеспособных бактерий в воде. Предыдущее исследование в Иране [1] показало, что распределение H. pylori в различных типах проб воды, включая водопроводную воду, воду стоматологических установок и водоохладитель в общественных местах, находится в диапазоне 2–6%, что выше, чем наши результаты. Нургалиева и др.(2002) [22] выявили, что речная вода является высоким фактором риска заражения H. pylori в Казахстане. Соответственно, они заявили, что передача H. pylori может передаваться через воду. Питьевая вода может представлять серьезную угрозу для передачи H. pylori по нескольким важным критериям [23]. Эти критерии включают способность H. pylori прилипать к различным материалам и совместно с другими бактериями образовывать сложные структуры на трубах или других поверхностях, контактирующих с водой [23].Представление о неспособности H. pylori выживать в одиночестве в проточной воде, но при этом развивать симбиотические отношения и формировать сложные структуры на контактных поверхностях [24], делает рациональным предположение, что подземные воды являются резервуаром для H. pylori из-за его застойного характера. Учитывая частое использование грунтовых вод при производстве бутилированной минеральной воды, неудивительно, что 1,77% наших проб оказались положительными на эту бактерию. Несколько исследований показали значительную распространенность H.pylori в пробах подземных вод между 1999–2007 гг. в США [25–27] и Японии [28].
Другими возможными причинами высокой распространенности H. pylori в образцах бутилированной минеральной воды в Иране являются: а) отсутствие компетентных подходов к санитарной обработке воды б) использование недоверчивых грунтовых вод для производства минеральной воды в бутылках в) возможность присутствия бактериальных колоний в виде биопленки в трубах, используемых для перекачки воды d) возможность утечки бытовых, промышленных и сельскохозяйственных сточных вод в источники минеральной воды и, наконец, e) несоблюдение личной гигиены персонала цеха нефтепереработки.Учитывая высокую распространенность H. pylori в образцах бутилированной минеральной воды, можно сделать вывод, что правила безопасности пищевых продуктов, а также стандарты качества, включая надлежащую производственную практику (GMP), надлежащую сельскохозяйственную практику (GAP) и анализ опасностей и критические контрольные точки (HACCP) — не вводятся для иранских заводов по производству минеральной воды.
Заметное месячное распределение с более высокой распространенностью в июле наблюдалось у штаммов H. pylori бутилированной минеральной воды.Основная причина более высокой распространенности H. pylori летом заключается в том, что в это время года климатические явления, включая температуру, дождь и атмосферное давление, могут влиять на распространенность этой бактерии. Бактерии быстрее растут и встречаются в теплом состоянии. Yahaghi et al. (2014) [13] сообщили об аналогичном сезонном распределении для штаммов H. pylori в образцах овощей и салатов. Они показали статистически значимые различия в заболеваемости H.pylori между жарким и холодным сезонами года.
Употребление загрязненной бутилированной минеральной воды, включенной в наше исследование, может привести к желудочно-кишечным расстройствам из-за наличия устойчивых и вирулентных штаммов H. pylori . Все изолятов H. pylori в нашем исследовании были устойчивы по крайней мере к одному противомикробному препарату. При этом 12,5% изолятов были устойчивы к более чем 6 антимикробным препаратам. Кроме того, самые высокие уровни устойчивости наблюдались к шести типам противомикробных средств.Эти противомикробные препараты — лучший выбор для лечения случаев инфекции H. pylori . Фактически, в большинстве случаев язвенной болезни с признаком инфекции H. pylori используются эти противомикробные средства. К сожалению, эти типы антибиотиков обычно выписываются нерегулярно и сверх установленной нормы. Поэтому неудивительно, что большинство из штаммов H. pylori были устойчивы к этим антимикробным агентам. Подобные результаты были описаны Bang et al.(2007) [29], Thyagarajan et al. (2003) [30], Yahaghi et al. (2014) [13] и Secka et al. (2013) [31]. Bang et al., Ранее сообщали о высоком уровне резистентности штаммов H. pylori в биоптатах, взятых у пациентов с язвенной болезнью, к метронидазолу (34,7%), кларитромицину (16,7%) и амоксициллину (11,8%). (2007) [29]. Другое иранское исследование [32] показало, что распространенность устойчивости штаммов H. pylori и желудочно-кишечных расстройств к метронидазолу, кларитромицину и амоксициллину находится в диапазоне от 4 до 57%.Bahrami et al. (2011) [33] сообщили о высокой распространенности водной устойчивости H. p ylori к фуразолидону (4,5%), кларитромицину (0,9%), амоксициллину (0%), метронидазолу (36,4%) и тетрациклину (1,8%). %). Значительные уровни устойчивости штаммов H. pylori клинических образцов к метронидазолу, кларитромицину, хинолонам, амоксициллину и тетрациклину были зарегистрированы в различных странах, таких как Нигерия, Сенегал, Индия, Саудовская Аравия, Китай, Колумбия, Тайвань, Бразилия. , Таиланд, Аргентина и Египет [34].
Образцы бутилированной минеральной воды в нашем исследовании содержали H. pylori положительных генотипов vacA , cagA , cagE , iceA , oipA и babA2 . Наиболее часто обнаруживаемыми генотипами были vacAs1a (100%), vacAm1a (87,5%), cagA (62,5%) и iceA1 (62,5%). Низкая распространенность oipA (25%), babA2 (25%) и cagE (37.5%) генотипов. Число изолятов, положительных по комбинированным генотипам, также было значительным. M1as1a (62,5%), m1as2 (37,5%) и m2s2 (37,5%), а также s1a / cagA + / IceA2 / oipA- / babA2- / cagE- (50%) были наиболее часто обнаруживаемыми комбинированными генотипами. . Как видно, отрицательные штаммы cagA , oipA , babA2 и cagE H. pylori были более распространены, чем их положительные штаммы.Образцы бутилированной минеральной воды не содержали положительных штаммов cagA , cagE , babA2 и oipa H. pylori . Количество штаммов iceA2 также было низким. В соответствии с неопределенной причиной низкого распространения генотипов cagA , oipA , babA2 и cagE в штаммах H. pylori бутилированной минеральной воды, высокая распространенность патогенных генотипов может гарантировать возникновение желудочно-кишечных заболеваний. расстройства из-за потребления H.pylori положительных образца минеральной воды в бутылках нашего исследования. Количество исследований, проведенных по генотипированию H. pylori , выделенных из бутилированной минеральной воды, значительно невелико. В единственном исследовании, проведенном Yingzhi et al. (2002) [35], сообщалось о высоком содержании генотипов vacAs1a , vacAm1a и vacAs1am1a в пробах питьевой воды. Не было дополнительных ранее опубликованных данных в этой области по питьевой воде, но высокое присутствие аллелей vacAs1a , vacAm1a , vacAs2 , а также m1as1a , m1as2 , m1as1b , m1bs1b , m2s1a , m2s2 и m1am2 генотипов в H.pylori штаммов человеческих клинических образцов, таких как биопсия желудка, фекалии и слюна, сообщалось ранее [36–38]. Sedaghat et al. (2014) [39] сообщили, что распространенность генотипов cagA , iceA1 , iceA2 , oipA и babA2 в случаях клинических заболеваний человека, включая язву желудка и гастрит, составила 62,2, 48,6, 16,2, 81,1 и 94,6%, соответственно, что было аналогично нашим результатам для минеральной воды в бутылках. Высокий потенциал vacA положительных штаммов H.pylori , вызывающая клинические расстройства у человека, сообщалось ранее [11–13, 40]. Тяжесть заболеваний, вызванных babA положительными штаммами H. pylori , выше, чем babA отрицательных штаммов [41]. Мы обнаружили, что 25% из штаммов H. pylori , извлеченных из образцов минеральной воды в бутылках, имели генотип babA . Экспрессия iceA1 активируется при контакте между H. pylori и эпителиальными клетками человека и может быть связана с язвенной болезнью.Мы обнаружили, что 62,5% наших штаммов были iceA1 +. Экспрессия oipA связана с индукцией IL-8 и связана с тяжелыми клиническими исходами [11–13, 40]. Распространенность этого генотипа у штаммов H. pylori нашего исследования составила 25%.
Выводы
Насколько нам известно, настоящее исследование является первым отчетом о распространенности H. pylori в бутилированной минеральной воде, а также о его генотипировании и свойствах устойчивости к противомикробным препаратам во всем мире.Образцы бутилированной минеральной воды иранских заводов содержат вирулентные и устойчивые штаммы H. pylori , что свидетельствует о серьезной проблеме общественного здравоохранения. Марка C, июль месяц, устойчивость к ампициллину, s1a аллель, m1as1a генотип и s1a / cagA + / IceA2 / oipA- / babA2- / cagE комбинированные генотипы были наиболее часто обнаруживаемыми признаками изолятов H. pylori в бутылках. образцы минеральной воды нашего исследования. Назначение цефсулодина и фуразолидона может быть эффективным при лечении случаев H.pylori .
Методы
Сбор проб
В соответствии с распространенностью H. pylori в пробах воды в некоторых предыдущих исследованиях, количество проб было рассчитано по следующей формуле:
С апреля 2014 г. по апрель 2015 г., всего 450 Образцы бутилированной минеральной воды различных марок (AD) были случайным образом собраны в провинции Исфахан, Иран. Образцы бутилированной минеральной воды были отобраны в соответствии с протоколами, представленными Международной организацией по стандартизации (ISO 5667-1: 1980, ISO 5667-2: 1991 и ISO 5667-4: 1987).Образцы (100 мл) были доставлены в лабораторию на льду и использованы в течение 2 часов после сбора.
Выделение Helicobacter pylori
Образцы фильтровали через фильтрующие мембраны 0,045 мкм (Albet Co.). Затем каждую мембрану погружали в 2 мл триптического соевого бульона (TSB, Merck) на 1 час. После этого отбирали каждые 2 мл TSB и культивировали на H. pylori . Образцы культивировали на агаре Brucella (Merck, Германия), содержащем селективную добавку к кампилобактерам (5 мг / л, Merck), триметоприм (0.25 мг / л), метансульфонат колистина (30 мг / л), циклогексимид (100 мг / л), налидиксовая кислота (30 мг / л), триметоприм (30 мг / л), ванкомицин (10 мг / л) (Sigma, Сент-Луис, Миссури, США), амфотерицин B, овечья кровь (5%) и 7% фетальная телячья сыворотка (Sigma). После 72 ч инкубации при 37 ° C в микроаэрофильных условиях (85% N 2 , 10% CO 2 и 5% O 2 ) с использованием системы MART (Anoxamat, Lichtenvoorde, Нидерланды) был протестирован рост бактерий. и подтвержден как H. pylori с использованием тестов окрашивания по Граму, уреазы и оксидазы.
Тест на чувствительность к противомикробным препаратам
Чистые культуры H. pylori были использованы для теста на чувствительность к антибиотикам. Для этой цели был выбран один штамм из каждого H. pylori -положительного образца. Тест на чувствительность к противомикробным препаратам проводили методом дисковой диффузии Кирби-Бауэра с использованием агара Мюллера-Хинтона (Merck, Германия) с добавлением 5% дефибринированной овечьей крови и 7% фетальной телячьей сыворотки, согласно Институту клинических лабораторных стандартов (CLSI 2012) [42]. ].Устойчивость к противомикробным препаратам H. pylori была измерена по сравнению с широко используемыми антибиотиками в случаях H. pylori язвы желудка. Использовали следующие антимикробные диски (HiMedia Laboratories, Мумбаи, Индия): ампициллин (10 мкг), метронидазол (5 мкг), эритромицин (5 мкг), кларитромицин (2 мкг), амоксициллин (10 мкг), левофлоксацин (5 мкг). , цефсулодин (30 мкг), триметоприм (25 мкг), фуразолидон (1 мкг), моксифлоксацин (5 мкг), тинидазол (приготовленный из чистых порошков, Sigma, 5 мкг) и ципрофлоксацин (5 мкг).После инкубации при 37 ° C в течение 48 часов в микроаэрофильной атмосфере (85% N 2 , 10% CO2 и 5% O 2 ,) была измерена чувствительность H. pylori к каждому противомикробному препарату. Результаты были обработаны в соответствии с критериями интерпретации, предоставленными CLSI (2012) [42]. H. pylori ATCC 43504 использовался как организм для контроля качества при определении чувствительности к противомикробным препаратам.
Экстракция ДНК и амплификация гена 16S рРНК Helicobacter pylori
Подозреваемые колонии также были идентифицированы как H.pylori на основе метода ПЦР. Геномную ДНК экстрагировали из колоний с типичными признаками H. pylori с использованием набора для экстракции ДНК из клеток и тканей (Roche Applied Science, Германия, 11814770001) в соответствии с инструкциями производителя, а ее плотность оценивали с помощью оптической денситометрии. Выделенную ДНК амплифицировали для гена 16S рРНК (праймеры: HP-F: 5′-CTGGAGAGACTAAGCCCTCC-3 ‘и HP-R: 5′-ATTACTGACGCTGATTGTGC-3’) [43]. Реакции ПЦР проводили в конечном объеме 50 мкл, содержащем 5 мкл 10 × буфера + MgCl 2 , 2 мМ dNTP, 2 единицы ДНК-полимеразы Taq, 100 нг геномной ДНК в качестве матрицы и 25 пикомолей каждого праймера.ПЦР проводили с использованием термоциклера (Eppendorf Co., Германия) при следующих условиях: начальная денатурация в течение 2 мин при 94 ° C; 30 циклов при 95 ° C в течение 30 секунд, 60 ° C в течение 30 секунд и 72 ° C в течение 30 секунд и окончательное удлинение при 72 ° C в течение 8 минут.
Генотипирование генотипов vacA, cagA, cagE, iceA, babA2 и oipA в изолятах Helicobacter pylori питьевой воды
Наличие iceA1 , iceA2. Были обнаружены генотипы oipA , cagA , cagE , babA2 , а также различные генотипы аллелей vacA ( s1a , s1b , s1c , m1a , m1b и m2 ). определяется методом ПЦР.Список праймеров и программа ПЦР приведены в таблице [44–51]. ПЦР-амплификации выполняли в программируемом термоциклере (Master Cycle Gradiant, Eppendorf, Германия), и все опыты включали один отрицательный ДНК-контроль, состоящий из воды для ПЦР и двух или более положительных контролей (26695, J99, SS1, Tx30, 88–23 и 84–183).
Таблица 6
Олигонуклеотидные праймеры и условия ПЦР, используемые для генотипирования штаммов Helicobacter pylori , выделенных из иранской минеральной воды в бутылках
Гены | Последовательность праймеров (5′-3 ‘) | ) | Объем реакции ПЦР (50 мкл) | Программы ПЦР |
---|---|---|---|---|
ВАС 1 а | F: CTCTCGCTTTAGTAGGAGC | 213 | 5 мкл буфера для ПЦР 10X | 1 цикл: 95 ° C ———— 1 мин. |
R: CTGCTTGAATGCGCCAAAC | ||||
ВАС 1 б | F: AGCGCCATACCGCAAGAG | 187 | 1,5 мМ Mgcl 2 | 32 цикла: 95 ° C ———— 45 с |
CTGCTTGAATGCGCCAAAC | 200 мкг фермента NTP ) | |||
ВАС 1 c | F: CTCTCGCTTTAGTGGGGYT | 213 | 64 ° C ———— 50 с | |
R: CTGCTTGAATGCGCCAAAC | 0.5 мкМ каждого праймера F&R | |||
ВАС 2 | F: GCTAACACGCCAAATGATCC | 199 | 72 ° C ———— 70 с | |
R: CTGCTTGAATGCGCCAAAC | 1,25 U Taq ДНК-полимераза 9040 (ферментная ДНК-полимераза | |||
VacA м 1 А | F: GGTCAAAATGCGGTCATGG | 290 | 1 цикл: 72 ° C ———— 5 мин | |
R: CCATTGGTACCTGTAGAAAC | ||||
VacA м 1 B | Ф: GGCCCCAATGCAGTCATGGA | 291 | 2.5 мкл ДНК-матрицы | |
R: GCTGTTAGTGCCTAAAGAAGCAT | ||||
VacA м 2 | F: GGAGCCCCAGGAAACATTG | 352 | ||
R: CATAACTAGCGCCTTGCA | ||||
cag A | F: GATAACAGCCAAGCTTTTGAGG | 300 | 5 мкл буфера для ПЦР 10X | 1 цикл: 94 ° C ———— 1 мин. |
R: CTGCAAAAGATTGTTTGGCAGA | ||||
2 мМ Mgcl 2 | 32 цикла: 95 ° C ———— 60 с | |||
150 мкМ dNTP (ферментация) | ||||
0.75 мкМ каждого праймера F&R | 56 ° C ———— 60 с | |||
1,5 ед. ДНК-полимеразы Taq (Fermentas) | 72 ° C —— —— 60 с | |||
1 цикл: 72 ° C ———— 10 мин | ||||
3 мкл ДНК-матрицы | ||||
ледA 1 | F: GTGTTTTTAACCAAAGTATC | 247 | 5 мкл буфера для ПЦР 10X | 1 цикл: 94 ° C ———— 1 мин. |
R: CTATAGCCASTYTCTTTGCA | ||||
ледA 2 | F: GTTGGGTATCACAATTTAT | 229/334 | 2 мМ Mgcl 2 | 32 цикл: 94 ° C ———— 60 с |
R : TTRCCCTATTTTCTAGTAGGT | 200 мкМ dNTP (Fermentas) | |||
56 ° C ———— 60 с | ||||
0.5 мкМ каждого праймера F&R | ||||
72 ° C ———— 60 с | ||||
1,5 ед. ДНК-полимеразы Taq (Fermentas) | ||||
1 цикл: 72 ° C ———— 8 мин | ||||
5 мкл ДНК-матрицы | ||||
oip A | F: GTTTTTGATGCATGGGATTT | 401 | 5 мкл буфера для ПЦР 10X | 1 цикл: 94 ° C ———— 2 мин. |
R: GTGCATCTCTTATGGCTTT | ||||
2.5 мМ Mgcl 2 | 32 цикла: 94 ° C ———— 60 с | |||
200 мкМ dNTP (Fermentas) | ||||
56 ° C —— ——- 60 с | ||||
0,5 мкМ каждого праймера F&R | ||||
72 ° C ———— 60 с | ||||
2 U Taq ДНК полимераза (Fermentas) | ||||
1 цикл: 72 ° C ———— 10 мин | ||||
3 мкл ДНК-матрицы | ||||
CAGE | F: TTGAAAACTTCAAGGATAGGATAGAGC R: GCCTAGCGTAATATCACCATTACCC | 508 | 5 мкл буфера для ПЦР 10X | 1 цикл: 94 ° C ———— 1 мин. |
2 мМ Mgcl 2 | 35 цикл: 94 ° C ———— 60 с | |||
150 мкМ dNTP (Fermentas) | ||||
53 ° C — ———— 45 с | ||||
0,75 мкМ каждого праймера F&R | ||||
72 ° C ———— 45 мин | ||||
1,5 ед. ДНК-полимеразы Taq (Fermentas) | ||||
1 цикл: 72 ° C ———— 8 мин | ||||
3 мкл ДНК-матрицы | ||||
БабА2 | F: CCAAACGAAACAAAAAGCGT | 271 | 5 мкл буфера для ПЦР 10X | 1 цикл: 95 ° C ———— 1 мин. |
R: GCTTGTGTAAAAGCCGTCGT | ||||
1,5 мМ Mgcl 2 | 30 цикл: 91 ° C ———— 60 с | |||
200 мкМ dNTP (Fermentas) | ||||
45 ° C ———— 60 с | ||||
0,5 мкМ каждого праймера F&R | ||||
72 ° C ———— — 60 с | ||||
1,25 U Taq ДНК-полимераза (Fermentas) | ||||
1 цикл: 72 ° C ———— 8 мин | ||||
2.5 мкл ДНК-матрицы |
Гель-электрофорез
Продукты амплификации ПЦР (10 мкл) подвергали электрофорезу в 2,5% агарозном геле в 1X буфере TBE при 80 В в течение 30 мин, окрашивали бромидом этидия, и изображения были получены в системе документации гелей UVIdoc (Великобритания). Продукты ПЦР идентифицировали по ДНК-маркеру размером 100 п.н. (Fermentas, Германия) [52].
Статистический анализ
Данные были перенесены в электронные таблицы Microsoft Excel (Microsoft Corp., Редмонд, Вашингтон, США) для анализа. Используя статистическое программное обеспечение SPSS 16.0 (SPSS Inc., Чикаго, Иллинойс, США), был проведен анализ критерия хи-квадрат и точного двустороннего критерия Фишера, и различия считались значимыми при значениях P <0,05. Статистически проанализировано распределение генотипов H. pylori , выделенных из бутилированной минеральной воды.
Аббревиатуры
AM | Ампициллин | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
AMX | Амоксициллин | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
babA |
Cyclin-связывающий ген 9403 903 903 903 903 903 9040 9404 9403 903 9040 | Cef | Цефсулодин | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
CLR | Кларитромицин | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
CLSI | Институт клинических лабораторных стандартов | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
ER | 9|||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
ER | 91 9231 9231 9231 9231Erythromycin | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Helicobacter pylori | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
iceA | Индуцируется контактом с эпителиальным антигеном | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Lev | Levofloxacin | Levofloxacin | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
ПЦР | Полимеразная цепная реакция | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
TRP | Триметоприм | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
vacA | Вакуолизирующий цитотоксин стопы 002 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Тип бутилированной минеральной воды | No.отобранных образцов | № изолятов Helicobacter pylori (%) | № изолятов, подтвержденных с помощью ПЦР на основе 16SrRNA (%) | |
---|---|---|---|---|
Бренды | A | 120 | 120 (0,8 a | 1 (0,83) a |
B | 110 | 1 (0,90) a | 1 (0,90) a | |
C 110 4 | 9040 ) b4 (3.63) b | |||
D | 110 | 2 (1.81) a | 2 (1.81) a | |
Всего | 450 | 8 (1.40775) 8 (1.40775) ) | ||
Сезоны | Весна | 112 | 1 (0,89) a | 1 (0,89) a |
Лето | 110 | 620 904 (4.54) b | ||
Осень | 113 | 1 (0.88) a | 1 (0,88) a | |
Зима | 115 | — | — | |
Всего | 450 | 8 (1.7740) | 9099
Месячная распространенность Helicobacter pylori в протестированных образцах бутилированной минеральной воды
Результаты анализа устойчивости к противомикробным препаратам изолятов H. pylori в тестируемых образцах бутилированной минеральной воды представлены в таблице. H. pylori Штаммы бутилированной минеральной воды обладают наивысшим уровнем устойчивости к ампициллину (75%), за ним следуют метронидазол (62,5%), эритромицин (62,5%), кларитромицин (62,5%), амоксициллин (62,5%) и триметоприм. (62,5%) противомикробные средства. Распространенность устойчивости к антибиотикам против моксифлоксацина, тинидазола и ципрофлоксацина составляла 25, 50 и 50% соответственно. Были статистически значимые различия в уровнях устойчивости к антибиотикам между ампициллином и цефсулодином ( P = 0.013), ампициллин и фуразолидон ( P = 0,018), кларитромицин и фуразолидон ( P = 0,029) и ампициллин и моксифлоксацин ( P = 0,027). Распространенность множественной лекарственной устойчивости штаммов H. pylori в пробах бутилированной минеральной воды показана на рис. Все 8 штаммов H. pylori были устойчивы по крайней мере к одному из протестированных антибиотиков. Наивысшие уровни устойчивости были обнаружены только у одного изолята, устойчивого к 10 антибиотикам.
Таблица 2
Модель устойчивости к противомикробным препаратам изолятов Helicobacter pylori протестированных образцов минеральной воды в бутылках
Бренды (количество положительных) | Структура устойчивости к антибиотикам (%) | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
AM10 Met5 | ER5 | CLR2 | AMX 10 | Lev5 | Cef30 | TRP25 | FZL1 | Mox5 | Tin4 | | CIP5 9040 1 9038 | | CIP5 9038 | CIP5 9038 a | 1 (100) a | 1 (100) a | 1 (100) a | 1 (100) a | — | — | — | — | — | — | | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
B (1) | 1 (100) a | 1 (100) a | 1 (100) a | 1 (100) a | 1 (100) a | 1 (100) a | — | 1 (100) a | — | — | 1 (100) a | 100) a | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
C (4) | 2 (50) a | 2 (50) a | 2 (50) a | 2 (50) a | 2 (50) a | 2 (50) a | 1 (25) b | 3 (75) a | 1 (25) b | 1 (25) b | 2 (50) a | 2 (50) a | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
D (2) | 2 (100) a | 1 (50) a | 1 (50 ) a | 1 (50) a | 1 (50) a | 1 (50) a | 1 (50) b | 1 (50) a | 1 (50) б | 1 (50) b | 1 (50) a | 1 (50) a | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Всего (8) | 6 (75) a, * | 5 ( 62.5) a | 5 (62,5) a | 5 (62,5) a | 5 (62,5) a | 4 (50) a | 2 (25) b | 5 (62,5) a | 2 (25) b | 2 (25) b | 4 (50) a | 4 (50) a |
Бренды (кол-во положительных) | Распределение различных генотипов (%) | ||||||||||||
---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
S1a | S1b | S1c | S2 | M1a | M1b | M2 | CagA | IceA1 | IceA2 | OipA | БабА2 | CAGE | |
A (1) | 1 (100) | — | — | 1 (100) | 1 (100) | — | 1 (100) | 1 (100) | 1 (100) | — | — | — | 1 (100) |
B (1) | 1 (100) | — | — | — | 1 (100) 1 (100)— | 1 (100) | 1 (100) | 1 (100) | — | — | 1 (100) | 1 (100) | |
C (4) | 4 ( 100) | 1 (25) | — | 2 (50) | 4 (100) | 1 (25) | 1 (25) | 2 (50) | 2 (50) | 1 (25) | 1 (25) | 1 (25) | 1 (25) |
D (2) | 2 (100) | 1 (50) | — | 1 (50) | 1 (50) | 1 (50) | 1 (50) | 1 (50) | 1 (50) | — | 1 (50) | — | — |
Всего (8) | 8 (100) | 2 ( 25) | — | 4 (50) | 7 (87.5) | 2 (25) | 4 (50) | 5 (62,5) | 5 (62,5) | 1 (12,5) | 2 (25) | 2 (25) | 3 (37,5) |
Таблица 4
Распределение комбинированных генотипов Helicobacter pylori , выделенных из протестированных образцов минеральной воды в бутылках
Генотипы | Распространенность (%) * | |||
---|---|---|---|---|
M1as1b | 1 (12,5) | |||
M1bs1a | 1 (12,5) | |||
M1bs1b | — | 9040 | ||
M2s1a | 2 (25) | |||
M2s1b | 1 (12,5) | |||
M2s1c | — | |||
M2s2 | ||||
M2s2 | 35) | |||
M1bs2 | 1 (12,5) | |||
M1am2 | 2 (25) | |||
M1bm2 | — | |||
CagA | 3 (37,5) | |||
CagE + | 3 (37,5) | |||
CagE- | 5 (62,5) | |||
IceA1 | 5 (62,5) | 5 (62,5) | 9038 Ice||
IceA1 IceA2 | — | |||
OipA + | 2 (25) | |||
OipA- | 6 (75) | |||
9038babA2 | 6 (75) |
Таблица 5
Комбинированные vacA , cagA , cagE , iceA , babA2 и oipA выделенные генотипы Helicobacter pylori из протестированных образцов минеральной воды
Комбинированный генотип * | Частота (%) | |||||
---|---|---|---|---|---|---|
S1a / cagA + / IceA1 / oipA + / babA2 + / cagE + | 1 (12.5) | |||||
S1a / cagA + / IceA1 / oipA- / babA2 + / cagE + | 2 (25) | |||||
S1a / cagA- / IceA1 / oipA- / babA2 + / cagE + | S1a / cagA + / IceA1 / oipA + / babA2- / cagE + | 2 (25) | ||||
S1a / cagA + / IceA1 / oipA + / babA2 + / cagE- | 1 (12,5) | 2 (25) | ||||
S1a / cagA- / IceA1 / oipA- / babA2- / cagE- | 3 (37,5) | |||||
S1a / cagA oipA + / Ice / babA2- / cagE- | 2 (25) | |||||
S1a / cagA + / IceA1 / oipA- / babA2 + — / cagE- | 2 (25) | |||||
S1a / cagA + / Ice-A2 / oipA + / Ice-A2 / oip babA2- / cagE- | 4 (50) | |||||
S1b / cagA + / IceA1 / oipA + / babA2- / cagE + | 1 (12.5) | |||||
S1b / cagA + / IceA1 / oipA + / babA2 + / cagE- | 1 (12,5) | |||||
S1b / cagA + / IceA1 / oipA- / babA2- / cagE4 | ||||||
S2 / cagA- / IceA1 / oipA + / babA2 + / cagE + | 1 (12,5) | |||||
S2 / cagA + / IceA1 / oipA- / babA2 + / cagE + | 1 (12,5) | 1 (12,5) | ||||
S2 / cagA + / IceA1 / oipA + / babA2- / cagE + | 1 (12,5) | |||||
S2 / cagA + / cagE- | 1 (12.5) | |||||
S2 / cagA + / IceA1 / oipA + / babA2- / cagE- | 1 (12,5) | |||||
S2 / cagA + / IceA1 / oipA- / babA2 + / cagE- | 2 (2599) | |||||
S2 / cagA + / IceA1 / oipA- / babA2- / cagE + | 2 (25) | |||||
S2 / cagA + / IceA1 / oipA- / babA2- / cagE- | 3 (37,5) | 1 (12,5) | ||||
M1a / cagA- / IceA1 / oipA + / babA2 + / cagE + | 1 (12,5) | |||||
1 (12.5) | ||||||
M1a / cagA- / IceA1 / oipA- / babA2 + / cagE + | 1 (12,5) | |||||
M1a / cagA + / IceA1 / oipA + / babA2- / cagE + 1 | 9040 9038M1a / cagA + / IceA1 / oipA + / babA2 + / cagE- | 2 (25) | ||||
M1a / cagA + / IceA1 / oipA + / babA2- / cagE- | 2 (25) | 99A M1a / cagE- / IceA1 / oipA- / babA2- / cagE- | 2 (25) | |||
M1a / cagA + / IceA1 / oipA + / babA2 + / cagE- | 1 (12.5) | |||||
M1a / cagA + / IceA1 / oipA- / babA2- / cagE + | 2 (25) | |||||
M1a / cagA + / IceA1 / oipA- / babA2 + / cagE4 | 2 | |||||
M1a / cagA + / IceA2 / oipA- / babA2- / cagE- | 3 (37,5) | |||||
M1b / cagA + / IceA1 / oipA- / babA2 + / cagE + | 1 (12,599) | 1 (12,599) | cagA + / IceA1 / oipA + / babA2- / cagE + | 1 (12,5) | ||
M1b / cagA + / IceA1 / oipA + / babA2 + / cagE- | 1 (12.5) | |||||
M1b / cagA + / IceA1 / oipA- / babA2- / cagE- | 1 (12,5) | |||||
M2 / cagA + / iceA1 / oipA + / babA2 + / cagE + | M2 / cagA- / IceA1 / oipA + / babA2 + / cagE + | 1 (12,5) | ||||
M2 / cagA + / IceA1 / oipA- / babA2 + / cagE + | 1 (12,5) | cag399 9038 / cag399 9038 IceA1 / oipA- / babA2 + / cagE +1 (12,5) | ||||
M2 / cagA + / IceA1 / oipA + / babA2- / cagE + | 1 (12.5) | |||||
M2 / cagA + / IceA1 / oipA + / babA2 + / cagE- | 1 (12,5) | |||||
M2 / cagA + / IceA1 / oipA + / babA2- / cagE- | 2 | M2 / cagA + / IceA1 / oipA- / babA2 + / cagE- | 2 (25) | |||
M2 / cagA + / IceA1 / oipA- / babA2- / cagE- | 3 (37,5) |
Настоящее исследование было проведено для изучения распространенности H. pylori в образцах бутилированной минеральной воды 4 основных брендов в Иране, а также для определения распределения vacA , cagA , cagE , iceA , oipA и babA2 Статус генотипа и паттерны устойчивости к антибиотикам H.pylori . Насколько нам известно, это первый отчет о распространенности генотипирования и свойств устойчивости к противомикробным препаратам H. pylori в пробах минеральной воды в бутылках в мире. Мы обнаружили, что 1,77% проб минеральной воды в бутылках были загрязнены устойчивыми и вирулентными штаммами H. pylori . Что касается высокой точности производства минеральной воды, наши результаты свидетельствуют о серьезном беспокойстве для здоровья населения.
В отличие от результатов нашего исследования, Watson et al.(2004) [21] не удалось изолировать H.py lori из образцов питьевой воды Соединенного Королевства. Выделение H. pylori с использованием питательной среды важно из-за необходимости обнаружения жизнеспособных бактерий в воде. Предыдущее исследование в Иране [1] показало, что распределение H. pylori в различных типах проб воды, включая водопроводную воду, воду стоматологических установок и водоохладитель в общественных местах, находится в диапазоне 2–6%, что выше, чем наши результаты. Нургалиева и др.(2002) [22] выявили, что речная вода является высоким фактором риска заражения H. pylori в Казахстане. Соответственно, они заявили, что передача H. pylori может передаваться через воду. Питьевая вода может представлять серьезную угрозу для передачи H. pylori по нескольким важным критериям [23]. Эти критерии включают способность H. pylori прилипать к различным материалам и совместно с другими бактериями образовывать сложные структуры на трубах или других поверхностях, контактирующих с водой [23].Представление о неспособности H. pylori выживать в одиночестве в проточной воде, но при этом развивать симбиотические отношения и формировать сложные структуры на контактных поверхностях [24], делает рациональным предположение, что подземные воды являются резервуаром для H. pylori из-за его застойного характера. Учитывая частое использование грунтовых вод при производстве бутилированной минеральной воды, неудивительно, что 1,77% наших проб оказались положительными на эту бактерию. Несколько исследований показали значительную распространенность H.pylori в пробах подземных вод между 1999–2007 гг. в США [25–27] и Японии [28].
Другими возможными причинами высокой распространенности H. pylori в образцах бутилированной минеральной воды в Иране являются: а) отсутствие компетентных подходов к санитарной обработке воды б) использование недоверчивых грунтовых вод для производства минеральной воды в бутылках в) возможность присутствия бактериальных колоний в виде биопленки в трубах, используемых для перекачки воды d) возможность утечки бытовых, промышленных и сельскохозяйственных сточных вод в источники минеральной воды и, наконец, e) несоблюдение личной гигиены персонала цеха нефтепереработки.Учитывая высокую распространенность H. pylori в образцах бутилированной минеральной воды, можно сделать вывод, что правила безопасности пищевых продуктов, а также стандарты качества, включая надлежащую производственную практику (GMP), надлежащую сельскохозяйственную практику (GAP) и анализ опасностей и критические контрольные точки (HACCP) — не вводятся для иранских заводов по производству минеральной воды.
Заметное месячное распределение с более высокой распространенностью в июле наблюдалось у штаммов H. pylori бутилированной минеральной воды.Основная причина более высокой распространенности H. pylori летом заключается в том, что в это время года климатические явления, включая температуру, дождь и атмосферное давление, могут влиять на распространенность этой бактерии. Бактерии быстрее растут и встречаются в теплом состоянии. Yahaghi et al. (2014) [13] сообщили об аналогичном сезонном распределении для штаммов H. pylori в образцах овощей и салатов. Они показали статистически значимые различия в заболеваемости H.pylori между жарким и холодным сезонами года.
Употребление загрязненной бутилированной минеральной воды, включенной в наше исследование, может привести к желудочно-кишечным расстройствам из-за наличия устойчивых и вирулентных штаммов H. pylori . Все изолятов H. pylori в нашем исследовании были устойчивы по крайней мере к одному противомикробному препарату. При этом 12,5% изолятов были устойчивы к более чем 6 антимикробным препаратам. Кроме того, самые высокие уровни устойчивости наблюдались к шести типам противомикробных средств.Эти противомикробные препараты — лучший выбор для лечения случаев инфекции H. pylori . Фактически, в большинстве случаев язвенной болезни с признаком инфекции H. pylori используются эти противомикробные средства. К сожалению, эти типы антибиотиков обычно выписываются нерегулярно и сверх установленной нормы. Поэтому неудивительно, что большинство из штаммов H. pylori были устойчивы к этим антимикробным агентам. Подобные результаты были описаны Bang et al.(2007) [29], Thyagarajan et al. (2003) [30], Yahaghi et al. (2014) [13] и Secka et al. (2013) [31]. Bang et al., Ранее сообщали о высоком уровне резистентности штаммов H. pylori в биоптатах, взятых у пациентов с язвенной болезнью, к метронидазолу (34,7%), кларитромицину (16,7%) и амоксициллину (11,8%). (2007) [29]. Другое иранское исследование [32] показало, что распространенность устойчивости штаммов H. pylori и желудочно-кишечных расстройств к метронидазолу, кларитромицину и амоксициллину находится в диапазоне от 4 до 57%.Bahrami et al. (2011) [33] сообщили о высокой распространенности водной устойчивости H. p ylori к фуразолидону (4,5%), кларитромицину (0,9%), амоксициллину (0%), метронидазолу (36,4%) и тетрациклину (1,8%). %). Значительные уровни устойчивости штаммов H. pylori клинических образцов к метронидазолу, кларитромицину, хинолонам, амоксициллину и тетрациклину были зарегистрированы в различных странах, таких как Нигерия, Сенегал, Индия, Саудовская Аравия, Китай, Колумбия, Тайвань, Бразилия. , Таиланд, Аргентина и Египет [34].
Образцы бутилированной минеральной воды в нашем исследовании содержали H. pylori положительных генотипов vacA , cagA , cagE , iceA , oipA и babA2 . Наиболее часто обнаруживаемыми генотипами были vacAs1a (100%), vacAm1a (87,5%), cagA (62,5%) и iceA1 (62,5%). Низкая распространенность oipA (25%), babA2 (25%) и cagE (37.5%) генотипов. Число изолятов, положительных по комбинированным генотипам, также было значительным. M1as1a (62,5%), m1as2 (37,5%) и m2s2 (37,5%), а также s1a / cagA + / IceA2 / oipA- / babA2- / cagE- (50%) были наиболее часто обнаруживаемыми комбинированными генотипами. . Как видно, отрицательные штаммы cagA , oipA , babA2 и cagE H. pylori были более распространены, чем их положительные штаммы.Образцы бутилированной минеральной воды не содержали положительных штаммов cagA , cagE , babA2 и oipa H. pylori . Количество штаммов iceA2 также было низким. В соответствии с неопределенной причиной низкого распространения генотипов cagA , oipA , babA2 и cagE в штаммах H. pylori бутилированной минеральной воды, высокая распространенность патогенных генотипов может гарантировать возникновение желудочно-кишечных заболеваний. расстройства из-за потребления H.pylori положительных образца минеральной воды в бутылках нашего исследования. Количество исследований, проведенных по генотипированию H. pylori , выделенных из бутилированной минеральной воды, значительно невелико. В единственном исследовании, проведенном Yingzhi et al. (2002) [35], сообщалось о высоком содержании генотипов vacAs1a , vacAm1a и vacAs1am1a в пробах питьевой воды. Не было дополнительных ранее опубликованных данных в этой области по питьевой воде, но высокое присутствие аллелей vacAs1a , vacAm1a , vacAs2 , а также m1as1a , m1as2 , m1as1b , m1bs1b , m2s1a , m2s2 и m1am2 генотипов в H.pylori штаммов человеческих клинических образцов, таких как биопсия желудка, фекалии и слюна, сообщалось ранее [36–38]. Sedaghat et al. (2014) [39] сообщили, что распространенность генотипов cagA , iceA1 , iceA2 , oipA и babA2 в случаях клинических заболеваний человека, включая язву желудка и гастрит, составила 62,2, 48,6, 16,2, 81,1 и 94,6%, соответственно, что было аналогично нашим результатам для минеральной воды в бутылках. Высокий потенциал vacA положительных штаммов H.pylori , вызывающая клинические расстройства у человека, сообщалось ранее [11–13, 40]. Тяжесть заболеваний, вызванных babA положительными штаммами H. pylori , выше, чем babA отрицательных штаммов [41]. Мы обнаружили, что 25% из штаммов H. pylori , извлеченных из образцов минеральной воды в бутылках, имели генотип babA . Экспрессия iceA1 активируется при контакте между H. pylori и эпителиальными клетками человека и может быть связана с язвенной болезнью.Мы обнаружили, что 62,5% наших штаммов были iceA1 +. Экспрессия oipA связана с индукцией IL-8 и связана с тяжелыми клиническими исходами [11–13, 40]. Распространенность этого генотипа у штаммов H. pylori нашего исследования составила 25%.
Выводы
Насколько нам известно, настоящее исследование является первым отчетом о распространенности H. pylori в бутилированной минеральной воде, а также о его генотипировании и свойствах устойчивости к противомикробным препаратам во всем мире.Образцы бутилированной минеральной воды иранских заводов содержат вирулентные и устойчивые штаммы H. pylori , что свидетельствует о серьезной проблеме общественного здравоохранения. Марка C, июль месяц, устойчивость к ампициллину, s1a аллель, m1as1a генотип и s1a / cagA + / IceA2 / oipA- / babA2- / cagE комбинированные генотипы были наиболее часто обнаруживаемыми признаками изолятов H. pylori в бутылках. образцы минеральной воды нашего исследования. Назначение цефсулодина и фуразолидона может быть эффективным при лечении случаев H.pylori .
Методы
Сбор проб
В соответствии с распространенностью H. pylori в пробах воды в некоторых предыдущих исследованиях, количество проб было рассчитано по следующей формуле:
С апреля 2014 г. по апрель 2015 г., всего 450 Образцы бутилированной минеральной воды различных марок (AD) были случайным образом собраны в провинции Исфахан, Иран. Образцы бутилированной минеральной воды были отобраны в соответствии с протоколами, представленными Международной организацией по стандартизации (ISO 5667-1: 1980, ISO 5667-2: 1991 и ISO 5667-4: 1987).Образцы (100 мл) были доставлены в лабораторию на льду и использованы в течение 2 часов после сбора.
Выделение Helicobacter pylori
Образцы фильтровали через фильтрующие мембраны 0,045 мкм (Albet Co.). Затем каждую мембрану погружали в 2 мл триптического соевого бульона (TSB, Merck) на 1 час. После этого отбирали каждые 2 мл TSB и культивировали на H. pylori . Образцы культивировали на агаре Brucella (Merck, Германия), содержащем селективную добавку к кампилобактерам (5 мг / л, Merck), триметоприм (0.25 мг / л), метансульфонат колистина (30 мг / л), циклогексимид (100 мг / л), налидиксовая кислота (30 мг / л), триметоприм (30 мг / л), ванкомицин (10 мг / л) (Sigma, Сент-Луис, Миссури, США), амфотерицин B, овечья кровь (5%) и 7% фетальная телячья сыворотка (Sigma). После 72 ч инкубации при 37 ° C в микроаэрофильных условиях (85% N 2 , 10% CO 2 и 5% O 2 ) с использованием системы MART (Anoxamat, Lichtenvoorde, Нидерланды) был протестирован рост бактерий. и подтвержден как H. pylori с использованием тестов окрашивания по Граму, уреазы и оксидазы.
Тест на чувствительность к противомикробным препаратам
Чистые культуры H. pylori были использованы для теста на чувствительность к антибиотикам. Для этой цели был выбран один штамм из каждого H. pylori -положительного образца. Тест на чувствительность к противомикробным препаратам проводили методом дисковой диффузии Кирби-Бауэра с использованием агара Мюллера-Хинтона (Merck, Германия) с добавлением 5% дефибринированной овечьей крови и 7% фетальной телячьей сыворотки, согласно Институту клинических лабораторных стандартов (CLSI 2012) [42]. ].Устойчивость к противомикробным препаратам H. pylori была измерена по сравнению с широко используемыми антибиотиками в случаях H. pylori язвы желудка. Использовали следующие антимикробные диски (HiMedia Laboratories, Мумбаи, Индия): ампициллин (10 мкг), метронидазол (5 мкг), эритромицин (5 мкг), кларитромицин (2 мкг), амоксициллин (10 мкг), левофлоксацин (5 мкг). , цефсулодин (30 мкг), триметоприм (25 мкг), фуразолидон (1 мкг), моксифлоксацин (5 мкг), тинидазол (приготовленный из чистых порошков, Sigma, 5 мкг) и ципрофлоксацин (5 мкг).После инкубации при 37 ° C в течение 48 часов в микроаэрофильной атмосфере (85% N 2 , 10% CO2 и 5% O 2 ,) была измерена чувствительность H. pylori к каждому противомикробному препарату. Результаты были обработаны в соответствии с критериями интерпретации, предоставленными CLSI (2012) [42]. H. pylori ATCC 43504 использовался как организм для контроля качества при определении чувствительности к противомикробным препаратам.
Экстракция ДНК и амплификация гена 16S рРНК Helicobacter pylori
Подозреваемые колонии также были идентифицированы как H.pylori на основе метода ПЦР. Геномную ДНК экстрагировали из колоний с типичными признаками H. pylori с использованием набора для экстракции ДНК из клеток и тканей (Roche Applied Science, Германия, 11814770001) в соответствии с инструкциями производителя, а ее плотность оценивали с помощью оптической денситометрии. Выделенную ДНК амплифицировали для гена 16S рРНК (праймеры: HP-F: 5′-CTGGAGAGACTAAGCCCTCC-3 ‘и HP-R: 5′-ATTACTGACGCTGATTGTGC-3’) [43]. Реакции ПЦР проводили в конечном объеме 50 мкл, содержащем 5 мкл 10 × буфера + MgCl 2 , 2 мМ dNTP, 2 единицы ДНК-полимеразы Taq, 100 нг геномной ДНК в качестве матрицы и 25 пикомолей каждого праймера.ПЦР проводили с использованием термоциклера (Eppendorf Co., Германия) при следующих условиях: начальная денатурация в течение 2 мин при 94 ° C; 30 циклов при 95 ° C в течение 30 секунд, 60 ° C в течение 30 секунд и 72 ° C в течение 30 секунд и окончательное удлинение при 72 ° C в течение 8 минут.
Генотипирование генотипов vacA, cagA, cagE, iceA, babA2 и oipA в изолятах Helicobacter pylori питьевой воды
Наличие iceA1 , iceA2. Были обнаружены генотипы oipA , cagA , cagE , babA2 , а также различные генотипы аллелей vacA ( s1a , s1b , s1c , m1a , m1b и m2 ). определяется методом ПЦР.Список праймеров и программа ПЦР приведены в таблице [44–51]. ПЦР-амплификации выполняли в программируемом термоциклере (Master Cycle Gradiant, Eppendorf, Германия), и все опыты включали один отрицательный ДНК-контроль, состоящий из воды для ПЦР и двух или более положительных контролей (26695, J99, SS1, Tx30, 88–23 и 84–183).
Таблица 6
Олигонуклеотидные праймеры и условия ПЦР, используемые для генотипирования штаммов Helicobacter pylori , выделенных из иранской минеральной воды в бутылках
Гены | Последовательность праймеров (5′-3 ‘) | ) | Объем реакции ПЦР (50 мкл) | Программы ПЦР |
---|---|---|---|---|
ВАС 1 а | F: CTCTCGCTTTAGTAGGAGC | 213 | 5 мкл буфера для ПЦР 10X | 1 цикл: 95 ° C ———— 1 мин. |
R: CTGCTTGAATGCGCCAAAC | ||||
ВАС 1 б | F: AGCGCCATACCGCAAGAG | 187 | 1,5 мМ Mgcl 2 | 32 цикла: 95 ° C ———— 45 с |
CTGCTTGAATGCGCCAAAC | 200 мкг фермента NTP ) | |||
ВАС 1 c | F: CTCTCGCTTTAGTGGGGYT | 213 | 64 ° C ———— 50 с | |
R: CTGCTTGAATGCGCCAAAC | 0.5 мкМ каждого праймера F&R | |||
ВАС 2 | F: GCTAACACGCCAAATGATCC | 199 | 72 ° C ———— 70 с | |
R: CTGCTTGAATGCGCCAAAC | 1,25 U Taq ДНК-полимераза 9040 (ферментная ДНК-полимераза | |||
VacA м 1 А | F: GGTCAAAATGCGGTCATGG | 290 | 1 цикл: 72 ° C ———— 5 мин | |
R: CCATTGGTACCTGTAGAAAC | ||||
VacA м 1 B | Ф: GGCCCCAATGCAGTCATGGA | 291 | 2.5 мкл ДНК-матрицы | |
R: GCTGTTAGTGCCTAAAGAAGCAT | ||||
VacA м 2 | F: GGAGCCCCAGGAAACATTG | 352 | ||
R: CATAACTAGCGCCTTGCA | ||||
cag A | F: GATAACAGCCAAGCTTTTGAGG | 300 | 5 мкл буфера для ПЦР 10X | 1 цикл: 94 ° C ———— 1 мин. |
R: CTGCAAAAGATTGTTTGGCAGA | ||||
2 мМ Mgcl 2 | 32 цикла: 95 ° C ———— 60 с | |||
150 мкМ dNTP (ферментация) | ||||
0.75 мкМ каждого праймера F&R | 56 ° C ———— 60 с | |||
1,5 ед. ДНК-полимеразы Taq (Fermentas) | 72 ° C —— —— 60 с | |||
1 цикл: 72 ° C ———— 10 мин | ||||
3 мкл ДНК-матрицы | ||||
ледA 1 | F: GTGTTTTTAACCAAAGTATC | 247 | 5 мкл буфера для ПЦР 10X | 1 цикл: 94 ° C ———— 1 мин. |
R: CTATAGCCASTYTCTTTGCA | ||||
ледA 2 | F: GTTGGGTATCACAATTTAT | 229/334 | 2 мМ Mgcl 2 | 32 цикл: 94 ° C ———— 60 с |
R : TTRCCCTATTTTCTAGTAGGT | 200 мкМ dNTP (Fermentas) | |||
56 ° C ———— 60 с | ||||
0.5 мкМ каждого праймера F&R | ||||
72 ° C ———— 60 с | ||||
1,5 ед. ДНК-полимеразы Taq (Fermentas) | ||||
1 цикл: 72 ° C ———— 8 мин | ||||
5 мкл ДНК-матрицы | ||||
oip A | F: GTTTTTGATGCATGGGATTT | 401 | 5 мкл буфера для ПЦР 10X | 1 цикл: 94 ° C ———— 2 мин. |
R: GTGCATCTCTTATGGCTTT | ||||
2.5 мМ Mgcl 2 | 32 цикла: 94 ° C ———— 60 с | |||
200 мкМ dNTP (Fermentas) | ||||
56 ° C —— ——- 60 с | ||||
0,5 мкМ каждого праймера F&R | ||||
72 ° C ———— 60 с | ||||
2 U Taq ДНК полимераза (Fermentas) | ||||
1 цикл: 72 ° C ———— 10 мин | ||||
3 мкл ДНК-матрицы | ||||
CAGE | F: TTGAAAACTTCAAGGATAGGATAGAGC R: GCCTAGCGTAATATCACCATTACCC | 508 | 5 мкл буфера для ПЦР 10X | 1 цикл: 94 ° C ———— 1 мин. |
2 мМ Mgcl 2 | 35 цикл: 94 ° C ———— 60 с | |||
150 мкМ dNTP (Fermentas) | ||||
53 ° C — ———— 45 с | ||||
0,75 мкМ каждого праймера F&R | ||||
72 ° C ———— 45 мин | ||||
1,5 ед. ДНК-полимеразы Taq (Fermentas) | ||||
1 цикл: 72 ° C ———— 8 мин | ||||
3 мкл ДНК-матрицы | ||||
БабА2 | F: CCAAACGAAACAAAAAGCGT | 271 | 5 мкл буфера для ПЦР 10X | 1 цикл: 95 ° C ———— 1 мин. |
R: GCTTGTGTAAAAGCCGTCGT | ||||
1,5 мМ Mgcl 2 | 30 цикл: 91 ° C ———— 60 с | |||
200 мкМ dNTP (Fermentas) | ||||
45 ° C ———— 60 с | ||||
0,5 мкМ каждого праймера F&R | ||||
72 ° C ———— — 60 с | ||||
1,25 U Taq ДНК-полимераза (Fermentas) | ||||
1 цикл: 72 ° C ———— 8 мин | ||||
2.5 мкл ДНК-матрицы |
Гель-электрофорез
Продукты амплификации ПЦР (10 мкл) подвергали электрофорезу в 2,5% агарозном геле в 1X буфере TBE при 80 В в течение 30 мин, окрашивали бромидом этидия, и изображения были получены в системе документации гелей UVIdoc (Великобритания). Продукты ПЦР идентифицировали по ДНК-маркеру размером 100 п.н. (Fermentas, Германия) [52].
Статистический анализ
Данные были перенесены в электронные таблицы Microsoft Excel (Microsoft Corp., Редмонд, Вашингтон, США) для анализа. Используя статистическое программное обеспечение SPSS 16.0 (SPSS Inc., Чикаго, Иллинойс, США), был проведен анализ критерия хи-квадрат и точного двустороннего критерия Фишера, и различия считались значимыми при значениях P <0,05. Статистически проанализировано распределение генотипов H. pylori , выделенных из бутилированной минеральной воды.
Аббревиатуры
AM | Ампициллин | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
AMX | Амоксициллин | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
babA |
Cyclin-связывающий ген 9403 903 903 903 903 903 9040 9404 9403 903 9040 | Cef | Цефсулодин | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
CLR | Кларитромицин | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
CLSI | Институт клинических лабораторных стандартов | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
ER | 9|||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
ER | 91 9231 9231 9231 9231Erythromycin | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Helicobacter pylori | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
iceA | Индуцируется контактом с эпителиальным антигеном | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Lev | Levofloxacin | Levofloxacin | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
ПЦР | Полимеразная цепная реакция | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
TRP | Триметоприм | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
vacA | Вакуолизирующий цитотоксин стопы 002 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Тип бутилированной минеральной воды | No.отобранных образцов | № изолятов Helicobacter pylori (%) | № изолятов, подтвержденных с помощью ПЦР на основе 16SrRNA (%) | |
---|---|---|---|---|
Бренды | A | 120 | 120 (0,8 a | 1 (0,83) a |
B | 110 | 1 (0,90) a | 1 (0,90) a | |
C 110 4 | 9040 ) b4 (3.63) b | |||
D | 110 | 2 (1.81) a | 2 (1.81) a | |
Всего | 450 | 8 (1.40775) 8 (1.40775) ) | ||
Сезоны | Весна | 112 | 1 (0,89) a | 1 (0,89) a |
Лето | 110 | 620 904 (4.54) b | ||
Осень | 113 | 1 (0.88) a | 1 (0,88) a | |
Зима | 115 | — | — | |
Всего | 450 | 8 (1.7740) | 9099
Месячная распространенность Helicobacter pylori в протестированных образцах бутилированной минеральной воды
Результаты анализа устойчивости к противомикробным препаратам изолятов H. pylori в тестируемых образцах бутилированной минеральной воды представлены в таблице. H. pylori Штаммы бутилированной минеральной воды обладают наивысшим уровнем устойчивости к ампициллину (75%), за ним следуют метронидазол (62,5%), эритромицин (62,5%), кларитромицин (62,5%), амоксициллин (62,5%) и триметоприм. (62,5%) противомикробные средства. Распространенность устойчивости к антибиотикам против моксифлоксацина, тинидазола и ципрофлоксацина составляла 25, 50 и 50% соответственно. Были статистически значимые различия в уровнях устойчивости к антибиотикам между ампициллином и цефсулодином ( P = 0.013), ампициллин и фуразолидон ( P = 0,018), кларитромицин и фуразолидон ( P = 0,029) и ампициллин и моксифлоксацин ( P = 0,027). Распространенность множественной лекарственной устойчивости штаммов H. pylori в пробах бутилированной минеральной воды показана на рис. Все 8 штаммов H. pylori были устойчивы по крайней мере к одному из протестированных антибиотиков. Наивысшие уровни устойчивости были обнаружены только у одного изолята, устойчивого к 10 антибиотикам.
Таблица 2
Модель устойчивости к противомикробным препаратам изолятов Helicobacter pylori протестированных образцов минеральной воды в бутылках
Бренды (количество положительных) | Структура устойчивости к антибиотикам (%) | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
AM10 Met5 | ER5 | CLR2 | AMX 10 | Lev5 | Cef30 | TRP25 | FZL1 | Mox5 | Tin4 | | CIP5 9040 1 9038 | | CIP5 9038 | CIP5 9038 a | 1 (100) a | 1 (100) a | 1 (100) a | 1 (100) a | — | — | — | — | — | — | | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
B (1) | 1 (100) a | 1 (100) a | 1 (100) a | 1 (100) a | 1 (100) a | 1 (100) a | — | 1 (100) a | — | — | 1 (100) a | 100) a | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
C (4) | 2 (50) a | 2 (50) a | 2 (50) a | 2 (50) a | 2 (50) a | 2 (50) a | 1 (25) b | 3 (75) a | 1 (25) b | 1 (25) b | 2 (50) a | 2 (50) a | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
D (2) | 2 (100) a | 1 (50) a | 1 (50 ) a | 1 (50) a | 1 (50) a | 1 (50) a | 1 (50) b | 1 (50) a | 1 (50) б | 1 (50) b | 1 (50) a | 1 (50) a | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Всего (8) | 6 (75) a, * | 5 ( 62.5) a | 5 (62,5) a | 5 (62,5) a | 5 (62,5) a | 4 (50) a | 2 (25) b | 5 (62,5) a | 2 (25) b | 2 (25) b | 4 (50) a | 4 (50) a |
Бренды (кол-во положительных) | Распределение различных генотипов (%) | ||||||||||||
---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
S1a | S1b | S1c | S2 | M1a | M1b | M2 | CagA | IceA1 | IceA2 | OipA | БабА2 | CAGE | |
A (1) | 1 (100) | — | — | 1 (100) | 1 (100) | — | 1 (100) | 1 (100) | 1 (100) | — | — | — | 1 (100) |
B (1) | 1 (100) | — | — | — | 1 (100) 1 (100)— | 1 (100) | 1 (100) | 1 (100) | — | — | 1 (100) | 1 (100) | |
C (4) | 4 ( 100) | 1 (25) | — | 2 (50) | 4 (100) | 1 (25) | 1 (25) | 2 (50) | 2 (50) | 1 (25) | 1 (25) | 1 (25) | 1 (25) |
D (2) | 2 (100) | 1 (50) | — | 1 (50) | 1 (50) | 1 (50) | 1 (50) | 1 (50) | 1 (50) | — | 1 (50) | — | — |
Всего (8) | 8 (100) | 2 ( 25) | — | 4 (50) | 7 (87.5) | 2 (25) | 4 (50) | 5 (62,5) | 5 (62,5) | 1 (12,5) | 2 (25) | 2 (25) | 3 (37,5) |
Таблица 4
Распределение комбинированных генотипов Helicobacter pylori , выделенных из протестированных образцов минеральной воды в бутылках
Генотипы | Распространенность (%) * | |||
---|---|---|---|---|
M1as1b | 1 (12,5) | |||
M1bs1a | 1 (12,5) | |||
M1bs1b | — | 9040 | ||
M2s1a | 2 (25) | |||
M2s1b | 1 (12,5) | |||
M2s1c | — | |||
M2s2 | ||||
M2s2 | 35) | |||
M1bs2 | 1 (12,5) | |||
M1am2 | 2 (25) | |||
M1bm2 | — | |||
CagA | 3 (37,5) | |||
CagE + | 3 (37,5) | |||
CagE- | 5 (62,5) | |||
IceA1 | 5 (62,5) | 5 (62,5) | 9038 Ice||
IceA1 IceA2 | — | |||
OipA + | 2 (25) | |||
OipA- | 6 (75) | |||
9038babA2 | 6 (75) |
Таблица 5
Комбинированные vacA , cagA , cagE , iceA , babA2 и oipA выделенные генотипы Helicobacter pylori из протестированных образцов минеральной воды
Комбинированный генотип * | Частота (%) | |||||
---|---|---|---|---|---|---|
S1a / cagA + / IceA1 / oipA + / babA2 + / cagE + | 1 (12.5) | |||||
S1a / cagA + / IceA1 / oipA- / babA2 + / cagE + | 2 (25) | |||||
S1a / cagA- / IceA1 / oipA- / babA2 + / cagE + | S1a / cagA + / IceA1 / oipA + / babA2- / cagE + | 2 (25) | ||||
S1a / cagA + / IceA1 / oipA + / babA2 + / cagE- | 1 (12,5) | 2 (25) | ||||
S1a / cagA- / IceA1 / oipA- / babA2- / cagE- | 3 (37,5) | |||||
S1a / cagA oipA + / Ice / babA2- / cagE- | 2 (25) | |||||
S1a / cagA + / IceA1 / oipA- / babA2 + — / cagE- | 2 (25) | |||||
S1a / cagA + / Ice-A2 / oipA + / Ice-A2 / oip babA2- / cagE- | 4 (50) | |||||
S1b / cagA + / IceA1 / oipA + / babA2- / cagE + | 1 (12.5) | |||||
S1b / cagA + / IceA1 / oipA + / babA2 + / cagE- | 1 (12,5) | |||||
S1b / cagA + / IceA1 / oipA- / babA2- / cagE4 | ||||||
S2 / cagA- / IceA1 / oipA + / babA2 + / cagE + | 1 (12,5) | |||||
S2 / cagA + / IceA1 / oipA- / babA2 + / cagE + | 1 (12,5) | 1 (12,5) | ||||
S2 / cagA + / IceA1 / oipA + / babA2- / cagE + | 1 (12,5) | |||||
S2 / cagA + / cagE- | 1 (12.5) | |||||
S2 / cagA + / IceA1 / oipA + / babA2- / cagE- | 1 (12,5) | |||||
S2 / cagA + / IceA1 / oipA- / babA2 + / cagE- | 2 (2599) | |||||
S2 / cagA + / IceA1 / oipA- / babA2- / cagE + | 2 (25) | |||||
S2 / cagA + / IceA1 / oipA- / babA2- / cagE- | 3 (37,5) | 1 (12,5) | ||||
M1a / cagA- / IceA1 / oipA + / babA2 + / cagE + | 1 (12,5) | |||||
1 (12.5) | ||||||
M1a / cagA- / IceA1 / oipA- / babA2 + / cagE + | 1 (12,5) | |||||
M1a / cagA + / IceA1 / oipA + / babA2- / cagE + 1 | 9040 9038M1a / cagA + / IceA1 / oipA + / babA2 + / cagE- | 2 (25) | ||||
M1a / cagA + / IceA1 / oipA + / babA2- / cagE- | 2 (25) | 99A M1a / cagE- / IceA1 / oipA- / babA2- / cagE- | 2 (25) | |||
M1a / cagA + / IceA1 / oipA + / babA2 + / cagE- | 1 (12.5) | |||||
M1a / cagA + / IceA1 / oipA- / babA2- / cagE + | 2 (25) | |||||
M1a / cagA + / IceA1 / oipA- / babA2 + / cagE4 | 2 | |||||
M1a / cagA + / IceA2 / oipA- / babA2- / cagE- | 3 (37,5) | |||||
M1b / cagA + / IceA1 / oipA- / babA2 + / cagE + | 1 (12,599) | 1 (12,599) | cagA + / IceA1 / oipA + / babA2- / cagE + | 1 (12,5) | ||
M1b / cagA + / IceA1 / oipA + / babA2 + / cagE- | 1 (12.5) | |||||
M1b / cagA + / IceA1 / oipA- / babA2- / cagE- | 1 (12,5) | |||||
M2 / cagA + / iceA1 / oipA + / babA2 + / cagE + | M2 / cagA- / IceA1 / oipA + / babA2 + / cagE + | 1 (12,5) | ||||
M2 / cagA + / IceA1 / oipA- / babA2 + / cagE + | 1 (12,5) | cag399 9038 / cag399 9038 IceA1 / oipA- / babA2 + / cagE +1 (12,5) | ||||
M2 / cagA + / IceA1 / oipA + / babA2- / cagE + | 1 (12.5) | |||||
M2 / cagA + / IceA1 / oipA + / babA2 + / cagE- | 1 (12,5) | |||||
M2 / cagA + / IceA1 / oipA + / babA2- / cagE- | 2 | M2 / cagA + / IceA1 / oipA- / babA2 + / cagE- | 2 (25) | |||
M2 / cagA + / IceA1 / oipA- / babA2- / cagE- | 3 (37,5) |
Настоящее исследование было проведено для изучения распространенности H. pylori в образцах бутилированной минеральной воды 4 основных брендов в Иране, а также для определения распределения vacA , cagA , cagE , iceA , oipA и babA2 Статус генотипа и паттерны устойчивости к антибиотикам H.pylori . Насколько нам известно, это первый отчет о распространенности генотипирования и свойств устойчивости к противомикробным препаратам H. pylori в пробах минеральной воды в бутылках в мире. Мы обнаружили, что 1,77% проб минеральной воды в бутылках были загрязнены устойчивыми и вирулентными штаммами H. pylori . Что касается высокой точности производства минеральной воды, наши результаты свидетельствуют о серьезном беспокойстве для здоровья населения.
В отличие от результатов нашего исследования, Watson et al.(2004) [21] не удалось изолировать H.py lori из образцов питьевой воды Соединенного Королевства. Выделение H. pylori с использованием питательной среды важно из-за необходимости обнаружения жизнеспособных бактерий в воде. Предыдущее исследование в Иране [1] показало, что распределение H. pylori в различных типах проб воды, включая водопроводную воду, воду стоматологических установок и водоохладитель в общественных местах, находится в диапазоне 2–6%, что выше, чем наши результаты. Нургалиева и др.(2002) [22] выявили, что речная вода является высоким фактором риска заражения H. pylori в Казахстане. Соответственно, они заявили, что передача H. pylori может передаваться через воду. Питьевая вода может представлять серьезную угрозу для передачи H. pylori по нескольким важным критериям [23]. Эти критерии включают способность H. pylori прилипать к различным материалам и совместно с другими бактериями образовывать сложные структуры на трубах или других поверхностях, контактирующих с водой [23].Представление о неспособности H. pylori выживать в одиночестве в проточной воде, но при этом развивать симбиотические отношения и формировать сложные структуры на контактных поверхностях [24], делает рациональным предположение, что подземные воды являются резервуаром для H. pylori из-за его застойного характера. Учитывая частое использование грунтовых вод при производстве бутилированной минеральной воды, неудивительно, что 1,77% наших проб оказались положительными на эту бактерию. Несколько исследований показали значительную распространенность H.pylori в пробах подземных вод между 1999–2007 гг. в США [25–27] и Японии [28].
Другими возможными причинами высокой распространенности H. pylori в образцах бутилированной минеральной воды в Иране являются: а) отсутствие компетентных подходов к санитарной обработке воды б) использование недоверчивых грунтовых вод для производства минеральной воды в бутылках в) возможность присутствия бактериальных колоний в виде биопленки в трубах, используемых для перекачки воды d) возможность утечки бытовых, промышленных и сельскохозяйственных сточных вод в источники минеральной воды и, наконец, e) несоблюдение личной гигиены персонала цеха нефтепереработки.Учитывая высокую распространенность H. pylori в образцах бутилированной минеральной воды, можно сделать вывод, что правила безопасности пищевых продуктов, а также стандарты качества, включая надлежащую производственную практику (GMP), надлежащую сельскохозяйственную практику (GAP) и анализ опасностей и критические контрольные точки (HACCP) — не вводятся для иранских заводов по производству минеральной воды.
Заметное месячное распределение с более высокой распространенностью в июле наблюдалось у штаммов H. pylori бутилированной минеральной воды.Основная причина более высокой распространенности H. pylori летом заключается в том, что в это время года климатические явления, включая температуру, дождь и атмосферное давление, могут влиять на распространенность этой бактерии. Бактерии быстрее растут и встречаются в теплом состоянии. Yahaghi et al. (2014) [13] сообщили об аналогичном сезонном распределении для штаммов H. pylori в образцах овощей и салатов. Они показали статистически значимые различия в заболеваемости H.pylori между жарким и холодным сезонами года.
Употребление загрязненной бутилированной минеральной воды, включенной в наше исследование, может привести к желудочно-кишечным расстройствам из-за наличия устойчивых и вирулентных штаммов H. pylori . Все изолятов H. pylori в нашем исследовании были устойчивы по крайней мере к одному противомикробному препарату. При этом 12,5% изолятов были устойчивы к более чем 6 антимикробным препаратам. Кроме того, самые высокие уровни устойчивости наблюдались к шести типам противомикробных средств.Эти противомикробные препараты — лучший выбор для лечения случаев инфекции H. pylori . Фактически, в большинстве случаев язвенной болезни с признаком инфекции H. pylori используются эти противомикробные средства. К сожалению, эти типы антибиотиков обычно выписываются нерегулярно и сверх установленной нормы. Поэтому неудивительно, что большинство из штаммов H. pylori были устойчивы к этим антимикробным агентам. Подобные результаты были описаны Bang et al.(2007) [29], Thyagarajan et al. (2003) [30], Yahaghi et al. (2014) [13] и Secka et al. (2013) [31]. Bang et al., Ранее сообщали о высоком уровне резистентности штаммов H. pylori в биоптатах, взятых у пациентов с язвенной болезнью, к метронидазолу (34,7%), кларитромицину (16,7%) и амоксициллину (11,8%). (2007) [29]. Другое иранское исследование [32] показало, что распространенность устойчивости штаммов H. pylori и желудочно-кишечных расстройств к метронидазолу, кларитромицину и амоксициллину находится в диапазоне от 4 до 57%.Bahrami et al. (2011) [33] сообщили о высокой распространенности водной устойчивости H. p ylori к фуразолидону (4,5%), кларитромицину (0,9%), амоксициллину (0%), метронидазолу (36,4%) и тетрациклину (1,8%). %). Значительные уровни устойчивости штаммов H. pylori клинических образцов к метронидазолу, кларитромицину, хинолонам, амоксициллину и тетрациклину были зарегистрированы в различных странах, таких как Нигерия, Сенегал, Индия, Саудовская Аравия, Китай, Колумбия, Тайвань, Бразилия. , Таиланд, Аргентина и Египет [34].
Образцы бутилированной минеральной воды в нашем исследовании содержали H. pylori положительных генотипов vacA , cagA , cagE , iceA , oipA и babA2 . Наиболее часто обнаруживаемыми генотипами были vacAs1a (100%), vacAm1a (87,5%), cagA (62,5%) и iceA1 (62,5%). Низкая распространенность oipA (25%), babA2 (25%) и cagE (37.5%) генотипов. Число изолятов, положительных по комбинированным генотипам, также было значительным. M1as1a (62,5%), m1as2 (37,5%) и m2s2 (37,5%), а также s1a / cagA + / IceA2 / oipA- / babA2- / cagE- (50%) были наиболее часто обнаруживаемыми комбинированными генотипами. . Как видно, отрицательные штаммы cagA , oipA , babA2 и cagE H. pylori были более распространены, чем их положительные штаммы.Образцы бутилированной минеральной воды не содержали положительных штаммов cagA , cagE , babA2 и oipa H. pylori . Количество штаммов iceA2 также было низким. В соответствии с неопределенной причиной низкого распространения генотипов cagA , oipA , babA2 и cagE в штаммах H. pylori бутилированной минеральной воды, высокая распространенность патогенных генотипов может гарантировать возникновение желудочно-кишечных заболеваний. расстройства из-за потребления H.pylori положительных образца минеральной воды в бутылках нашего исследования. Количество исследований, проведенных по генотипированию H. pylori , выделенных из бутилированной минеральной воды, значительно невелико. В единственном исследовании, проведенном Yingzhi et al. (2002) [35], сообщалось о высоком содержании генотипов vacAs1a , vacAm1a и vacAs1am1a в пробах питьевой воды. Не было дополнительных ранее опубликованных данных в этой области по питьевой воде, но высокое присутствие аллелей vacAs1a , vacAm1a , vacAs2 , а также m1as1a , m1as2 , m1as1b , m1bs1b , m2s1a , m2s2 и m1am2 генотипов в H.pylori штаммов человеческих клинических образцов, таких как биопсия желудка, фекалии и слюна, сообщалось ранее [36–38]. Sedaghat et al. (2014) [39] сообщили, что распространенность генотипов cagA , iceA1 , iceA2 , oipA и babA2 в случаях клинических заболеваний человека, включая язву желудка и гастрит, составила 62,2, 48,6, 16,2, 81,1 и 94,6%, соответственно, что было аналогично нашим результатам для минеральной воды в бутылках. Высокий потенциал vacA положительных штаммов H.pylori , вызывающая клинические расстройства у человека, сообщалось ранее [11–13, 40]. Тяжесть заболеваний, вызванных babA положительными штаммами H. pylori , выше, чем babA отрицательных штаммов [41]. Мы обнаружили, что 25% из штаммов H. pylori , извлеченных из образцов минеральной воды в бутылках, имели генотип babA . Экспрессия iceA1 активируется при контакте между H. pylori и эпителиальными клетками человека и может быть связана с язвенной болезнью.Мы обнаружили, что 62,5% наших штаммов были iceA1 +. Экспрессия oipA связана с индукцией IL-8 и связана с тяжелыми клиническими исходами [11–13, 40]. Распространенность этого генотипа у штаммов H. pylori нашего исследования составила 25%.
Выводы
Насколько нам известно, настоящее исследование является первым отчетом о распространенности H. pylori в бутилированной минеральной воде, а также о его генотипировании и свойствах устойчивости к противомикробным препаратам во всем мире.Образцы бутилированной минеральной воды иранских заводов содержат вирулентные и устойчивые штаммы H. pylori , что свидетельствует о серьезной проблеме общественного здравоохранения. Марка C, июль месяц, устойчивость к ампициллину, s1a аллель, m1as1a генотип и s1a / cagA + / IceA2 / oipA- / babA2- / cagE комбинированные генотипы были наиболее часто обнаруживаемыми признаками изолятов H. pylori в бутылках. образцы минеральной воды нашего исследования. Назначение цефсулодина и фуразолидона может быть эффективным при лечении случаев H.pylori .
Методы
Сбор проб
В соответствии с распространенностью H. pylori в пробах воды в некоторых предыдущих исследованиях, количество проб было рассчитано по следующей формуле:
С апреля 2014 г. по апрель 2015 г., всего 450 Образцы бутилированной минеральной воды различных марок (AD) были случайным образом собраны в провинции Исфахан, Иран. Образцы бутилированной минеральной воды были отобраны в соответствии с протоколами, представленными Международной организацией по стандартизации (ISO 5667-1: 1980, ISO 5667-2: 1991 и ISO 5667-4: 1987).Образцы (100 мл) были доставлены в лабораторию на льду и использованы в течение 2 часов после сбора.
Выделение Helicobacter pylori
Образцы фильтровали через фильтрующие мембраны 0,045 мкм (Albet Co.). Затем каждую мембрану погружали в 2 мл триптического соевого бульона (TSB, Merck) на 1 час. После этого отбирали каждые 2 мл TSB и культивировали на H. pylori . Образцы культивировали на агаре Brucella (Merck, Германия), содержащем селективную добавку к кампилобактерам (5 мг / л, Merck), триметоприм (0.25 мг / л), метансульфонат колистина (30 мг / л), циклогексимид (100 мг / л), налидиксовая кислота (30 мг / л), триметоприм (30 мг / л), ванкомицин (10 мг / л) (Sigma, Сент-Луис, Миссури, США), амфотерицин B, овечья кровь (5%) и 7% фетальная телячья сыворотка (Sigma). После 72 ч инкубации при 37 ° C в микроаэрофильных условиях (85% N 2 , 10% CO 2 и 5% O 2 ) с использованием системы MART (Anoxamat, Lichtenvoorde, Нидерланды) был протестирован рост бактерий. и подтвержден как H. pylori с использованием тестов окрашивания по Граму, уреазы и оксидазы.
Тест на чувствительность к противомикробным препаратам
Чистые культуры H. pylori были использованы для теста на чувствительность к антибиотикам. Для этой цели был выбран один штамм из каждого H. pylori -положительного образца. Тест на чувствительность к противомикробным препаратам проводили методом дисковой диффузии Кирби-Бауэра с использованием агара Мюллера-Хинтона (Merck, Германия) с добавлением 5% дефибринированной овечьей крови и 7% фетальной телячьей сыворотки, согласно Институту клинических лабораторных стандартов (CLSI 2012) [42]. ].Устойчивость к противомикробным препаратам H. pylori была измерена по сравнению с широко используемыми антибиотиками в случаях H. pylori язвы желудка. Использовали следующие антимикробные диски (HiMedia Laboratories, Мумбаи, Индия): ампициллин (10 мкг), метронидазол (5 мкг), эритромицин (5 мкг), кларитромицин (2 мкг), амоксициллин (10 мкг), левофлоксацин (5 мкг). , цефсулодин (30 мкг), триметоприм (25 мкг), фуразолидон (1 мкг), моксифлоксацин (5 мкг), тинидазол (приготовленный из чистых порошков, Sigma, 5 мкг) и ципрофлоксацин (5 мкг).После инкубации при 37 ° C в течение 48 часов в микроаэрофильной атмосфере (85% N 2 , 10% CO2 и 5% O 2 ,) была измерена чувствительность H. pylori к каждому противомикробному препарату. Результаты были обработаны в соответствии с критериями интерпретации, предоставленными CLSI (2012) [42]. H. pylori ATCC 43504 использовался как организм для контроля качества при определении чувствительности к противомикробным препаратам.
Экстракция ДНК и амплификация гена 16S рРНК Helicobacter pylori
Подозреваемые колонии также были идентифицированы как H.pylori на основе метода ПЦР. Геномную ДНК экстрагировали из колоний с типичными признаками H. pylori с использованием набора для экстракции ДНК из клеток и тканей (Roche Applied Science, Германия, 11814770001) в соответствии с инструкциями производителя, а ее плотность оценивали с помощью оптической денситометрии. Выделенную ДНК амплифицировали для гена 16S рРНК (праймеры: HP-F: 5′-CTGGAGAGACTAAGCCCTCC-3 ‘и HP-R: 5′-ATTACTGACGCTGATTGTGC-3’) [43]. Реакции ПЦР проводили в конечном объеме 50 мкл, содержащем 5 мкл 10 × буфера + MgCl 2 , 2 мМ dNTP, 2 единицы ДНК-полимеразы Taq, 100 нг геномной ДНК в качестве матрицы и 25 пикомолей каждого праймера.ПЦР проводили с использованием термоциклера (Eppendorf Co., Германия) при следующих условиях: начальная денатурация в течение 2 мин при 94 ° C; 30 циклов при 95 ° C в течение 30 секунд, 60 ° C в течение 30 секунд и 72 ° C в течение 30 секунд и окончательное удлинение при 72 ° C в течение 8 минут.
Генотипирование генотипов vacA, cagA, cagE, iceA, babA2 и oipA в изолятах Helicobacter pylori питьевой воды
Наличие iceA1 , iceA2. Были обнаружены генотипы oipA , cagA , cagE , babA2 , а также различные генотипы аллелей vacA ( s1a , s1b , s1c , m1a , m1b и m2 ). определяется методом ПЦР.Список праймеров и программа ПЦР приведены в таблице [44–51]. ПЦР-амплификации выполняли в программируемом термоциклере (Master Cycle Gradiant, Eppendorf, Германия), и все опыты включали один отрицательный ДНК-контроль, состоящий из воды для ПЦР и двух или более положительных контролей (26695, J99, SS1, Tx30, 88–23 и 84–183).
Таблица 6
Олигонуклеотидные праймеры и условия ПЦР, используемые для генотипирования штаммов Helicobacter pylori , выделенных из иранской минеральной воды в бутылках
Гены | Последовательность праймеров (5′-3 ‘) | ) | Объем реакции ПЦР (50 мкл) | Программы ПЦР |
---|---|---|---|---|
ВАС 1 а | F: CTCTCGCTTTAGTAGGAGC | 213 | 5 мкл буфера для ПЦР 10X | 1 цикл: 95 ° C ———— 1 мин. |
R: CTGCTTGAATGCGCCAAAC | ||||
ВАС 1 б | F: AGCGCCATACCGCAAGAG | 187 | 1,5 мМ Mgcl 2 | 32 цикла: 95 ° C ———— 45 с |
CTGCTTGAATGCGCCAAAC | 200 мкг фермента NTP ) | |||
ВАС 1 c | F: CTCTCGCTTTAGTGGGGYT | 213 | 64 ° C ———— 50 с | |
R: CTGCTTGAATGCGCCAAAC | 0.5 мкМ каждого праймера F&R | |||
ВАС 2 | F: GCTAACACGCCAAATGATCC | 199 | 72 ° C ———— 70 с | |
R: CTGCTTGAATGCGCCAAAC | 1,25 U Taq ДНК-полимераза 9040 (ферментная ДНК-полимераза | |||
VacA м 1 А | F: GGTCAAAATGCGGTCATGG | 290 | 1 цикл: 72 ° C ———— 5 мин | |
R: CCATTGGTACCTGTAGAAAC | ||||
VacA м 1 B | Ф: GGCCCCAATGCAGTCATGGA | 291 | 2.5 мкл ДНК-матрицы | |
R: GCTGTTAGTGCCTAAAGAAGCAT | ||||
VacA м 2 | F: GGAGCCCCAGGAAACATTG | 352 | ||
R: CATAACTAGCGCCTTGCA | ||||
cag A | F: GATAACAGCCAAGCTTTTGAGG | 300 | 5 мкл буфера для ПЦР 10X | 1 цикл: 94 ° C ———— 1 мин. |
R: CTGCAAAAGATTGTTTGGCAGA | ||||
2 мМ Mgcl 2 | 32 цикла: 95 ° C ———— 60 с | |||
150 мкМ dNTP (ферментация) | ||||
0.75 мкМ каждого праймера F&R | 56 ° C ———— 60 с | |||
1,5 ед. ДНК-полимеразы Taq (Fermentas) | 72 ° C —— —— 60 с | |||
1 цикл: 72 ° C ———— 10 мин | ||||
3 мкл ДНК-матрицы | ||||
ледA 1 | F: GTGTTTTTAACCAAAGTATC | 247 | 5 мкл буфера для ПЦР 10X | 1 цикл: 94 ° C ———— 1 мин. |
R: CTATAGCCASTYTCTTTGCA | ||||
ледA 2 | F: GTTGGGTATCACAATTTAT | 229/334 | 2 мМ Mgcl 2 | 32 цикл: 94 ° C ———— 60 с |
R : TTRCCCTATTTTCTAGTAGGT | 200 мкМ dNTP (Fermentas) | |||
56 ° C ———— 60 с | ||||
0.5 мкМ каждого праймера F&R | ||||
72 ° C ———— 60 с | ||||
1,5 ед. ДНК-полимеразы Taq (Fermentas) | ||||
1 цикл: 72 ° C ———— 8 мин | ||||
5 мкл ДНК-матрицы | ||||
oip A | F: GTTTTTGATGCATGGGATTT | 401 | 5 мкл буфера для ПЦР 10X | 1 цикл: 94 ° C ———— 2 мин. |
R: GTGCATCTCTTATGGCTTT | ||||
2.5 мМ Mgcl 2 | 32 цикла: 94 ° C ———— 60 с | |||
200 мкМ dNTP (Fermentas) | ||||
56 ° C —— ——- 60 с | ||||
0,5 мкМ каждого праймера F&R | ||||
72 ° C ———— 60 с | ||||
2 U Taq ДНК полимераза (Fermentas) | ||||
1 цикл: 72 ° C ———— 10 мин | ||||
3 мкл ДНК-матрицы | ||||
CAGE | F: TTGAAAACTTCAAGGATAGGATAGAGC R: GCCTAGCGTAATATCACCATTACCC | 508 | 5 мкл буфера для ПЦР 10X | 1 цикл: 94 ° C ———— 1 мин. |
2 мМ Mgcl 2 | 35 цикл: 94 ° C ———— 60 с | |||
150 мкМ dNTP (Fermentas) | ||||
53 ° C — ———— 45 с | ||||
0,75 мкМ каждого праймера F&R | ||||
72 ° C ———— 45 мин | ||||
1,5 ед. ДНК-полимеразы Taq (Fermentas) | ||||
1 цикл: 72 ° C ———— 8 мин | ||||
3 мкл ДНК-матрицы | ||||
БабА2 | F: CCAAACGAAACAAAAAGCGT | 271 | 5 мкл буфера для ПЦР 10X | 1 цикл: 95 ° C ———— 1 мин. |
R: GCTTGTGTAAAAGCCGTCGT | ||||
1,5 мМ Mgcl 2 | 30 цикл: 91 ° C ———— 60 с | |||
200 мкМ dNTP (Fermentas) | ||||
45 ° C ———— 60 с | ||||
0,5 мкМ каждого праймера F&R | ||||
72 ° C ———— — 60 с | ||||
1,25 U Taq ДНК-полимераза (Fermentas) | ||||
1 цикл: 72 ° C ———— 8 мин | ||||
2.5 мкл ДНК-матрицы |
Гель-электрофорез
Продукты амплификации ПЦР (10 мкл) подвергали электрофорезу в 2,5% агарозном геле в 1X буфере TBE при 80 В в течение 30 мин, окрашивали бромидом этидия, и изображения были получены в системе документации гелей UVIdoc (Великобритания). Продукты ПЦР идентифицировали по ДНК-маркеру размером 100 п.н. (Fermentas, Германия) [52].
Статистический анализ
Данные были перенесены в электронные таблицы Microsoft Excel (Microsoft Corp., Редмонд, Вашингтон, США) для анализа. Используя статистическое программное обеспечение SPSS 16.0 (SPSS Inc., Чикаго, Иллинойс, США), был проведен анализ критерия хи-квадрат и точного двустороннего критерия Фишера, и различия считались значимыми при значениях P <0,05. Статистически проанализировано распределение генотипов H. pylori , выделенных из бутилированной минеральной воды.
Аббревиатуры
AM | Ампициллин | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
AMX | Амоксициллин | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
babA |
Cyclin-связывающий ген 9403 903 903 903 903 903 9040 9404 9403 903 9040 | Cef | Цефсулодин | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
CLR | Кларитромицин | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
CLSI | Институт клинических лабораторных стандартов | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
ER | 9|||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
ER | 91 9231 9231 9231 9231Erythromycin | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Helicobacter pylori | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
iceA | Индуцируется контактом с эпителиальным антигеном | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Lev | Levofloxacin | Levofloxacin | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
ПЦР | Полимеразная цепная реакция | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
TRP | Триметоприм | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
vacA | Вакуолизирующий цитотоксин стопы 002 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Тип бутилированной минеральной воды | No.отобранных образцов | № изолятов Helicobacter pylori (%) | № изолятов, подтвержденных с помощью ПЦР на основе 16SrRNA (%) | |
---|---|---|---|---|
Бренды | A | 120 | 120 (0,8 a | 1 (0,83) a |
B | 110 | 1 (0,90) a | 1 (0,90) a | |
C 110 4 | 9040 ) b4 (3.63) b | |||
D | 110 | 2 (1.81) a | 2 (1.81) a | |
Всего | 450 | 8 (1.40775) 8 (1.40775) ) | ||
Сезоны | Весна | 112 | 1 (0,89) a | 1 (0,89) a |
Лето | 110 | 620 904 (4.54) b | ||
Осень | 113 | 1 (0.88) a | 1 (0,88) a | |
Зима | 115 | — | — | |
Всего | 450 | 8 (1.7740) | 9099
Месячная распространенность Helicobacter pylori в протестированных образцах бутилированной минеральной воды
Результаты анализа устойчивости к противомикробным препаратам изолятов H. pylori в тестируемых образцах бутилированной минеральной воды представлены в таблице. H. pylori Штаммы бутилированной минеральной воды обладают наивысшим уровнем устойчивости к ампициллину (75%), за ним следуют метронидазол (62,5%), эритромицин (62,5%), кларитромицин (62,5%), амоксициллин (62,5%) и триметоприм. (62,5%) противомикробные средства. Распространенность устойчивости к антибиотикам против моксифлоксацина, тинидазола и ципрофлоксацина составляла 25, 50 и 50% соответственно. Были статистически значимые различия в уровнях устойчивости к антибиотикам между ампициллином и цефсулодином ( P = 0.013), ампициллин и фуразолидон ( P = 0,018), кларитромицин и фуразолидон ( P = 0,029) и ампициллин и моксифлоксацин ( P = 0,027). Распространенность множественной лекарственной устойчивости штаммов H. pylori в пробах бутилированной минеральной воды показана на рис. Все 8 штаммов H. pylori были устойчивы по крайней мере к одному из протестированных антибиотиков. Наивысшие уровни устойчивости были обнаружены только у одного изолята, устойчивого к 10 антибиотикам.
Таблица 2
Модель устойчивости к противомикробным препаратам изолятов Helicobacter pylori протестированных образцов минеральной воды в бутылках
Бренды (количество положительных) | Структура устойчивости к антибиотикам (%) | |||||||||||||||||||||||||
---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
AM10 Met5 | ER5 | CLR2 | AMX 10 | Lev5 | Cef30 | TRP25 | FZL1 | Mox5 | Tin4 | | CIP5 9040 1 9038 | | CIP5 9038 | CIP5 9038 a | 1 (100) a | 1 (100) a | 1 (100) a | 1 (100) a | — | — | — | — | — | — | | |
B (1) | 1 (100) a | 1 (100) a | 1 (100) a | 1 (100) a | 1 (100) a | 1 (100) a | — | 1 (100) a | — | — | 1 (100) a | 100) a | ||||||||||||||
C (4) | 2 (50) a | 2 (50) a | 2 (50) a | 2 (50) a | 2 (50) a | 2 (50) a | 1 (25) b | 3 (75) a | 1 (25) b | 1 (25) b | 2 (50) a | 2 (50) a | ||||||||||||||
D (2) | 2 (100) a | 1 (50) a | 1 (50 ) a | 1 (50) a | 1 (50) a | 1 (50) a | 1 (50) b | 1 (50) a | 1 (50) б | 1 (50) b | 1 (50) a | 1 (50) a | ||||||||||||||
Всего (8) | 6 (75) a, * | 5 ( 62.5) a | 5 (62,5) a | 5 (62,5) a | 5 (62,5) a | 4 (50) a | 2 (25) b | 5 (62,5) a | 2 (25) b | 2 (25) b | 4 (50) a | 4 (50) a |
Бренды (кол-во положительных) | Распределение различных генотипов (%) | ||||||||||||
---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
S1a | S1b | S1c | S2 | M1a | M1b | M2 | CagA | IceA1 | IceA2 | OipA | БабА2 | CAGE | |
A (1) | 1 (100) | — | — | 1 (100) | 1 (100) | — | 1 (100) | 1 (100) | 1 (100) | — | — | — | 1 (100) |
B (1) | 1 (100) | — | — | — | 1 (100) 1 (100)— | 1 (100) | 1 (100) | 1 (100) | — | — | 1 (100) | 1 (100) | |
C (4) | 4 ( 100) | 1 (25) | — | 2 (50) | 4 (100) | 1 (25) | 1 (25) | 2 (50) | 2 (50) | 1 (25) | 1 (25) | 1 (25) | 1 (25) |
D (2) | 2 (100) | 1 (50) | — | 1 (50) | 1 (50) | 1 (50) | 1 (50) | 1 (50) | 1 (50) | — | 1 (50) | — | — |
Всего (8) | 8 (100) | 2 ( 25) | — | 4 (50) | 7 (87.5) | 2 (25) | 4 (50) | 5 (62,5) | 5 (62,5) | 1 (12,5) | 2 (25) | 2 (25) | 3 (37,5) |
Таблица 4
Распределение комбинированных генотипов Helicobacter pylori , выделенных из протестированных образцов минеральной воды в бутылках
Генотипы | Распространенность (%) * | |||
---|---|---|---|---|
M1as1b | 1 (12,5) | |||
M1bs1a | 1 (12,5) | |||
M1bs1b | — | 9040 | ||
M2s1a | 2 (25) | |||
M2s1b | 1 (12,5) | |||
M2s1c | — | |||
M2s2 | ||||
M2s2 | 35) | |||
M1bs2 | 1 (12,5) | |||
M1am2 | 2 (25) | |||
M1bm2 | — | |||
CagA | 3 (37,5) | |||
CagE + | 3 (37,5) | |||
CagE- | 5 (62,5) | |||
IceA1 | 5 (62,5) | 5 (62,5) | 9038 Ice||
IceA1 IceA2 | — | |||
OipA + | 2 (25) | |||
OipA- | 6 (75) | |||
9038babA2 | 6 (75) |
Таблица 5
Комбинированные vacA , cagA , cagE , iceA , babA2 и oipA выделенные генотипы Helicobacter pylori из протестированных образцов минеральной воды
Комбинированный генотип * | Частота (%) | |||||
---|---|---|---|---|---|---|
S1a / cagA + / IceA1 / oipA + / babA2 + / cagE + | 1 (12.5) | |||||
S1a / cagA + / IceA1 / oipA- / babA2 + / cagE + | 2 (25) | |||||
S1a / cagA- / IceA1 / oipA- / babA2 + / cagE + | S1a / cagA + / IceA1 / oipA + / babA2- / cagE + | 2 (25) | ||||
S1a / cagA + / IceA1 / oipA + / babA2 + / cagE- | 1 (12,5) | 2 (25) | ||||
S1a / cagA- / IceA1 / oipA- / babA2- / cagE- | 3 (37,5) | |||||
S1a / cagA oipA + / Ice / babA2- / cagE- | 2 (25) | |||||
S1a / cagA + / IceA1 / oipA- / babA2 + — / cagE- | 2 (25) | |||||
S1a / cagA + / Ice-A2 / oipA + / Ice-A2 / oip babA2- / cagE- | 4 (50) | |||||
S1b / cagA + / IceA1 / oipA + / babA2- / cagE + | 1 (12.5) | |||||
S1b / cagA + / IceA1 / oipA + / babA2 + / cagE- | 1 (12,5) | |||||
S1b / cagA + / IceA1 / oipA- / babA2- / cagE4 | ||||||
S2 / cagA- / IceA1 / oipA + / babA2 + / cagE + | 1 (12,5) | |||||
S2 / cagA + / IceA1 / oipA- / babA2 + / cagE + | 1 (12,5) | 1 (12,5) | ||||
S2 / cagA + / IceA1 / oipA + / babA2- / cagE + | 1 (12,5) | |||||
S2 / cagA + / cagE- | 1 (12.5) | |||||
S2 / cagA + / IceA1 / oipA + / babA2- / cagE- | 1 (12,5) | |||||
S2 / cagA + / IceA1 / oipA- / babA2 + / cagE- | 2 (2599) | |||||
S2 / cagA + / IceA1 / oipA- / babA2- / cagE + | 2 (25) | |||||
S2 / cagA + / IceA1 / oipA- / babA2- / cagE- | 3 (37,5) | 1 (12,5) | ||||
M1a / cagA- / IceA1 / oipA + / babA2 + / cagE + | 1 (12,5) | |||||
1 (12.5) | ||||||
M1a / cagA- / IceA1 / oipA- / babA2 + / cagE + | 1 (12,5) | |||||
M1a / cagA + / IceA1 / oipA + / babA2- / cagE + 1 | 9040 9038M1a / cagA + / IceA1 / oipA + / babA2 + / cagE- | 2 (25) | ||||
M1a / cagA + / IceA1 / oipA + / babA2- / cagE- | 2 (25) | 99A M1a / cagE- / IceA1 / oipA- / babA2- / cagE- | 2 (25) | |||
M1a / cagA + / IceA1 / oipA + / babA2 + / cagE- | 1 (12.5) | |||||
M1a / cagA + / IceA1 / oipA- / babA2- / cagE + | 2 (25) | |||||
M1a / cagA + / IceA1 / oipA- / babA2 + / cagE4 | 2 | |||||
M1a / cagA + / IceA2 / oipA- / babA2- / cagE- | 3 (37,5) | |||||
M1b / cagA + / IceA1 / oipA- / babA2 + / cagE + | 1 (12,599) | 1 (12,599) | cagA + / IceA1 / oipA + / babA2- / cagE + | 1 (12,5) | ||
M1b / cagA + / IceA1 / oipA + / babA2 + / cagE- | 1 (12.5) | |||||
M1b / cagA + / IceA1 / oipA- / babA2- / cagE- | 1 (12,5) | |||||
M2 / cagA + / iceA1 / oipA + / babA2 + / cagE + | M2 / cagA- / IceA1 / oipA + / babA2 + / cagE + | 1 (12,5) | ||||
M2 / cagA + / IceA1 / oipA- / babA2 + / cagE + | 1 (12,5) | cag399 9038 / cag399 9038 IceA1 / oipA- / babA2 + / cagE +1 (12,5) | ||||
M2 / cagA + / IceA1 / oipA + / babA2- / cagE + | 1 (12.5) | |||||
M2 / cagA + / IceA1 / oipA + / babA2 + / cagE- | 1 (12,5) | |||||
M2 / cagA + / IceA1 / oipA + / babA2- / cagE- | 2 | M2 / cagA + / IceA1 / oipA- / babA2 + / cagE- | 2 (25) | |||
M2 / cagA + / IceA1 / oipA- / babA2- / cagE- | 3 (37,5) |
Настоящее исследование было проведено для изучения распространенности H. pylori в образцах бутилированной минеральной воды 4 основных брендов в Иране, а также для определения распределения vacA , cagA , cagE , iceA , oipA и babA2 Статус генотипа и паттерны устойчивости к антибиотикам H.pylori . Насколько нам известно, это первый отчет о распространенности генотипирования и свойств устойчивости к противомикробным препаратам H. pylori в пробах минеральной воды в бутылках в мире. Мы обнаружили, что 1,77% проб минеральной воды в бутылках были загрязнены устойчивыми и вирулентными штаммами H. pylori . Что касается высокой точности производства минеральной воды, наши результаты свидетельствуют о серьезном беспокойстве для здоровья населения.
В отличие от результатов нашего исследования, Watson et al.(2004) [21] не удалось изолировать H.py lori из образцов питьевой воды Соединенного Королевства. Выделение H. pylori с использованием питательной среды важно из-за необходимости обнаружения жизнеспособных бактерий в воде. Предыдущее исследование в Иране [1] показало, что распределение H. pylori в различных типах проб воды, включая водопроводную воду, воду стоматологических установок и водоохладитель в общественных местах, находится в диапазоне 2–6%, что выше, чем наши результаты. Нургалиева и др.(2002) [22] выявили, что речная вода является высоким фактором риска заражения H. pylori в Казахстане. Соответственно, они заявили, что передача H. pylori может передаваться через воду. Питьевая вода может представлять серьезную угрозу для передачи H. pylori по нескольким важным критериям [23]. Эти критерии включают способность H. pylori прилипать к различным материалам и совместно с другими бактериями образовывать сложные структуры на трубах или других поверхностях, контактирующих с водой [23].Представление о неспособности H. pylori выживать в одиночестве в проточной воде, но при этом развивать симбиотические отношения и формировать сложные структуры на контактных поверхностях [24], делает рациональным предположение, что подземные воды являются резервуаром для H. pylori из-за его застойного характера. Учитывая частое использование грунтовых вод при производстве бутилированной минеральной воды, неудивительно, что 1,77% наших проб оказались положительными на эту бактерию. Несколько исследований показали значительную распространенность H.pylori в пробах подземных вод между 1999–2007 гг. в США [25–27] и Японии [28].
Другими возможными причинами высокой распространенности H. pylori в образцах бутилированной минеральной воды в Иране являются: а) отсутствие компетентных подходов к санитарной обработке воды б) использование недоверчивых грунтовых вод для производства минеральной воды в бутылках в) возможность присутствия бактериальных колоний в виде биопленки в трубах, используемых для перекачки воды d) возможность утечки бытовых, промышленных и сельскохозяйственных сточных вод в источники минеральной воды и, наконец, e) несоблюдение личной гигиены персонала цеха нефтепереработки.Учитывая высокую распространенность H. pylori в образцах бутилированной минеральной воды, можно сделать вывод, что правила безопасности пищевых продуктов, а также стандарты качества, включая надлежащую производственную практику (GMP), надлежащую сельскохозяйственную практику (GAP) и анализ опасностей и критические контрольные точки (HACCP) — не вводятся для иранских заводов по производству минеральной воды.
Заметное месячное распределение с более высокой распространенностью в июле наблюдалось у штаммов H. pylori бутилированной минеральной воды.Основная причина более высокой распространенности H. pylori летом заключается в том, что в это время года климатические явления, включая температуру, дождь и атмосферное давление, могут влиять на распространенность этой бактерии. Бактерии быстрее растут и встречаются в теплом состоянии. Yahaghi et al. (2014) [13] сообщили об аналогичном сезонном распределении для штаммов H. pylori в образцах овощей и салатов. Они показали статистически значимые различия в заболеваемости H.pylori между жарким и холодным сезонами года.
Употребление загрязненной бутилированной минеральной воды, включенной в наше исследование, может привести к желудочно-кишечным расстройствам из-за наличия устойчивых и вирулентных штаммов H. pylori . Все изолятов H. pylori в нашем исследовании были устойчивы по крайней мере к одному противомикробному препарату. При этом 12,5% изолятов были устойчивы к более чем 6 антимикробным препаратам. Кроме того, самые высокие уровни устойчивости наблюдались к шести типам противомикробных средств.Эти противомикробные препараты — лучший выбор для лечения случаев инфекции H. pylori . Фактически, в большинстве случаев язвенной болезни с признаком инфекции H. pylori используются эти противомикробные средства. К сожалению, эти типы антибиотиков обычно выписываются нерегулярно и сверх установленной нормы. Поэтому неудивительно, что большинство из штаммов H. pylori были устойчивы к этим антимикробным агентам. Подобные результаты были описаны Bang et al.(2007) [29], Thyagarajan et al. (2003) [30], Yahaghi et al. (2014) [13] и Secka et al. (2013) [31]. Bang et al., Ранее сообщали о высоком уровне резистентности штаммов H. pylori в биоптатах, взятых у пациентов с язвенной болезнью, к метронидазолу (34,7%), кларитромицину (16,7%) и амоксициллину (11,8%). (2007) [29]. Другое иранское исследование [32] показало, что распространенность устойчивости штаммов H. pylori и желудочно-кишечных расстройств к метронидазолу, кларитромицину и амоксициллину находится в диапазоне от 4 до 57%.Bahrami et al. (2011) [33] сообщили о высокой распространенности водной устойчивости H. p ylori к фуразолидону (4,5%), кларитромицину (0,9%), амоксициллину (0%), метронидазолу (36,4%) и тетрациклину (1,8%). %). Значительные уровни устойчивости штаммов H. pylori клинических образцов к метронидазолу, кларитромицину, хинолонам, амоксициллину и тетрациклину были зарегистрированы в различных странах, таких как Нигерия, Сенегал, Индия, Саудовская Аравия, Китай, Колумбия, Тайвань, Бразилия. , Таиланд, Аргентина и Египет [34].
Образцы бутилированной минеральной воды в нашем исследовании содержали H. pylori положительных генотипов vacA , cagA , cagE , iceA , oipA и babA2 . Наиболее часто обнаруживаемыми генотипами были vacAs1a (100%), vacAm1a (87,5%), cagA (62,5%) и iceA1 (62,5%). Низкая распространенность oipA (25%), babA2 (25%) и cagE (37.5%) генотипов. Число изолятов, положительных по комбинированным генотипам, также было значительным. M1as1a (62,5%), m1as2 (37,5%) и m2s2 (37,5%), а также s1a / cagA + / IceA2 / oipA- / babA2- / cagE- (50%) были наиболее часто обнаруживаемыми комбинированными генотипами. . Как видно, отрицательные штаммы cagA , oipA , babA2 и cagE H. pylori были более распространены, чем их положительные штаммы.Образцы бутилированной минеральной воды не содержали положительных штаммов cagA , cagE , babA2 и oipa H. pylori . Количество штаммов iceA2 также было низким. В соответствии с неопределенной причиной низкого распространения генотипов cagA , oipA , babA2 и cagE в штаммах H. pylori бутилированной минеральной воды, высокая распространенность патогенных генотипов может гарантировать возникновение желудочно-кишечных заболеваний. расстройства из-за потребления H.pylori положительных образца минеральной воды в бутылках нашего исследования. Количество исследований, проведенных по генотипированию H. pylori , выделенных из бутилированной минеральной воды, значительно невелико. В единственном исследовании, проведенном Yingzhi et al. (2002) [35], сообщалось о высоком содержании генотипов vacAs1a , vacAm1a и vacAs1am1a в пробах питьевой воды. Не было дополнительных ранее опубликованных данных в этой области по питьевой воде, но высокое присутствие аллелей vacAs1a , vacAm1a , vacAs2 , а также m1as1a , m1as2 , m1as1b , m1bs1b , m2s1a , m2s2 и m1am2 генотипов в H.pylori штаммов человеческих клинических образцов, таких как биопсия желудка, фекалии и слюна, сообщалось ранее [36–38]. Sedaghat et al. (2014) [39] сообщили, что распространенность генотипов cagA , iceA1 , iceA2 , oipA и babA2 в случаях клинических заболеваний человека, включая язву желудка и гастрит, составила 62,2, 48,6, 16,2, 81,1 и 94,6%, соответственно, что было аналогично нашим результатам для минеральной воды в бутылках. Высокий потенциал vacA положительных штаммов H.pylori , вызывающая клинические расстройства у человека, сообщалось ранее [11–13, 40]. Тяжесть заболеваний, вызванных babA положительными штаммами H. pylori , выше, чем babA отрицательных штаммов [41]. Мы обнаружили, что 25% из штаммов H. pylori , извлеченных из образцов минеральной воды в бутылках, имели генотип babA . Экспрессия iceA1 активируется при контакте между H. pylori и эпителиальными клетками человека и может быть связана с язвенной болезнью.Мы обнаружили, что 62,5% наших штаммов были iceA1 +. Экспрессия oipA связана с индукцией IL-8 и связана с тяжелыми клиническими исходами [11–13, 40]. Распространенность этого генотипа у штаммов H. pylori нашего исследования составила 25%.
Выводы
Насколько нам известно, настоящее исследование является первым отчетом о распространенности H. pylori в бутилированной минеральной воде, а также о его генотипировании и свойствах устойчивости к противомикробным препаратам во всем мире.Образцы бутилированной минеральной воды иранских заводов содержат вирулентные и устойчивые штаммы H. pylori , что свидетельствует о серьезной проблеме общественного здравоохранения. Марка C, июль месяц, устойчивость к ампициллину, s1a аллель, m1as1a генотип и s1a / cagA + / IceA2 / oipA- / babA2- / cagE комбинированные генотипы были наиболее часто обнаруживаемыми признаками изолятов H. pylori в бутылках. образцы минеральной воды нашего исследования. Назначение цефсулодина и фуразолидона может быть эффективным при лечении случаев H.pylori .
Методы
Сбор проб
В соответствии с распространенностью H. pylori в пробах воды в некоторых предыдущих исследованиях, количество проб было рассчитано по следующей формуле:
С апреля 2014 г. по апрель 2015 г., всего 450 Образцы бутилированной минеральной воды различных марок (AD) были случайным образом собраны в провинции Исфахан, Иран. Образцы бутилированной минеральной воды были отобраны в соответствии с протоколами, представленными Международной организацией по стандартизации (ISO 5667-1: 1980, ISO 5667-2: 1991 и ISO 5667-4: 1987).Образцы (100 мл) были доставлены в лабораторию на льду и использованы в течение 2 часов после сбора.
Выделение Helicobacter pylori
Образцы фильтровали через фильтрующие мембраны 0,045 мкм (Albet Co.). Затем каждую мембрану погружали в 2 мл триптического соевого бульона (TSB, Merck) на 1 час. После этого отбирали каждые 2 мл TSB и культивировали на H. pylori . Образцы культивировали на агаре Brucella (Merck, Германия), содержащем селективную добавку к кампилобактерам (5 мг / л, Merck), триметоприм (0.25 мг / л), метансульфонат колистина (30 мг / л), циклогексимид (100 мг / л), налидиксовая кислота (30 мг / л), триметоприм (30 мг / л), ванкомицин (10 мг / л) (Sigma, Сент-Луис, Миссури, США), амфотерицин B, овечья кровь (5%) и 7% фетальная телячья сыворотка (Sigma). После 72 ч инкубации при 37 ° C в микроаэрофильных условиях (85% N 2 , 10% CO 2 и 5% O 2 ) с использованием системы MART (Anoxamat, Lichtenvoorde, Нидерланды) был протестирован рост бактерий. и подтвержден как H. pylori с использованием тестов окрашивания по Граму, уреазы и оксидазы.
Тест на чувствительность к противомикробным препаратам
Чистые культуры H. pylori были использованы для теста на чувствительность к антибиотикам. Для этой цели был выбран один штамм из каждого H. pylori -положительного образца. Тест на чувствительность к противомикробным препаратам проводили методом дисковой диффузии Кирби-Бауэра с использованием агара Мюллера-Хинтона (Merck, Германия) с добавлением 5% дефибринированной овечьей крови и 7% фетальной телячьей сыворотки, согласно Институту клинических лабораторных стандартов (CLSI 2012) [42]. ].Устойчивость к противомикробным препаратам H. pylori была измерена по сравнению с широко используемыми антибиотиками в случаях H. pylori язвы желудка. Использовали следующие антимикробные диски (HiMedia Laboratories, Мумбаи, Индия): ампициллин (10 мкг), метронидазол (5 мкг), эритромицин (5 мкг), кларитромицин (2 мкг), амоксициллин (10 мкг), левофлоксацин (5 мкг). , цефсулодин (30 мкг), триметоприм (25 мкг), фуразолидон (1 мкг), моксифлоксацин (5 мкг), тинидазол (приготовленный из чистых порошков, Sigma, 5 мкг) и ципрофлоксацин (5 мкг).После инкубации при 37 ° C в течение 48 часов в микроаэрофильной атмосфере (85% N 2 , 10% CO2 и 5% O 2 ,) была измерена чувствительность H. pylori к каждому противомикробному препарату. Результаты были обработаны в соответствии с критериями интерпретации, предоставленными CLSI (2012) [42]. H. pylori ATCC 43504 использовался как организм для контроля качества при определении чувствительности к противомикробным препаратам.
Экстракция ДНК и амплификация гена 16S рРНК Helicobacter pylori
Подозреваемые колонии также были идентифицированы как H.pylori на основе метода ПЦР. Геномную ДНК экстрагировали из колоний с типичными признаками H. pylori с использованием набора для экстракции ДНК из клеток и тканей (Roche Applied Science, Германия, 11814770001) в соответствии с инструкциями производителя, а ее плотность оценивали с помощью оптической денситометрии. Выделенную ДНК амплифицировали для гена 16S рРНК (праймеры: HP-F: 5′-CTGGAGAGACTAAGCCCTCC-3 ‘и HP-R: 5′-ATTACTGACGCTGATTGTGC-3’) [43]. Реакции ПЦР проводили в конечном объеме 50 мкл, содержащем 5 мкл 10 × буфера + MgCl 2 , 2 мМ dNTP, 2 единицы ДНК-полимеразы Taq, 100 нг геномной ДНК в качестве матрицы и 25 пикомолей каждого праймера.ПЦР проводили с использованием термоциклера (Eppendorf Co., Германия) при следующих условиях: начальная денатурация в течение 2 мин при 94 ° C; 30 циклов при 95 ° C в течение 30 секунд, 60 ° C в течение 30 секунд и 72 ° C в течение 30 секунд и окончательное удлинение при 72 ° C в течение 8 минут.
Генотипирование генотипов vacA, cagA, cagE, iceA, babA2 и oipA в изолятах Helicobacter pylori питьевой воды
Наличие iceA1 , iceA2. Были обнаружены генотипы oipA , cagA , cagE , babA2 , а также различные генотипы аллелей vacA ( s1a , s1b , s1c , m1a , m1b и m2 ). определяется методом ПЦР.Список праймеров и программа ПЦР приведены в таблице [44–51]. ПЦР-амплификации выполняли в программируемом термоциклере (Master Cycle Gradiant, Eppendorf, Германия), и все опыты включали один отрицательный ДНК-контроль, состоящий из воды для ПЦР и двух или более положительных контролей (26695, J99, SS1, Tx30, 88–23 и 84–183).
Таблица 6
Олигонуклеотидные праймеры и условия ПЦР, используемые для генотипирования штаммов Helicobacter pylori , выделенных из иранской минеральной воды в бутылках
Гены | Последовательность праймеров (5′-3 ‘) | ) | Объем реакции ПЦР (50 мкл) | Программы ПЦР |
---|---|---|---|---|
ВАС 1 а | F: CTCTCGCTTTAGTAGGAGC | 213 | 5 мкл буфера для ПЦР 10X | 1 цикл: 95 ° C ———— 1 мин. |
R: CTGCTTGAATGCGCCAAAC | ||||
ВАС 1 б | F: AGCGCCATACCGCAAGAG | 187 | 1,5 мМ Mgcl 2 | 32 цикла: 95 ° C ———— 45 с |
CTGCTTGAATGCGCCAAAC | 200 мкг фермента NTP ) | |||
ВАС 1 c | F: CTCTCGCTTTAGTGGGGYT | 213 | 64 ° C ———— 50 с | |
R: CTGCTTGAATGCGCCAAAC | 0.5 мкМ каждого праймера F&R | |||
ВАС 2 | F: GCTAACACGCCAAATGATCC | 199 | 72 ° C ———— 70 с | |
R: CTGCTTGAATGCGCCAAAC | 1,25 U Taq ДНК-полимераза 9040 (ферментная ДНК-полимераза | |||
VacA м 1 А | F: GGTCAAAATGCGGTCATGG | 290 | 1 цикл: 72 ° C ———— 5 мин | |
R: CCATTGGTACCTGTAGAAAC | ||||
VacA м 1 B | Ф: GGCCCCAATGCAGTCATGGA | 291 | 2.5 мкл ДНК-матрицы | |
R: GCTGTTAGTGCCTAAAGAAGCAT | ||||
VacA м 2 | F: GGAGCCCCAGGAAACATTG | 352 | ||
R: CATAACTAGCGCCTTGCA | ||||
cag A | F: GATAACAGCCAAGCTTTTGAGG | 300 | 5 мкл буфера для ПЦР 10X | 1 цикл: 94 ° C ———— 1 мин. |
R: CTGCAAAAGATTGTTTGGCAGA | ||||
2 мМ Mgcl 2 | 32 цикла: 95 ° C ———— 60 с | |||
150 мкМ dNTP (ферментация) | ||||
0.75 мкМ каждого праймера F&R | 56 ° C ———— 60 с | |||
1,5 ед. ДНК-полимеразы Taq (Fermentas) | 72 ° C —— —— 60 с | |||
1 цикл: 72 ° C ———— 10 мин | ||||
3 мкл ДНК-матрицы | ||||
ледA 1 | F: GTGTTTTTAACCAAAGTATC | 247 | 5 мкл буфера для ПЦР 10X | 1 цикл: 94 ° C ———— 1 мин. |
R: CTATAGCCASTYTCTTTGCA | ||||
ледA 2 | F: GTTGGGTATCACAATTTAT | 229/334 | 2 мМ Mgcl 2 | 32 цикл: 94 ° C ———— 60 с |
R : TTRCCCTATTTTCTAGTAGGT | 200 мкМ dNTP (Fermentas) | |||
56 ° C ———— 60 с | ||||
0.5 мкМ каждого праймера F&R | ||||
72 ° C ———— 60 с | ||||
1,5 ед. ДНК-полимеразы Taq (Fermentas) | ||||
1 цикл: 72 ° C ———— 8 мин | ||||
5 мкл ДНК-матрицы | ||||
oip A | F: GTTTTTGATGCATGGGATTT | 401 | 5 мкл буфера для ПЦР 10X | 1 цикл: 94 ° C ———— 2 мин. |
R: GTGCATCTCTTATGGCTTT | ||||
2.5 мМ Mgcl 2 | 32 цикла: 94 ° C ———— 60 с | |||
200 мкМ dNTP (Fermentas) | ||||
56 ° C —— ——- 60 с | ||||
0,5 мкМ каждого праймера F&R | ||||
72 ° C ———— 60 с | ||||
2 U Taq ДНК полимераза (Fermentas) | ||||
1 цикл: 72 ° C ———— 10 мин | ||||
3 мкл ДНК-матрицы | ||||
CAGE | F: TTGAAAACTTCAAGGATAGGATAGAGC R: GCCTAGCGTAATATCACCATTACCC | 508 | 5 мкл буфера для ПЦР 10X | 1 цикл: 94 ° C ———— 1 мин. |
2 мМ Mgcl 2 | 35 цикл: 94 ° C ———— 60 с | |||
150 мкМ dNTP (Fermentas) | ||||
53 ° C — ———— 45 с | ||||
0,75 мкМ каждого праймера F&R | ||||
72 ° C ———— 45 мин | ||||
1,5 ед. ДНК-полимеразы Taq (Fermentas) | ||||
1 цикл: 72 ° C ———— 8 мин | ||||
3 мкл ДНК-матрицы | ||||
БабА2 | F: CCAAACGAAACAAAAAGCGT | 271 | 5 мкл буфера для ПЦР 10X | 1 цикл: 95 ° C ———— 1 мин. |
R: GCTTGTGTAAAAGCCGTCGT | ||||
1,5 мМ Mgcl 2 | 30 цикл: 91 ° C ———— 60 с | |||
200 мкМ dNTP (Fermentas) | ||||
45 ° C ———— 60 с | ||||
0,5 мкМ каждого праймера F&R | ||||
72 ° C ———— — 60 с | ||||
1,25 U Taq ДНК-полимераза (Fermentas) | ||||
1 цикл: 72 ° C ———— 8 мин | ||||
2.5 мкл ДНК-матрицы |
Гель-электрофорез
Продукты амплификации ПЦР (10 мкл) подвергали электрофорезу в 2,5% агарозном геле в 1X буфере TBE при 80 В в течение 30 мин, окрашивали бромидом этидия, и изображения были получены в системе документации гелей UVIdoc (Великобритания). Продукты ПЦР идентифицировали по ДНК-маркеру размером 100 п.н. (Fermentas, Германия) [52].
Статистический анализ
Данные были перенесены в электронные таблицы Microsoft Excel (Microsoft Corp., Редмонд, Вашингтон, США) для анализа. Используя статистическое программное обеспечение SPSS 16.0 (SPSS Inc., Чикаго, Иллинойс, США), был проведен анализ критерия хи-квадрат и точного двустороннего критерия Фишера, и различия считались значимыми при значениях P <0,05. Статистически проанализировано распределение генотипов H. pylori , выделенных из бутилированной минеральной воды.
Аббревиатуры
AM | Ампициллин | |||||||||||||||||||||||||
AMX | Амоксициллин | |||||||||||||||||||||||||
babA |
Cyclin-связывающий ген 9403 903 903 903 903 903 9040 9404 9403 903 9040 | Cef | Цефсулодин | |||
CLR | Кларитромицин | ||||
CLSI | Институт клинических лабораторных стандартов | ||||
ER | 9|||||
ER | 91 9231 9231 9231 9231Erythromycin | ||||
Helicobacter pylori | |||||
iceA | Индуцируется контактом с эпителиальным антигеном | ||||
Lev | Levofloxacin | Levofloxacin | |||
ПЦР | Полимеразная цепная реакция | ||||
TRP | Триметоприм | ||||
vacA | Вакуолизирующий цитотоксин стопы 002 | ||||