Криокапсула что это такое: Криокапсула – санаторий «Родник» в Кисловодске, официальный сайт

Криотерапия общая (криокапсула) в санатории «Виктория»

Общая криотерапия – это процедура, при которой на все тело кратковременно воздействуют пары жидкого азота, имеющие очень низкую температуру. Происходит это в специальной капсуле, открытой в области лица, поэтому человек продолжает дышать теплым окружающим воздухом. Тем временем поверхностные слои тела и конечностей подвергаются кратковременному воздействию низкой температуры. Холод не доходит до глубоких тканей, но мобилизирует силы организма.

Криокапсула подтягивает кожу и включает выработку структур, ответственных за ее заживление, запускает процессы расщепления подкожного жира. Тренировка сосудов, которые при воздействии холода должны резко сжаться, а потом, после выхода в тепло – расслабиться, приводит к уменьшению отечности, улучшению цвета и рельефа кожи, замедлению процессов ее старения.

Процедура оказывает влияние не только на кожу, но и на весь организм. Она активизирует обмен веществ, мобилизует иммунные реакции, готовясь защищать человека от патогенных микроорганизмов. Кратковременное воздействие экстремально низкой температуры способствует выработке естественных антидепрессантов, а также заставляет мозг «просканировать» тело, найдя и устранив патологические процессы.

Показания

Криосауна показана в комплексном лечении, а также для профилактики:

• стенокардии;
• артритов;
• болезни Бехтерева;
• остеохондроза;
• травм суставов;
• фантомных болей;
• хронических кожных заболеваний;
• ранних морщин;
• целлюлита;
• трофических язв;
• варикозной болезни;
• депрессия;
• тяжелого климакса;
• посттравматического синдрома;
• неврозов;
• импотенции.

Противопоказания

Противопоказана процедура при васкулитах, нарушениях свертываемости, недостаточности внутренних органов, гипертонии, открытых ранах.

Адрес санатория:
Россия, Ставропольский край, г. Кисловодск, ул. Кирова, д.12
Отдел реализации путевок (г. Кисловодск):
Тел: 8 (800) 250-60-63
e-mail: [email protected]

Посмотреть на карте

Лечение холодом: криокапсула

Зашёл в криокапсулу, охладился, вышел молодым, здоровым и красивым. Звучит как сценарий фантастического фильма. Вот только ждать триста лет не нужно: в Кемерове уже есть криостудия. Корреспондент A42.RU узнала у руководителя ICEQUEEN_42 Татьяны Шубиновой, как заморозиться до -130 градусов, освежить организм, снизить биологический возраст и при этом не превратиться в ледяную статую.

Польза минуса

Почти каждый в жизни лечился холодом, даже не осознавая этого: прикладывал к ушибам замороженный продукт из морозилки, промывал порез под струёй холодной воды. Ещё недавно у девушек было популярно умываться кубиками льда, чтобы сохранить молодость. Любители бани зачастую после парной ныряют в сугробы или растираются снегом, а «моржи» регулярно практикуют экстремальное закаливание в проруби. Сибирякам холод тем более привычен.

В криокапсуле не просто холод. В проруби температура воды — от 0 до +4 градусов. В капсуле — от -130 до -160 градусов. Это совершенно иной уровень взаимодействия с низкими температурами: от терморегуляции, то есть поддержания определённой температуры тела, к моделированию иммунитета. Оно происходит благодаря кратковременному стрессу, который испытывает организм: две минуты нахождения в капсуле с очень низкой температурой мобилизуют все внутренние резервы организма, запускают процессы самодиагностики и самовосстановления. Проще говоря, организм чувствует, что его сейчас заморозят, и делает всё, чтобы этого не допустить: проводит внутреннюю самодиагностику, усиливает все обменные процессы, собственными силами устраняет все имеющиеся проблемы имунной, кровеносной, нервной, эндокринной, лимфатической систем. 

Польза криолечения:

— иммунитет укрепляется без употребления витаминов и лекарств;

— нормализуются обменные процессы;

— регулируется вес;

— улучшается состояние кожи, пропадает целлюлит, высыпания и воспаления, псориаз, пигментные пятна и признаки старения;

— повышается общий тонус организма;

— снижается уровень бессонницы и стрессов;

— успокаиваются нервы;

— облегчаются гинекологические проблемы, в том числе боли во время климакса и менструаций;

— снижаются урологические проблемы;

— облегчается дыхание при хронических заболеваниях дыхательных путей, в том числе при астме, тонзиллитах, бронхитах;

— облегчаются мышечные и суставные боли;

— улучшается подвижность суставов;

— ускоряется восстановление после операций.

 

— Я услышала, что за рубежом звёзды используют криотерапию, чтобы худеть и выглядеть моложе.Начала изучать материал, узнала, что криотерапия – это, в первую очередь, здоровье и молодость. Выяснила, что даёт процедура, насколько эффективна. Захотела пройти курс криотерапии, но не нашла в Кемерове подобную процедуру. Приняла решение, что нужно сделать её доступной кемеровчанам, — вспоминает Татьяна Шубинова. — Опыт в бизнесе у меня был. Выбрала самое качественное, эффективное и безопасное оборудование из Москвы, оказалось, что его производит наш земляк из Белово Владимир Шуппо. Его инновационное оборудование активно покупают клиники и фитнес-центры Германии, Польши, ОАЭ. Криолечение за рубежом очень популярно.  

Татьяна рассказывает, что многие из клиентов криостудии — врачи, прекрасно понимающие, как происходит воздействие на организм. На процедуры приходят и спортсмены, восстанавливающиеся после тренировок. После процедуры выводится молочная кислота и снимается боль в мышцах и суставах. Усталость после интенсивных тренировок снимается как рукой. 

Целебный эффект от криотерапии пролонгирован и действует не менее шести месяцев. Бодрым и полным сил клиент чувствует себя уже после первого сеанса: появляется желание заняться спортом, устроить долгую прогулку или затеять дома генеральную уборку.

После курса из десяти сеансов обновляются внутренние системы организма, а биологический возраст снижается на шесть лет. Если спустя полгода сеансы не повторить, иммунитет не снизится до исходного состояния. С криотерапией просто: прошёл курс и от 6 до 12 месяцев можно не думать о ней. Максимум: ходить раз в неделю, чтобы взбодриться. Не сравнить с моржеванием — это образ жизни, к которому нужна длительная подготовка. 

Путешествие в будущее

Современная криокапсула выглядит как декорация к фантастической саге. Да, в ней не замораживают на сотни лет, но зато омолаживают организм. Звучит нереально.

В уютном бело-голубом интерьере она смотрится на удивление органично. В криостудии царит смесь футуризма и классики: рядом с капсулой — огромное манящее кресло, чайная зона. Это не декор, а ещё один этап процедуры. После посещения криокапсулы клиенту студии предлагают согревающий чай, фруктовый или травяной. Это позволяет избежать обезвоживания после охлаждения. 

— Мы старались создать в студии душевную атмосферу: горячий чай, мягкий халат, расслабляющее, буквально окутывающее кресло, удобное время посещения для каждого,  общение. Чтобы каждый клиент почувствовал, что криостудия создана специально для него, — объясняет Татьяна. 

Перед визитом в студию желательно проконсультироваться с врачом. Дополнительная подготовка перед посещением криокапсулы не нужна.

Эффект достигается только при контакте холодного воздуха с кожей, поэтому нужно снять одежду и украшения. Клиент заходит в капсулу в тёплых тапочках и рукавицах с одноразовыми вкладками. Если волосы не прикрывают уши, стоит надеть специальную шапочку. 

Заходя в капсулу, сложно не почувствовать себя космонавтом: локти плотно прижаты к бокам, оборудование готово, впереди — неизвестность. На самом деле, в ней не страшнее, чем в солярии. Даже меньше шансов испытать приступ клаустрофобии: лицо помещается в специальное окошко, поэтому клиент постоянно на связи с оператором. Тот видит реакцию клиента на холод, наблюдает за мимикой, слышит его и жестами показывает, сколько времени осталось до конца процедуры. Капсула закрывается, когда оператор подтверждает, что подбородок, щёки и лоб плотно прижаты к проёму. Это нужно, чтобы не надышаться холодом. Высота регулируется специальным лифтом, чтобы не напрягать спину.

В закрытую капсулу подаётся сухая смесь азота с воздухом. Пары постепенно обволакивают тело, становясь всё холоднее. Через 15 секунд внутри устанавливается температура -130 градусов. Это стандартный минус для первого сеанса, по желанию, позже его можно снизить до -160 градусов. Если воздух кажется слишком холодным, можно завершить сеанс раньше, использовав одну из трёх аварийных кнопок.

Звучит странно, но в самой капсуле не слишком-то холодно. Нет сильного мороза, тело не начинает покрываться коркой льда. Ощущения варьируются от «говорила мне мама, не ходи весной без шапки» до «ладно, что-то стало холодать». Самый предел — как будто вышел из моря на берег и тебя обдуло ветром. Не холоднее. Человеческий организм всё-таки удивителен.

Выходить из капсулы можно только после того, как позвал оператор. Не стоит лишний раз вдыхать холодные пары. К тому же, в смеси не хватает кислорода, его подавляет азот. Именно поэтому клиенты дышат воздухом комнаты. 

После выхода клиент заворачивается в тёплый халат, усаживается в кресло. «Зуб на зуб не попадает», «до костей пробирает» — это всё не про криотерапию. Холодно, да. Но не настолько. 

Прийти в себя помогает горячий чай. Уже спустя 20 минут организм готов к любым неожиданностям. В капсуле организм испытывал микростресс. После выхода стресса он уже не чувствует, но система самодиагностики уже запущена. Процесс проходит незаметно для клиента и длится от 6 до 12 часов. 

Криостудия ICEQUEEN_42 работает по предварительной записи: каждому клиенту уделяется полчаса. Детей на процедуру приводят после 15 лет. Верхней границы возраста нет: в студии есть постоянные клиенты старше 60 лет, опытные «моржи».  Они говорят, что ощущения и эффект от криотерапии совершенно другие.

Противопоказания у лечения такие же, как при физиотерапии. Оно не рекомендовано при общем тяжёлом состоянии и острых инфекционных заболеваниях, обострении хронических заболеваний и диабете, сердечно-сосудистых патологиях и тромбофлебите, инфарктах и инсультах, воспалительных процессах и туберкулёзе, индивидуальной непереносимости холода, психических расстройствах и клаустрофобии. Беременным — по назначению врача. 

В криостудии действует программа лояльности UDS — электронная дисконтная карта. 

Будущее уже здесь. Изобретения из фантастических книг есть в каждом доме: от смартфона до микроволновки. Знакомые, привычные вещи, которые когда-то казались красивой фантазией. 

Теперь буквально в центре города появилась криокапсула, которая помогает сохранить здоровье, молодость и красоту, продлить жизнь и улучшить её качество. Ещё один шаг в будущее.  

  

Улица Николая Островского, 27

 

ИМЕЮТСЯ ПРОТИВОПОКАЗАНИЯ.

ПЕРЕД ПРИМЕНЕНИЕМ НЕОБХОДИМА КОНСУЛЬТАЦИЯ СПЕЦИАЛИСТА.

Криокапсула (криосауна) ICEQUEEN

Pdf

Криотерапия – уникальная по своему воздействию на организм человека физиотерапевтическая методика, основанная на кратковременном контакте кожного покрова с охлажденной до температуры /–130 °C … –160 °C/ смесью атмосферного воздуха и паров жидкого азота. Термин Cryotherapy в переводе с латинского языка в буквальном смысле слова означает «лечение холодом». пациента (за исключением лица) потоком воздушно-азотной смеси температурой до –160 °С.

Российской компанией «ГРАНД-Крио» разработана и серийно выпускается высокотехнологичная камера нового поколения – криокапсула ICEQUEEN, представляющая собой термоизолированную камеру индивидуального пользования, гарантирующую равномерное по высоте камеры воздействие на 98% поверхности кожи пациента (за исключением лица) потоком воздушно-азотной смеси температурой до –160 °С.

Константин Дзю уже оценил! Оцените и Вы!

Общая криотерапия оказывает стимулирующее влияние на адаптационные резервы организма человека: активирует иммунную и эндокринную системы, оказывает обезболивающий, противовоспалительный, противоотечный и спазмолитический эффекты, способствует насыщению крови эндорфинами. Такая стимуляция регуляторных систем позволяет организму самостоятельно про- вести самодиагностику и самокоррекцию состояния. Применение криокапсулы ICEQUEEN в комплексе лечебных мероприятий позволяет добиться отличных результатов в лечении различных заболеваний  опорно-двигательного аппарата, сосудистой патологии, кожных и аллергических заболеваний, псориаза, неврозов и депрессий, мужских и женских сексуальных расстройств, гормональных дисфункций, оказать заметный омолаживающий эффект. Двухминутный сеанс криотерапии активирует обменные процессы такой интенсивности, что за курс процедур пациент теряет 3–4 кг жировой ткани, что дает отличные результаты при лечении ожирения и метаболического синдрома.

Преимущества  ICEQUEEN

В ICEQUEEN на уровне мировых стандартов реализованы все достоинства существующих на рынке криокамер, а именно:

— герметичная конструкция криокапсулы, обеспечивающая максимальный терапевтический эффект, абсолютную безопасность процедуры и экономичность оборудования

— вертикальный градиент температур не превышает 10–15  °С

— время выхода на рабочий режим составляет 15–17 секунд, что сокращает длительность процедуры и снижает ее себестоимость

— автоматизированный режим проведения криопроцедуры делает ее абсолютно безопасной и практически независимой от квалификации оператора

— подъемный электрический пол и сниженный уровень шума внутри камеры повысили комфортность процедуры для пациента

— использование комплектующих от компании SIEMENS гарантирует высокую надежность, качество криокапсулы подтверждено евросертификатом СЕ.

В отличие от камер открытого типа («криобочек»), криокапсула ICEQUEEN абсолютно исключает риски переохлаждения верхних дыхательных путей и гипоксии, поскольку пациент дышит воздухом помещения, в котором происходит процедура. Стабильная криотерапевтическая температура внутри капсулы исключает потерю температуры внутренними органами, абсолютно исключая риск про- студных  заболеваний.

Криокапсула ICEQUEEN – современное медицинское криооборудование, отвечающее всем медицинским и техническим требованиям, не имеющее аналогов в своем классе ни по эффективности, ни по эргономике, ни по дизайну!

Презентация криокапсулы ICEQUEEN 

КРАТКАЯ ИНСТРУКЦИЯ ПО ПРОВЕДЕНИЮ

ПРОЦЕДУР ОБЩЕЙ КРИОТЕРАПИИ В КРИОКАПСУЛЕ ICEQUEEN

1. Подготовка криокапсулы к работе

За 1 час до начала проведения процедур криотерапии криокапсулу необходимо включить и запустить режим «СУШКА». Цель — удаление из системы атмосферной влаги, накопившейся за время предыдущих сеансов или  с предыдущего дня. В режиме «СУШКА» сифон отключен от сосуда Дьюара, находится в стойке для сифона. Дверь капсулы открыта, заглушка лицевого отверстия вынута, наблюдения за криокапсулой не требуется.

По завершению режима «СУШКА» необходимо подключить сосуд Дьюара. Для этого необходимо осторожно, не доводя содержимое сосуда до активного кипения, вставить сифон в сосуд Дьюара, предварительно проверив надежность установки герметизирующей прокладки, и повернуть фиксирующие стержни-ручки по часовой стрелке до отказа. Далее, если оператор не уверен в количестве содержимого сосуда Дьюара, с помощью деревянного стерня длиной около 70 см целесообразно проверить уровень жидкого азота в сосуде Дьюара. Для проведения одной процедуры необходимо 6 кг (7 литров) жидкого азота.

Перед входом пациента в криокапсулу необходимо запустить режим «ОЛАЖДЕНИЕ». Цель – сократить время выхода на рабочий режим за счет предварительного охлаждения внутренних стенок капсулы. 

Охлаждение продолжается 10 секунд,  что требует около 2 литров азота.

2. Подготовка пациента к процедуре

Перед процедурой необходимо удостовериться в том, что поверхность кожи пациента абсолютно суха, при необходимости – тщательно вытереть тело от влаги и оставить пациента без верхней одежды несколько минут в помещении с крикапсулой при температуре 20-22оС. В течение этого времени оператор объясняет пациенту основные правила поведения при подготовке к процедуре и во время ее.

Перед процедурой пациенту рекомендуется снять с тела металлические украшения  (цепочки, часы, браслеты). 

Процедура принимается: мужчинами – в одноразовых стрингах, женщинами – в неглиже или минимальном х/б белье. Следует помнить, что чем бОльшая поверхность кожи контактирует с криотерапевтической температурой, тем эффективнее процедура. Ступни ног пациентов должны быть защищены шерстяными носками, которые надевают на одноразовые носочки, и бахилами. При желании (особенно новички) можно использовать шерстяные наколенники и налокотники. Кисти рук пациента защищены шерстяными рукавичками.

На голову пациента надевается одноразовая шапочка, передняя часть головы пациента обворачивается небольшим, сложенным вдвое, полотенцем. Цель – плотно заполнить возможные несоответствия лица и конфигурации лицевого окна, чтобы предотвратить прохождение холодной смеси из кабины в помещение. Иначе возможно локальное обморожение кожного покрова лица или подбородка.

ПРИМЕЧАНИЕ: Если процедуры принимает большой коллектив, например, спортивная команда, в целях экономии времени и расхода жидкого азота, пациенты образуют группы по 5 человек, максимально готовые к прохождению процедуры. Это позволит принимать процедуры с минимальными интервалами. Целесообразно проводить сеансы для мужчин и женщин раздельно, тогда очередной пациент, ожидая своей очереди непосредственно у криокапсулы, является свидетелем происходящего, в общении с предыдущим пациентом морально готовится к процедуре. Целесообразно первыми направлять в криокапсулу “опытных” пациентов, наблюдение за которыми поможет “новичкам” избавиться от естественного страха перед холодом.

Пациент встает в заниженный квадрат подъемного пола кабины передом к лицевому отверстию криокапсулы. Ступни ног за пределы квадрата не выступают.

Оператор при открытой двери криокапсулы с помощью кнопок вверх-вниз лифтового подъемника поднимает (опускает) пациента до совмещения его  подбородка с нижней частью окна криокапсулы. Руки пациента-мужчины скрещены, левая рука закрывает правый сосок, правая рука – левый. У пациентов – женщин (вследствие объемной груди) руки закрывают одноименные соски. Локти в обоих случаях не должны находиться непосредственно напротив потока выходящей из сопел криосмеси,. 

Пациент прижимается лицом к внутренней поверхности окна плотно по всему периметру для обеспечения герметичности кабины. Оператор закрывает дверь криокапсулы на фиксирующий замок, встает на стул (ступеньку) с фасада криокапсулы, проверяет плотность прижатия лица к лицевому отверстию, при необходимости подправляет полотенце. Это особенно важно для первичных пациентов, не имеющих опыта приема процедур.

Далее оператор на сенсорном мониторе выбирает программу «КРИО» или «КРИО ДИАПАЗОН» и выставляет назначенную лечащим врачом криотемпературу воздействия. 

3. Проведение процедуры

Убедившись, что пациент готов к процедуре, оператор нажимает кнопку ПУСК, в систему подготовки газа начинает поступать жидкий азот. 

В течение всей процедуры с пациентом поддерживается визуальная и вербальная связь, оператор внимательно следит за лицом пациента, контролируя его состояние, готовый в любой момент прекратить выполнение процедуры нажатием на красный грибок кнопки аварийного отключения. Вербальное общение пациента с оператором нежелательно ввиду возможной разгерметизации кабины вследствие движения челюстей пациента, которые должны быть плотно прижаты к внутренней  поверхности окна. 

4. Окончание процедуры

По истечении времени экспозиции (всегда 2 минуты) процедура прекращается автоматически. Оператор открывает дверь криокапсулы и помогает пациенту выйти из нее. 

5. Обслуживание криокапсулы во время отпуска процедур

В процессе проведения процедур необходимо вести учет количества процедур, проведенных на данном сосуде. Штатный сосуд содержит  35 литров жидкого азота, которых, как правило, хватает на проведение 5 процедур. Расход азота зависит от температуры процедуры: чем ниже температура – тем больше расход. Расход не превышает 7 литров, если температура  — минус 130оС и процедуры проводятся одна за другой, без предварительного охлаждения. Целесообразно после 5 сеансов криотерапии сосуд заменить на полный. По мере опустошения сосудов Дьюара целесообразно остатки жидкого азота слить, используя металлическую воронку, в один сосуд.

 

По окончании сеанса криотерапии криокапсула выключается, ее двери открываются, она отогревается в пассивном режиме.

Лечение холодом или криотерапия в Labrehab: как это работает?

Криотерапия — уникальная по своему воздействию на организм человека физиотерапевтическая методика, основанная на кратковременном контакте кожного покрова с охлажденной до температуры —160°C…—130°C смесью атмосферного воздуха и паров жидкого азота.

Термин «Cryotherapy» в переводе с латинского языка в буквальном смысле слова означает «лечение холодом». Криокапсула представляет собой термоизолированную камеру индивидуального пользования, гарантирующую равномерное по высоте камеры воздействие на 98% поверхности кожи пациента (за исключением лица) потоком воздушно-азотной смеси температурой до —160°С.

Общая криотерапия оказывает стимулирующее влияние на адаптационные резервы организма человека:

• активирует иммунную и эндокринную системы,
• оказывает обезболивающий, противовоспалительный, противоотечный и спазмолитический эффекты,
• способствует насыщению крови эндорфинами.

Такая стимуляция регуляторных систем позволяет организму самостоятельно провести самодиагностику и самокоррекцию состояния. Применение криотерапии в комплексе лечебных мероприятий позволяет добиться отличных результатов в лечении различных заболеваний опорно-двигательного аппарата, сосудистой патологии, кожных и аллергических заболеваний, псориаза, неврозов и депрессий, мужских и женских сексуальных расстройств, гормональных дисфункций, оказать заметный омолаживающий эффект.

Смысл лечебного эффекта криокапсулы основан на том, что под воздействием холода происходит стимуляция защитных систем организма.

В результате, чтобы избежать переохлаждения, организм мобилизует все свои ресурсы. Положительный стресс способствует улучшению периферического кровообращения и микроциркуляции, а также активному выбросу гормонов из надпочечников и гипофиза. Таким образом, криотерапия служит своеобразной тренировкой организма без истощения его собственных ресурсов и является абсолютно безопасной процедурой.

Для современных спортсменов криотерапия стала новой культурой здорового образа жизни. Ведь, благодаря регулярному воздействию сухого экстремального холода, есть возможность не только повысить иммунитет организма, но и увеличить тонус мышц, за счет чего спортсмены способны каждый день получать от тренировок более высокие результаты.⠀

При регулярном посещении криопроцедур:⠀

1. нормализуется метаболизм,
2. происходит омоложение организма,
3. сухожилия и суставы становятся менее подвержены травмам,
4. улучшается работа дыхательной и сердечно-сосудистой систем,
5. ускоряются восстановительные процессы организма после активных физических воздействий.

Двухминутный сеанс криотерапии активирует обменные процессы такой интенсивности, что за курс процедур пациент теряет 3–4 кг жировой ткани, что дает отличные результаты при лечении ожирения и метаболического синдрома.

Преимущества процедуры в криокапсуле:

1. герметичная конструкция криокапсулы, обеспечивающая максимальный терапевтический эффект, абсолютную безопасность процедуры и экономичность оборудования,
2. вертикальный градиент температур не превышает 10–15°С,
3. время выхода на рабочий режим составляет 15–17 секунд,
4. автоматизированный режим проведения криопроцедуры делает ее абсолютно безопасной,
5. в отличие от камер открытого типа («криобочек»), криокапсула абсолютно исключает риски переохлаждения верхних дыхательных путей и гипоксии, поскольку пациент дышит воздухом помещения, в котором происходит процедура,
6. стабильная криотерапевтическая температура внутри капсулы исключает потерю температуры внутренними органами, абсолютно исключая риск простудных заболеваний.

---

Показания для криотерапии:

Лишний вес, ожирение, метаболический синдром повышенный уровень сахара в крови, лишний вес, увеличение холестерина в крови и нарушение липидного спектра

Целлюлит (фиброзная и мягкая форма, все стадии)

Раннее старение организма и профилактика раннего старения

Сухость кожных покровов, кожный зуд

Акне и высыпания на коже, фурункулез, стрептодермии, дерматиты, инфекционные заболевания кожи, псориаз (кожная и артропатическая формы), экземы, аллергические дерматиты, атопический дерматит, системные заболевания кожи( волчанка, склеродермия)

Гипертония, вегетососудистая дистония (по гипо и гипертоническому типу)

Мигрени

Заболевания опорно-двигательного аппарата, остеохондроз, болезнь Бехтерева, артриты, артрозы, грыжи дисков, протрузии, сколиозы (в том числе в острый период)

Сахарный диабет

Варикозная болезнь любых степеней

Заболевания органов пищеварительного тракта, неспецефический язвенный колит (в период ремиссии)

Нарушения в женской гормональной сфере, мужской, привычное невынашивание беременности, бесплодие функциональное, спаечная болезнь, эректильная дисфункция , менопауза, предменструальный синдром, эндометриоз

Депрессии, неврозы, хронический стресс

Внутриклеточные инфекции вирусные, грибковые и бактекриальные

Анорексия, булемия

Бронхиальная астма, аллергический бронхит, пневмония (в период ремиссии)

Профессиональные бронхолегочные заболевания

Снижение иммунитета, частые простудные заболевания

Хронический вирусный гепатит

Спортивные и другие виды травм (даже в острый период), спортивная медицина на всех этапах

Восстановление после болезней

Рассеяный склероз

Ожоговая болезнь, рубцовые изменения кожи

---

Противопоказания к общей аэрокриотерапии (АКТ):

общее тяжелое состояние пациента

декомпенсация хронических сердечно-сосудистых заболеваний — АД выше 180, кризовое течение

острый инфаркт миокарда и период реабилитации после инфаркта до 1 года

мозговые инсульты (до 1 года)

сердечная недостаточность II ст.

прогностически неблагоприятные нарушения сердечного ритма и проводимости

лихорадка

активный туберкулез легких

злокачественные опухоли

доброкачественные опухоли (миома, эндометриоз- не является противопоказанием)

геморрагические диатезы

истерический невроз, класутрофобия

индивидуальная непереносимость холода (холодовая аллергия)

заболевания крови (онкологические)

тяжелые поражения нервной системы

тромбофлебит

заболевания периферических сосудов (васкулиты, облитерирующий эндартериит)

беременность

лактация

имплантированный кардиостимулятор

обострение всех хронических заболеваний (за исключением обострений заболеваний суставов (артриты, артрозы, подагра, радикулиты — это показание)

эпилепсия

Пройти курс криотерапии вы можете в клинике LabRehab в Москве в здании велотрека в Крылатском.

Время работы: Пн—Пт 9:00-21:00.

Запись по телефонам: +74996709797,+79254171717.

www.labrehab.ru

Статьи о возможностях криопроцедур и физиотерапии. Описание криокапсулы и процедур с их использованием.

Д

ля начала нужно сказать несколько слов о неоценимой пользе холода для поддержания и восстановления красоты. Слова о том, что на холоде все лучше сохраняется — очевидная житейская мудрость, которая замечательным образом демонстрирует: холод и красота — неразрывно связанные понятия.

Криотерапия, а именно косметические процедуры омоложения и похудения с помощью холода давно получили широкую известность. Это весьма эксклюзивный способ вернуть молодость и поддержать красоту, поскольку проведение криопроцедур требует наличия специального оборудования — криокапсулы. Однако, если купить криокапсулу, все необходимые криопроцедуры можно будет проводить и в домашних условиях, организовав настоящий СПА-салон на дому.

Если начать перечислять положительные факторы процедур криотерапии, то невольно удивишься, насколько комплексно криопроцедуры воздействуют на организм. В первую очередь стоит начать с криотерапии для похудения. Криопроцедуры для тела гарантированно помогают убрать лишний вес, повысить тонус кожи и подтянуть фигуру.  Криокапсула для похудения – незаменимый предмет в доме для тех, кто следит за своим весом и красотой форм. При этом с помощью аппарата для криотерапии можно не просто похудеть, а полностью омолодить свой организм. Однако на общем укреплении иммунитета и мобилизации внутренних резервов человеческого тела криотерапия не останавливается – происходит настоящее лечение холодом, поскольку нормализуются обменные процессы, повышается выносливость и стрессоустойчивость. Потрясающе эффективными для здоровья и красоты считаются также криотерапия суставов и процедуры криомассажа.

Каким образом действует криокапсула? Простого воздействия холодом недостаточно, холод должен быть экстремальным, и такого эффекта добиваются с помощью криотерапии жидким азотом. Специальное крио оборудование гарантирует обеспечение необходимой температуры, требуемой для процедур криотерапии: от -130 до -160 градусов по Цельсию в течение двух минут.

На данный момент множество салонов красоты и СПА-центров предлагают услуги криотерапии в Москве. Вряд ли человека, привыкшего заботиться о своем здоровье, способны отпугнуть цены на криомассаж или другие услуги криотерапии, однако темп современной жизни и стремление к комфорту наверняка заставит задуматься о возможности организовать лечение холодом в домашних условиях и изучить цены на оборудование для криотерапии.

Если сравнивать различные виды оборудования – криосауны, криокапсулы, криобочки, то несомненный приоритет перед остальными с точки зрения гарантированного эффекта и безопасности имеют криокапсулы, среди которых самая известная модель – криокапсулыIcequeen, разработанные и произведенные в России.

Почему именно криокапсула? Их ценят за компактность – для криокапсулы гораздо проще найти место, чем выделить его под целую криосауну. Вместе с тем криокапсула гарантирует воздействие на все тело сразу, в отличие от криобочки, и исключает риск переохлаждения и простуды. Подобное оборудование для криотерапии одновременно и экономично в отношении расхода жидкого азота, и стабильно, и исключительно надежно. Для его использования не требуется никаких особых навыков или медицинского образования – все полностью автоматизировано,

Кстати, если вы регулярно занимаетесь спортом и испытываете частые физические нагрузки, вам обязательно следует на собственном опыте почувствовать пользу криотерапии для спортсменов. Криопроцедуры в спорте – прекрасный способ двигаться вперед к новым достижениям и победам, значительно уменьшая последствия травм. Оборудование для домашней криотерапии – истинное спасение для настоящих спортсменов, кто не мыслит своей жизни без серьезных тренировок.

 

Криотерапия для здоровья и молодости кожи: популярные мифы о бьюти-процедуре, достойной Снежной Королевы | Фитнес и питание

Даже инъекции ботокса пугают девушек, которые только начинают знакомиться с салонным уходом, меньше, чем загадочная криотерапия. Кажется, что процедура, проходящая при экстремальном холоде, принесет как минимум, простуду или серьезное переохлаждение. При этом, врачи положительно относятся к криотерапии, рекомендуя ее в качестве лекарства при многих болезнях и способа продления молодости. 7sisters собрал самые популярные мифы о криокапсулах и попросил прокомментировать их главного врача сети клиник физиотерапии, реабилитации и криомедицины Grand Clinic, Ольге Шуппо.

Миф№1. «Я заболею, потому что холод провоцирует простуду, воспаление легких и множество других неприятных заболеваний»

Ольга: Благодаря воздействию сверхнизких температур происходит стимуляция иммунной системы, выработка «гормонов радости», нормализуются все виды обмена, происходит детоксикация организма и насыщение кислородом тканей. Процедура общей криотерапии воздействует на иммунную и центральную нервную системы, что дает организму своеобразный эффект «перезагрузки». Например, в криокапсуле ICEQUEEN всего за 1-2 минуты можно добиться нормализации метаболизма, улучшения кровообращения, ускорение микроциркуляции тканей и лимфодренажа, снижения хронической усталости и повышения устойчивости к стрессу.

Дело в том, что пользу здоровью приносит только воздействие экстремально низких температур на кожные покровы, начиная с -120-130 С. Очень важно, чтобы в клинике, куда вы обратились, был строго научный подход. Например, в Grand Clinic вы сначала пройдете консультацию у физиотерапевта, который подберет для вас курс криомедицины в сочетании с другими физиотерапевтическими методами — барокамерой, гидромассажем и микротоками. 

Миф№2. «Критерапия может сказаться на моей беременности или репродуктивной функции в целом. Холод помешает мне забеременеть или выносить ребенка».

Ольга: Беременность для большинства крио-методик является относительным противопоказанием. Но если женщина планирует беременность, то метод криомедицины, наоборот, показан для улучшения работы репродуктивного аппарата: улучшение кровоснабжения, улучшение работы гормональной системы. И процесс имплантации здоровой яйцеклетки будет более успешным, как и последующий процесс развития эмбриона. И этот метод не несет никакой угрозы на самых начальных методах беременности, когда женщина еще не знает о том, что она беременна. Во время кормления грудью криомедицину исключают, но не потому, что это  опасно для здоровья женщины. Просто криомедицина запускает активные процессы детоксикации и лимфодренажа — и все продукты распада окажутся в молоке, что может причинить вред ребенку.

Миф№3. «Криотерапия не работает на снижение веса, если ее не сочетать с диетой и интенсивными физическими упражнениями. Процедуры в крио-кабине не помогут похудеть».

Ольга: Работает! Я написала научную работу по проблеме метаболического синдрома и ожирению. Пациенты проходят только курс криомедицины без диет и упражнений — и мы при этом видим прекрасные результаты коррекции веса и оздоровления всего организма. Та же криокапсула ICEQUUEN гарантирует снижение веса на 1-2 кг за 5-7 процедур.  Как это работает? Криомедицина улучшает и ускоряет все процессы метаболизма (белковый, углеводный, жировой, водно-солевой). Организм начинает правильно «расходовать» жировые отложения и перестает откладывать лишний жир «про запас». И самое интересное — происходит правильное формирование бурого жира из белого. Что это такое? В организме человека нет ничего лишнего: жир необходим для правильных метаболических процессов, правильные жиры необходимо получать с пищей (безжировая диета крайне опасна). Но какой жир «правильный»? У людей с лишним весом бурого жира почти нет, зато он есть у спортсменов, у детей, у худощавых людей – то есть у тех, у кого правильно идет естественный процесс превращения жира в энергию . Как не сложно догадаться, бурый жир — это «правильный жир».

Миф№4. «Криотерапия никак не влияет на красоту кожи. Разве холод может замедлить ее старение?»

Ольга: Красивая кожа не может быть не здоровой, согласитесь. Кожа – это самый большой орган нашего тела, который с помощью нервных рецепторов тесно связан со всеми другими органами и системами. Именно на этом основан метод криомедицины, а также множество других методов — ароматерапия, массаж и физиотерапия. Ссостояние кожи отражает внутренние процессы физиологии и психосоматики. Например, дерматиты – это бич жителей мегаполиса. Всего за 1-2 сеанса в криокапсуле кожа заметно оздоравливается. Многочисленные подкожные сосуды и капилляры под действием сильного холода быстро сужаются, иногда такую реакцию называют холодовой спазм. Шоковое холодовое воздействие на клетки кожи вызывает их ускоренное обновление и активную регенерацию тканей. Проявляется это не только повышением тонуса и эластичности кожи, улучшением цвета эпидермиса и устранением отечности, но и заметным уменьшением количества мелких мимических морщин. После курса из 7 процедур пациенты замечают, что кожа приходит в тонус, подтягивается, уплотняется, улучшается цвет лица, исчезает дряблость, отечность, «темные круги под глазами», сужаются поры. Это прекрасная профилактика сосудистых патологий (розацеа, купероз), акне, преждевременного старения от солнечной инсоляции и т.д.

Криотерапия для здоровья и молодости кожи: популярные мифы о бьюти-процедуре, достойной Снежной Королевы was last modified: 10 августа, 2017 by Настасья Гарина

как часто посещать, показания к процедурам

Посещение криосауны, по словам научных исследователей, позволяет добиться быстрого похудения, улучшения кожного покрова, уничтожения целлюлита.

Что это такое – криосауна

Криосауна – это капсула, внутрь которой нагнетаются пары кислорода, смешанного с большим количеством азота. Температура в этой капсуле опускается до минус 150 градусов. Хотя по ощущениям в течение пяти минутного пребывания в криосауне, насыщенной холодным азотом, температура не опускается до минус 12 градусов.

Первая криосауна была разработана и испытана в Японии.

Процедура посещения

Сеанс криотерапии длится от 2 до 5 минут. За это время тело не успевает замерзнуть. Зато организм получает стресс, который активизирует защитные функции. Мозг запускает процесс оздоровления организма.

После выхода из криокапсулы, в организме расширяются кровеносные сосуды. Происходит отток лимфы. Отдохнув в течение 10 минут, человек снова должен зайти в капсулу. Повторный заход оказывает меньший стресс на организм.

Сколько по времени длится терапия

Стандартный курс лечения холодом состоит из 25 посещений. Чтобы добиться похудения на 4 килограмма, понадобится 15 раз посетить криокапсулу. Доктора, работающие в этой области, советуют не оплачивать полностью курс. Возможны неприятные последствия после первых двух посещений. Все зависит от организма.

Общая длительность и количество сеансов подбирается индивидуально лечащим врачом.

Внимание! На Западе практикуется поход в криосауну при температуре тела 37.5 градусов, когда простудная болезнь только развивается в организме. Российские доктора советуют проконсультироваться у лечащего врача, чтобы не нанести вред здоровью.

Процесс терапии путем лечения холодом происходит так:

1. Человек снимает верхнюю одежду, бижутерию из кожи, дерева и пластика.
2. Надевает варежки и носочки, чтобы конечности не замерзли.
3. Заходит в капсулу.
4. Голова остается вне зоны холода, поэтому за прическу или обморожение носа можно не переживать.
5. Через специальные вентиляционные отверстия в капсулу нагнетаются пары холода.
6. Температура кожного покрова опускается до 0 градусов.
7. По истечении пяти минут, человек выходит из криокамеры.
8. Отдыхает несколько минут, лежа на софе.
9. Затем проводится повторный сеанс.

Температура опускается минус 120 за 5 секунд. Рядом находится лечащий доктор. Он следит за состоянием здоровья пациента. Если наблюдаются негативные последствия после первого сеанса, то курс заканчивается, и человека посылают на медицинское обследование.

После первой процедуры сдают анализы. Доктор определяет, как организм реагирует на лечение холодом.

Внимание! Как часто можно посещать криокапсулу прописывает только лечащий доктор.

Что дает лечение холодом

Внимание! Результаты экспериментов подтверждают, что за пару минут, проведенной в криокапсуле, человек теряет 450 килокалорий.

Холод воздействует на организм следующим образом:

• укрепляет иммунитет организма за счет искусственно создаваемого стресса, активизирующего защитные функции;
• увеличивает скорость обмена веществ, заставляя работать клетки расщепления жиров, и организм худеет;
• улучшается кровообращение;
• обновляется кожный покров;
• повышается тонус мышц;
• происходит оздоровление костей и внутренних органов;
• морщины разглаживаются, ткани кожи становятся эластичными.

Этим методом улучшения здоровья и состояния организма пользуются многие спортсмены. Имеются противопоказания.

Противопоказания

Не рекомендуется посещать криосауну тем, у кого наблюдаются:

• артериальное давление;
• злокачественные опухоли;
• ОРВИ, грипп;
• туберкулез;
• восприимчивость к холоду.

Также не рекомендуется посещать сеансы лечения холодом тем, кто недавно перенес инфаркт. Это лечение считается экстремальным видом терапии.

Многие пациенты после первых нескольких сеансов жалуются на головные боли. Это естественный ответ организма на резкие перепады температур. Если же недомогание усиливается, то доктора рекомендуют прекратить лечение холодом.

Установка криокабинки в домашних условиях

Несмотря на то, что лечение холодом нельзя проводить без наблюдения врача, на рынке продаются криокабинки, которые устанавливают в домашних условиях. Лечение дома в этих кабинках проводится по другому методу.

Процесс обдувания происходит посредством воздушных масс, лишенных влажности. Человек входит в кабинку с головой, в отличие от терапии в криосауне. Такие сеансы более комфортны.

По поводу лечения воздушными массами в домашних условиях без наблюдения врача ведутся споры. Пока что не зарегистрировано случаев тяжелых или летальных исходов такой терапии. Поэтому разрешается пользоваться кабинками в домашних условиях.

После сеанса дома, нужно также выйти и полежать, чтобы организм пришел в норму. Не рекомендуется выходить сразу на улицу или делать что-то по дому.

Заключение

Криотерапия – это оздоровительное и повышающее тонус организма лечение. Но, как часто ходить в такие криосауны – решает доктор.

 

Расходные материалы и аксессуары для крио

CryoCapsule®

Развитие корреляционной световой и электронной микроскопии с CryoCapsule®

Замораживание под высоким давлением — это самая передовая технология, когда речь идет о стекловании гидратированного биологического образца с сохранением ультраструктуры. Разработанная в 80-х годах [1], технология постепенно развивалась, чтобы стать доступной для более широкого сообщества. Тем не менее, подготовка образца перед HPF остается утомительной и часто требует дополнительных знаний в зависимости от образца [2].

CryoCapsule® — это новый инструмент в области замораживания под высоким давлением (HPF) и корреляционной световой и электронной микроскопии (CLEM). Подобно маленькой чашке Петри, она состоит из сапфирового диска с ориентирами и золотого разделительного кольца (толщиной 50 мкм), удерживаемых вместе пластиковым кольцом [3].

Посмотреть больше видео

CryoCapsule® 3 мм, Каталожный номер 3750

Образцы заключены между опорным сапфировым диском (с угольным рельефом) и покрывающим сапфировым диском.

CryoCapsule® загружается в специальный адаптер (HPM010, HPM100, HPF compact 02). Визуализация живых клеток выполняется непосредственно на образце в CryoCapsule® перед HPF.

Переходник для жидкости Abra HPM010, Каталожный номер 3751	Адаптер HMP100 Leica, Каталожный номер 3752

Post-HPF, образец обрабатывается для замещения замораживанием [4] и получения срезов при комнатной температуре.

CryoCapCell разработал набор инструментов для управления CryoCapsule® [4] в большинстве научных сред.

Décapsuleur, Каталожный номер 3753	Décapsuleur Pencil, Каталожный номер 3754

Список литературы

1. Моор Х., Беллин Г., Сандри К., Акерт К. Влияние замораживания под высоким давлением на нервную ткань млекопитающих.Cell Tissue Res [Интернет] 1980 [цитировано 24 июля 2013 г.]; 209: 201-16.
2. Макдональд К.Л., Шварц Х., Томас М., Мюллер-Райхерт Т., Уэбб Р., Бузер С., Морфью М. «Советы и рекомендации» по замораживанию модельных систем под высоким давлением. Методы Cell Biol [Интернет] 2010 [цитировано 19 апреля 2011 г.]; 96: 671-93.
3. Heiligenstein X, Heiligenstein J, Delevoye C, Hurbain I, Bardin S, Paul-Gilloteaux P, Sengmanivong L, Régnier G, Salamero J, Antony C, Raposo G. Криокапсула®: упрощение корреляционного света для электронной микроскопии.Трафик [Интернет] 2014 [цитировано 14 мая 2014 г.]; 15: 700-16.
4. Heiligenstein X, Hurbain I, Delevoye C, Salamero J, Antony C, Raposo G. Пошаговое управление CryoCapsule® с помощью морозильников высокого давления HPM. Методы Cell Biol [Интернет] 2014 [цитировано 27 ноября 2014 г.]; 124: 259-74.

CryoCapsule®

Развитие корреляционной световой и электронной микроскопии с CryoCapsule®

Замораживание под высоким давлением — это самая передовая технология, когда речь идет о стекловании гидратированного биологического образца с сохранением ультраструктуры.Разработанная в 80-х годах [1], технология постепенно развивалась, чтобы стать доступной для более широкого сообщества. Тем не менее, подготовка образца перед HPF остается утомительной и часто требует дополнительных знаний в зависимости от образца [2].

CryoCapsule® — это новый инструмент в области замораживания под высоким давлением (HPF) и корреляционной световой и электронной микроскопии (CLEM). Подобно маленькой чашке Петри, она состоит из сапфирового диска с ориентирами и золотого разделительного кольца (толщиной 50 мкм), удерживаемых вместе пластиковым кольцом [3].

CryoCapsule® 3 мм, # E3750

Образцы заключены между опорным сапфировым диском (с угольным рельефом) и покрывающим сапфировым диском.

CryoCapsule® загружается в специальный адаптер (HPM010, HPM100, HPF compact 02). Визуализация живых клеток выполняется непосредственно на образце в CryoCapsule® перед HPF.

Адаптер для жидкости HPM010 Abra, # E3751 Адаптер HMP100 Leica, # E3752

Post-HPF, образец обрабатывается для замораживания [4] и получения срезов при комнатной температуре.

CryoCapCell разработал набор инструментов для управления CryoCapsule® [4] в большинстве научных сред.

Décapsuleur, # E3753 Décapsuleur Pencil, # E3754

Список литературы

1. Моор Х., Беллин Г., Сандри К., Акерт К. Влияние замораживания под высоким давлением на нервную ткань млекопитающих. Cell Tissue Res [Интернет] 1980 [цитировано 24 июля 2013 г.]; 209: 201-16.
2. Mcdonald KL, Schwarz H, Thomas M, Müller-Reichert T, Webb R, Buser C, Morphew M.«Советы и рекомендации» по заморозке модельных систем под высоким давлением. Методы Cell Biol [Интернет] 2010 [цитировано 19 апреля 2011 г.]; 96: 671-93.
3. Heiligenstein X, Heiligenstein J, Delevoye C, Hurbain I, Bardin S, Paul-Gilloteaux P, Sengmanivong L, Régnier G, Salamero J, Antony C, Raposo G. Криокапсула®: упрощение корреляционного света для электронной микроскопии. Трафик [Интернет] 2014 [цитировано 14 мая 2014 г.]; 15: 700-16.
4. Heiligenstein X, Hurbain I, Delevoye C, Salamero J, Antony C, Raposo G.Пошаговое управление CryoCapsule® с помощью морозильников высокого давления HPM. Методы Cell Biol [Интернет] 2014 [цитировано 27 ноября 2014 г.]; 124: 259-74.

HPM Live μ для полного рабочего процесса CLEM

РЕФЕРАТ

С развитием передовых методов визуализации, имевших место в последнее десятилетие, пространственная корреляция микроскопической и спектроскопической информации — известная как мультимодальная визуализация или корреляционная микроскопия (CM) — стал широко применяемым методом исследования биологических и биомедицинских материалов в различных масштабах длины.Среди множества различных комбинаций методов корреляционная световая и электронная микроскопия (CLEM) стала флагманом этой революции.

Там, где световая (в основном флуоресцентная) микроскопия может использоваться непосредственно для получения изображений клеток и тканей в реальном времени, почти для всех приложений электронная микроскопия (ЭМ) требует фиксации биологических материалов. Хотя подготовка образцов для ЭМ традиционно выполняется путем химической фиксации и заделки в смоле, быстрая криогенная фиксация (витрификация) стала популярным способом избежать образования артефактов, связанных с процедурами химической фиксации / заделки.Во время стеклования вода в образце превращается в аморфный лед, сохраняя ультраструктуру биологического образца как можно ближе к естественному состоянию. Одним из непосредственных преимуществ этого крио-ареста является сохранение флуоресценции белка, что позволяет использовать многоступенчатые мультимодальные методы визуализации для CLEM.

Для дальнейшего изучения потенциала криофиксации мы разработали систему замораживания под высоким давлением (HPF), которая позволяет стеклование при различных параметрах окружающей среды, и применили ее в различных рабочих процессах CLEM.В этой главе мы познакомим вас с нашим новым прибором HPF live μ, с упором на его соединение со световым микроскопом. Мы подробно рассказываем об оптимизации хранения образцов и времени, необходимом для регистрации биологического события, от получения изображений в реальном времени до крио-ареста с использованием HPF. Мы рассмотрим адаптацию HPF к новым рабочим процессам корреляции, связанным с предстоящим переходом от визуализации 2D (клеточные монослои) к визуализации 3D образцов (ткани) и связанной с этим важности гомогенной глубокой витрификации.Наконец, мы обсудим потенциал нашего HPM в протоколах CLEM, особенно для корреляции живых изображений с помощью Zeiss LSM900 с электронной микроскопией.

1. Введение

Корреляционная микроскопия (КМ) — это подход к визуализации, который включает два или более дополнительных метода визуализации для получения структурной или молекулярной информации данного уникального образца, обычно путем последовательных измерений. Здесь мы сосредоточимся на одном из самых популярных методов корреляционной визуализации; корреляционная световая и электронная микроскопия (CLEM).Условия и разрешение, при котором могут работать соответствующие микроскопы, напрямую определяются физическими свойствами их датчиков изображения, то есть светом и электронами. Понимание основных условий, необходимых как для подготовки образцов, так и для оптимизации изображений, необходимо при разработке нового проекта CLEM.

Световая микроскопия (LM) работает при атмосферном давлении на гидратированных материалах и, следовательно, является предпочтительным методом динамической визуализации специфически меченых белков.LM может визуализировать с высокой пропускной способностью большие площади образца размером более сотен микрон, но только с поперечным разрешением ~ 200 нм (без учета методов сверхвысокого разрешения) и без контекстной информации.

Напротив, высокий вакуум, используемый в электронной микроскопии (ЭМ), почти всегда требует обезвоживания и фиксации биологических образцов. Следовательно, ЭМ дает статические изображения в относительно узком поле зрения, от десятков микрон до нескольких нанометров, с относительно низкой пропускной способностью.Тем не менее, EM может предоставить полную контекстную информацию вплоть до субнанометровых деталей, хотя для идентификации конкретных объектов могут потребоваться специальные методы (например, метод Tokuyasu (Geuze, Slot, Van Der Ley, & Scheffer, 1981)).

Благодаря хорошо продуманному рабочему процессу подготовки проб / визуализации — где LM обычно используется до EM — CLEM может сохранить преимущества двух методов (de Boer, Hoogenboom, & Giepmans, 2015; Heiligenstein, Paul-Gilloteaux, Raposo, & Salamero, 2017; Müller-Reichert & Verkade, n.d .; Т. Мюллер-Райхерт и др., 2014; Томас Мюллер-Райхерт и Веркаде, 2012; Плитцко, Ригорт и Лейс, 2009). Это особенно актуально, когда используется замораживание под высоким давлением (HPF), позволяющее осуществлять прямую криофиксацию биологических образцов без какой-либо химической фиксации.

Здесь мы продемонстрируем использование прибора HPM Live-μ в качестве гибкого инструмента для иммобилизации образцов, позволяющего гомогенное стеклование толстых биологических образцов (до 200 мкм).

Мы покажем соединение HPF с оптическим микроскопом, чтобы минимизировать задержку между динамической визуализацией и криоиммобилизацией, чтобы зафиксировать интересующие события как в пространстве, так и во времени.

2. Принципы замораживания под высоким давлением

i. Диаграмма водной фазы в качестве ориентира для HPF

В связи с растущим признанием важности сохранения ультраструктуры во время подготовки образцов для ЭМ криофиксация стала широко распространяться. Витрификация методом погружного замораживания (Dubochet, 2012) — наиболее широко используемый подход из-за его простоты и низкой стоимости. Однако из-за ограничений теплопередачи толщина образца ограничена глубиной стеклования менее одного микрометра, что значительно ограничивает тип образцов, используемых при погружной заморозке.Напротив, замораживание под высоким давлением (HPF) позволяет стеклование глубиной до 200 мкм (Moor, 1987; Shimoni & Müller, 1998; Studer, Michel, & Müller, 1989). Хотя HPF, по сравнению с погружным замораживанием, требует более сложных и более дорогих инструментов, он позволяет витрифицировать гораздо более широкий спектр образцов биологического материала (например, культуры клеток, тканей) с сохранением ультраструктуры, близкой к нативной.

В основе потребности в HPF лежит эффект Лейдена-Фроста (Moor, 1987; Studer et al., 1989). При контакте с горячей поверхностью (образец или камера HPF) жидкий азот (LN2) испаряется и создает изолирующий газовый слой, который снижает охлаждающую способность системы. Это приводит к медленному охлаждению и, следовательно, к кристаллизации льда в образце, что может повредить ультраструктуру и, следовательно, затруднить интерпретацию наблюдений. В HPF образец подвергается воздействию сильного потока LN2, через который за несколько миллисекунд давление вокруг образца повышается до 2100 бар, а температура образца падает до 140 K (-133 ° C, рис.1, P3), газ выталкивается через выходное отверстие. Из-за высокого давления и трения температура жидкого азота во время замерзания не упадет до -196 ° C, а достигнет -133 ° C, как показано на фазовой диаграмме воды (рис. 1). Важно отметить, что во время этого быстрого процесса вода не достигает термодинамического равновесия при достижении конечной температуры и давления (P3). При термодинамическом равновесии и постоянном давлении 2000 бар вода затвердевает при температуре ниже 251 К (-22 ° C) (рис.1, P2), поскольку в этот момент могут присутствовать различные формы льда, окончательное образование льда будет зависеть от других локальных переменных. Однако в динамическом процессе HPF, где температура и давление изменяются одновременно, вода между 251 K и 176 K будет проходить через переохлажденное состояние (хрупкая жидкая фаза), прежде чем достигнет твердой фазы (рис. 1, зеленая линия T _LL ). Ниже 176K вода затвердеет в «стекло» (или прочную жидкую фазу) (Tournier, 2020), состоящее из аморфного льда высокой плотности (HDA) и / или аморфного льда низкой плотности (LDA) (Tulk, Molaison, Makhluf, Manning , & Klug, 2019) в зависимости от точного давления.Ниже 2000 бар большая часть будет лед LDA, а выше 2000 бар — лед HDA (Lin, Smith, Liu, Tse, & Yang, 2018). Вполне вероятно, что вода в HPF представляет собой смесь этих двух фаз (Richter, 1994).

Рисунок 1: Диаграмма фазы

воды при высоком давлении и экспериментальная кривая HPF. При увеличении давления точка замерзания постепенно снижается, пока не будет достигнут минимум 2048 бар и 251 К (-22 ° C) (P2). Ниже точки замерзания и выше значения T _LL (зеленая линия) вода может перейти в переохлажденное состояние (незамерзшее состояние) в метастабильном состоянии.Любое нарушение равновесия вызывает быстрый кристаллический переход (линия льда I, область I _h ). При замораживании под высоким давлением условия повышаются для быстрого достижения равновесия 2048 бар перед быстрым охлаждением биологического материала, чтобы пересечь переохлажденную область и достичь стеклования воды (стеклование ниже T _LL , когда вода не кристаллизуется) . После стеклования система возвращается к атмосферному давлению при переносе биологического материала в LN2 для предотвращения перекристаллизации во льду I _c около 138 К (-135 ° C).Пунктирная красная линия приблизительно представляет собой путь, который, как ожидается, потребуется молекулам воды для достижения стеклования в HPF. Синяя линия (экспериментальная кривая) — это реальная траектория, созданная нашим HPM. Синий пунктир — обратный переход от Ic к Ih.

ii. При разработке технологии замораживания высокого давления

HPF руководствовались возможностью пересечения фазовой диаграммы без образования кристаллов льда, перемещаясь как можно быстрее вдоль линии 2000 бар до температур ниже 176 К.Следовательно, замораживание под высоким давлением требует синхронизации нарастания давления и охлаждения образца в пределах лишь небольшого окна давления и температуры, чтобы гарантировать эффективное стеклование. Исторически сложилось так, что технологии для надежного создания давления в 2000 бар менее чем за 35 мс были исключительно гидравлическими: давление масла накапливалось и быстро сбрасывалось для повышения давления LN2 через поршневую систему. Однако повышение давления оставалось относительно медленным, и для синхронизации требовался этанол, чтобы замедлить охлаждение образца (McDonald, 2009; Shimoni & Müller, 1998).Этот широко признанный подход был коммерциализирован в HPM010 [ABRA Fluid AG, Виднау, Швейцария] и Wohlwend Compact 01 [Wohlwend GmbH, Сеннвальд, Швейцария]. Чтобы ускорить создание давления и оптимизировать временную корреляцию между давлением и температурой, Studer et al. разработала технологию EMPACT [Leica Microsystems], которая отделяет повышение давления от применения криогена (Studer, Graber, Al-Amoudi, & Eggli, 2001). Позже Leica Microsystems разработала машину, работающую под давлением воздуха.Сброс давления воздуха происходит значительно быстрее, чем у масла. Используя игольчатый клапан и проводящий канал LN2, эта система улучшила скорость нагнетания давления, даже несмотря на то, что давление воздуха было менее сильным из-за эластичности воздуха. Технология была коммерциализирована как Leica HPM100 [Leica Microsystems] и недавно была расширена для применения световой или электрической стимуляции, синхронизированной с процедурой стеклования (EM ICE, Watanabe et al., 2011).

Еще один способ улучшить стеклование HPF, которое в основном важно для замораживания толстых образцов, — это увеличить скорость охлаждения, как ранее предлагали Шимони и Мюллер (Shimoni & Müller, 1998).Используя LN2 в качестве хладагента, скорость охлаждения можно улучшить либо за счет более высокого потока LN2, либо за счет более быстрого контакта, уменьшая первичное медленное охлаждение, вызываемое газообразным азотом. Здесь задача состоит в том, чтобы сбалансировать повышение давления и охлаждение образца. Слишком быстрое охлаждение вызовет кристаллизацию воды, а слишком медленное охлаждение вызовет повреждение образца давлением.

3. Проектирование HPM Live μ

i. Повышение скорости повышения давления и скорости охлаждения

При 2000 бар LN2 имеет температуру 113 К по сравнению с 77 К при 1 бар, что снижает градиент температуры на 33 К, а, следовательно, и скорость охлаждения.Чтобы компенсировать сильное влияние на градиент температуры, мы значительно увеличили скорость и расход LN2 на входе. В нашем « Flash Core » мы используем технологию пропорциональной мощности (линейное увеличение давления) для управления гидравлическим давлением, что позволяет нам создавать давление со скоростью 1000 бар / мс. Благодаря этой запатентованной технологии мы достигаем температуры LN2 и 2000 бар всего за 2 мс, что делает нашу систему HPF самой быстрой из имеющихся на сегодняшний день. Отметим, что, хотя теоретическое значение для LN2 при 2000 бар составляет 113K, рабочие температуры LN2 HPM на самом деле могут достигать 133 K, разница объясняется высокой плотностью LN2 и трением во время применения высокоскоростной струи LN2 ( Shimoni & Müller, 1998; Stadie, Callini, Mauron, Borgschulte, & Züttel, 2015; Studer, Michel, Wohlwend, Hunziker, & Buschmann, 1995).

ii. HPM Live μ: гибкий исследовательский механизм для оптимизации эффективности стеклования

Несмотря на долгую историю использования HPF во многих лабораториях, в большинстве биологических исследований используются предварительно установленные параметры прибора HPF: машины калибруются на заводе для достижения теоретического оптимума а числовые значения HPF (время, температура, давление) игнорируются до тех пор, пока не будет обнаружено качество образца с помощью ЭМ. В конце трудоемкого процесса подготовки пробы пользователю остается вернуться к оптимизации криозащиты, которая может существенно повлиять на биологическое поведение пробы.До сих пор ни одна коммерческая система не предлагала возможности настройки параметров, управляющих процессом замораживания под высоким давлением.

Все научные подходы основаны на предположении, что стеклование — это просто вопрос быстрого синхронизированного повышения давления и охлаждения. Мы считаем, что сложность HPF сильно недооценивается. Что касается того, что постепенно распознается при глубокой заморозке (Klebl et al., 2020; Shi, Ling, Zhu, & Zhang, 2019), параметры HPF должны быть настраиваемыми и доступными, чтобы оценить их влияние на образец (Leforestier, Richter , Livolant, & Dubochet, 1996).Поэтому мы разработали ядро ​​HPM таким образом, чтобы пользователь мог устанавливать ключевые параметры стеклования, включая скорость нагнетания давления, скорость охлаждения и смещение охлаждения (давление при 0 ° C), а также продолжительность и значение приложенного давления.

Как упоминалось ранее, криоконсервация — это кинетический процесс, который происходит вне термодинамического равновесия (Tse, 2019; Tulk et al., 2019), и динамические параметры, ведущие к идеальной кривой охлаждения HPF, еще предстоит изучить. Благодаря нашей технологии « Flash Core » мы можем настроить скорость, с которой LN2 высвобождается под давлением.На нижнем уровне давление увеличивается за 15 мс, что сопоставимо с другими коммерческими приборами HPF. Чтобы расширить возможности управления HPF, мы предоставляем возможность впрыска этанола для смещения пика охлаждения на более поздний момент, когда давление уже установлено, обеспечивая задержку синхронизации P / T около 12 мс. Температурная задержка для синхронизации частично связана с нагревом этанола в камере (25 ° C), который занимает 7 мс. В верхнем конце давление нарастает всего за 2 мс, создавая давление до того, как скорость охлаждения может вызвать зарождение гексагонального льда.

Кроме того, технология « Flash Core » позволяет пользователю регулировать высоту и продолжительность конечного плато давления, с помощью которого становится возможным исследовать различные области на фазовой диаграмме воды, например для переключения между формированием HDA или LDA.

Чтобы гарантировать, что измерения соответствуют условиям, окружающим образец, мы разместили датчики температуры и давления непосредственно внутри камеры HPF, выше и ниже образца. Оба изменения температуры и давления регистрируются с частотой 1 мс.Это позволяет исследовать параметры HPF с точной записью и адаптировать их к нестандартным (например, толстым или неводным) образцам.

С целью расширения знаний пользователей о механизмах стеклования HPF, которые до сих пор остаются эмпирическими, большинство параметров (кроме скорости повышения давления) регулируются через графический интерфейс пользователя. Пользователь может адаптировать параметры HPF к конкретным типам образцов (например, толщине, гидратации) для лучших результатов замораживания.

iii.Пользовательский интерфейс для быстрой оценки и оптимизации HPF-процедур

Витрификация путем замораживания под высоким давлением — сложное явление, предшествующее деликатному рабочему процессу, в котором выполняется либо залитый пластиком, либо криогенная ЭМ. Как объяснялось выше, качество образца часто проверяется только на последнем этапе рабочего процесса: ЭМ-анализе. При оптимизации протокола для улучшения подготовки образца очень важно отслеживать историю образца: был ли использован свежий или фиксированный материал? Использовалась криозащита или нет? Какие параметры HPF использовались, выполнялась ли постобработка? Для активного отслеживания качества образцов и поддержки управления данными, налагаемого журналами для воспроизводимости данных, все параметры, связанные с этапом стеклования и относящиеся к состоянию машины, записываются в стандарте ‘.csv ’, доступный через графический пользовательский интерфейс машины (рис. 2, 3, 4). Таким образом, становится возможной оптимизация протоколов для каждой отдельной выборки, что обеспечивает более надежную передачу знаний. Кроме того, возрастающие требования к хранению метаданных для эффективной прослеживаемости и воспроизводимости подразумевают обязательную запись параметров HPF и кривой, а также присвоение каждому образцу уникального идентификатора отслеживания. Эта запись позволяет отслеживать каждый отдельный образец и связывать данные световой микроскопии с данными электронной микроскопии в подходах CLEM.Таким образом, HPM Live-μ предлагает индивидуальную запись и хранение данных об образцах, которые могут быть связаны с его параметрами HPF.

Рисунок 2:

Система с полным графическим интерфейсом пользователя (GUI). A-Машина отображает полные инструкции для пользователя на 15-дюймовом сенсорном экране (GUI). B-Каждый выстрел HPF дает начало многочисленным измерениям. Все параметры сохраняются для последующего анализа. Метаданные образца, например, тип образца, подготовка образца, такая как предварительная фиксация или криозащита, тип носителя и т. Д., Могут быть легко интегрированы во вкладку примечаний для отслеживания истории образца

Рисунок 3: Анализ выстрела

HPF в режиме реального времени, чтобы направлять пользователя.После каждого выстрела измеряется и анализируется ряд параметров, чтобы помочь пользователю в контроле качества. Эту информацию можно получить для последующего сравнительного анализа (формат .csv).

Рисунок 4:

Пояснения к измеряемым параметрам . Чтобы помочь пользователю понять измеряемые параметры, доступна страница в графическом интерфейсе пользователя, подробно описывающая измеренные параметры.

Наличие мини-компьютера Intel ^® NUC предлагает расширенный графический интерфейс пользователя для простого управления параметрами системы и мониторинга.Химически стойкий сенсорный экран Full HD позволяет информативно отображать все параметры эксперимента, такие как температура и давление в камере (рис. 3), для которых также предоставляется учебная информация (рис. 4). Возможность загрузки учебных пособий в формате pdf, созданных собственными силами, поддерживает автономию пользователя и необходимость соблюдения правил управления предприятием.

iv. Широкий ассортимент держателей образцов для всех коммерческих носителей

По мере развития замораживания под высоким давлением в полевых условиях были разработаны различные носители для удовлетворения экспериментальных потребностей.Наиболее распространенными сосудами, защищающими образец во время замораживания, являются i) носители для замораживания под высоким давлением, ii) «пробирки» для клеточных суспензий и iii) сапфировые диски или «криокапсулы» для живых CLEM (рис. 5B). Ниже мы кратко обсудим различия между сосудами и приведем примеры подготовки проб для замораживания под высоким давлением для различных случаев.

Рисунок 5:

Инструменты для эффективной подготовки и обработки проб в HPF. A) станция загрузки для HPM Live μ., Состоящая из держателя образца (серебряный) и предметного столика (зеленый) B) Различные существующие держатели и сапфировые диски для образцов 3 и 6 мм, медная пробирка и криокапсулы. C) Различные зажимы из нержавеющей стали для крепления держателей, адаптированные к держателям различных образцов . D) Комплект держателей, зажимов и держателей образцов HPM Live μ F) Зажим CryoCapsule и CryoCapsule. Ж) Станция разгрузки с блоком хранения Quick Freeze Substitution.

Наиболее распространенными судами являются носители , также известные как планшеты или шляпы (рис. 6а). Это небольшие диски с внешним диаметром 3 или 6 мм, которые могут содержать образец в жидкой или твердой форме (например,г клеточной суспензии или тканей). Носители изготовлены из металла (алюминий, медь с золотым покрытием, медь, титан) для сочетания высокой теплопроводности и высокой механической прочности.

Рисунок 6:

Все операторы связи имеют общие характеристики. A — внешний диаметр (3 или 6 мм) определяет название держателя, полость имеет диаметр 2 или 5 мм соответственно, а общая толщина составляет 500 мкм. Сборка из 2 держателей составит 1 мм для заполнения зажима в стандартной комбинации. B — сумма верхней и нижней полости всегда достигает 300 мкм.Носители типа B имеют плоскую сторону и полость 300 мкм. Носители типа А выбираются для настройки конкретной глубины образца. C — узел держателя выбран так, чтобы он плотно прилегал к толщине образца. Чтобы облегчить ориентацию во время манипуляции с образцом, рекомендуется поместить образец в полость и накрыть ее плоской стороной держателя типа B. Все комбинации могут использоваться в соответствии с критериями стеклования.

Носитель (рис. 6b) имеет верхнюю и нижнюю полости, которые вместе имеют глубину 300 мкм, и центральный опорный слой толщиной 200 мкм и, таким образом, общую высоту 500 мкм.

Хотя наиболее распространенными носителями являются носители типа A и B (определение см. На рис. 6B), где A содержит размер полости 100/200 мкм, а B содержит размер полости 300/0 мкм (также называемый плоской вершиной), также доступны несущие полости других размеров (25/275 мкм, 50/250 мкм и 150/150 мкм).

Для улучшения процесса замораживания важно выбрать как можно более мелкую полость, чтобы обеспечить прилегание образца, уменьшив при этом объем остекловывания до минимума.Избыток воды и увеличение толщины уменьшают вероятность однородного и качественного стеклования.

Перед замораживанием образцы «зажаты» между двумя держателями, которые соответствуют желаемой толщине образца (рис. 6c). В зависимости от последующего эксперимента после витрификации популярные настройки носителей будут следующими: (Рис. 6c)

1. Нижний держатель с полостью любого размера и плоский держатель (тип B) наверху для последующих экспериментов, таких как крио-FIB / SEM (Akiva et al., 2015, 2019), замораживание или криосекционирование

2. Два держателя с полостями любого размера. Это будет в основном использоваться для разрушения замораживанием, например, с использованием крио-SEM.

Готовый образец загружается в соответствующий зажим для HPF (рис. 5c)

Трубки (рис. 7A) обычно изготавливаются из меди и имеют длину 9 мм. внешний диаметр составляет 0,45, 0,5 или 0,6 мм, а внутренний диаметр составляет 0,3, 0,35 и 0,3 мм соответственно.

Рисунок 7:

Клеточные суспензии, замораживаемые в микрокапиллярной пробирке.A- Схематическое изображение трубы с имеющимися размерами. B — медная трубка длиной 9 мм используется для защиты образца от струи азота во время стеклования. C- вставьте микрокапиллярную трубку в медную трубку и позвольте клеточной суспензии заполнить микрокапилляр. D- Закройте оба конца медной трубки плоскогубцами, затем срежьте выступающий микрокапилляр острым лезвием. E- Поместите медную трубку в зажим и приступайте к замораживанию.

Важно отметить, что медь очень цитотоксична, и клетки быстро страдают от прямого контакта с ней.Поэтому настоятельно рекомендуется загружать ячейки в капиллярную трубку, которая сама загружается в медную трубку, чтобы защитить образец от выстрела LN2, как описано в предыдущем разделе.

Сапфировые диски (Monaghan, Cook, Hawes, Simpson, & Tomley, 2003), диски Aclar ^® (Jiménez, Humbel, van Donselaar, Verkleij, & Burger, 2006) и CryoCapsules (Heiligenstein et al., 2014). ) представляют собой различные замораживаемые диски, которые обеспечивают рост клеточного монослоя на прозрачной поверхности перед замораживанием.Такой подход полезен для исследований CLEM. В то время как диски Sapphire и Aclar ^® устанавливаются между двумя металлическими держателями перед HPF, CryoCapsule представляет собой автономную систему, которая позволяет получать изображения в реальном времени за секунды до замораживания. Мы подробно рассмотрим криокапсулу в разделе 4.

Выбор правильного метода подготовки проб для HPF

Ниже мы выделяем четыре протокола обработки проб для HPF, которые охватывают большинство биологических материалов. Протоколы приведены для (а) клеточных суспензий, (б) клеточных культур и (в) тканей.

а. Клеточная суспензия

Вариант 1:

1. Вставьте микрокапиллярную трубку длиной примерно 2 см в открытую медную трубку (9 мм).

2. Погрузите конец микрокапилляра в суспензию клеток до полной загрузки.

3. Закройте оба конца медной трубки плоскогубцами

4. Вырежьте микрокапилляр, выходящий из медной трубки

5. Вставьте трубку в специальный зажим (Рис. 5c, зажим № 3; Рис. 7e)

6. Завинтите зажим в держателе образца до полной фиксации

7. Загрузите держатель в HPM Live μ

8. Запустите цикл замораживания (ножной переключатель или сенсорный экран)

Вариант 2: адаптированный из McDonald et al. (McDonald et al., 2010), Рисунок 8 :.

1. Концентрирование клеточной суспензии центрифугированием и удалением супернатанта

2. Возьмите наконечник пипетки 200 мкм и запечатайте узкий конец конуса воском или нажатием на горячую поверхность

3. Пипетка в запечатанном наконечнике, начиная с широкий конец конуса — 100 мкл концентрированной клеточной суспензии.

4. Осторожно центрифугируйте запечатанный наконечник для дальнейшего концентрирования клеточной суспензии на конце запечатанного наконечника.

5. Загрузите «заполненный наконечник» в пипетку

6. Обрежьте запечатанную конечность

7. Поместите от 5 до 10 мкл клеточной суспензии в носитель A (глубина 100 или 200 мкм)

8. Закройте крышку с плоской стороной держателя B

9. Загрузите сборку в соответствующий зажим (диаметром 3 или 6 мм, # 4 или # 5)

10. Завинтите зажим в держателе образца до полной фиксации

11. Загрузите держатель в HPM Live μ

12. Запустите цикл замораживания (педаль или сенсорный экран)

Рисунок 8:

Подготовка образца суспензии клеток для замораживания в носителе.Шаги с 1 по 6 увеличивают концентрацию клеток перед загрузкой в ​​носитель. Избыток жидкости может снизить однородность замерзания. Конечная концентрация (7, 8) почти такая же, как в отфильтрованных ячейках.

г. Культура клеток

Есть много способов подготовить 2D культуру клеток для витрификации с использованием HPF. Здесь мы представляем пять возможных вариантов настройки, которые обычно используются. Каждый метод имеет свои преимущества и должен быть адаптирован к конкретному научному вопросу.

Выбор опорного слоя для культуры клеток (рис.9):

1. Свободно плавающая опора, такая как сапфировый (Reipert, Fischer, & Wiche, 2004) или диск Aclar ^® (Jiménez et al., 2006). Требуется предварительный ориентир для определения ориентации клеток во время манипуляций с образцом (культура, HPF, FS, микротомия). Рисунок 9 Б, В.

2. Свободно плавающая решетка ЭМ, предварительно покрытая формоваром ^® , пиолоформом ^® или углеродной пленкой для поддержки ячеек с достаточной плотностью. Рисунок 9 D.

3. CryoCapsule, предназначенная для экспериментов Live-CLEM, они уже готовы к использованию (Heiligenstein et al., 2014). Рис. 9 E.

4. Металлический носитель с разной глубиной (избегайте носителей типа 150/150) для определения ориентации клеток во время манипуляций с образцом, клетки соответственно на самой мелкой или самой глубокой стороне. Рисунок 9 F

   Подготовка к культуре клеток:

5. Стерилизовать выбранный носитель путем кратковременной промывки в 70% этаноле с последующей быстрой промывкой в ​​PBS или дистиллированной воде.

6. Поместите носитель в чашку Петри углем вверх, чтобы улучшить адгезию и рост клеток (культуры клеток, как правило, лучше растут на тонкой углеродной пленке). Рисунок 9 A.

7. Поместите клеточную культуру и дайте ей отстояться минимум на 2 дня и убедитесь в надлежащей приверженности

8. Начните свой экспериментальный протокол культивирования клеток после предварительной адгезии клеток.

9. В день HPF обновите культуральную среду (включенные углеводы действуют как естественный криопротектор).

   Подготовка к замораживанию:

10. Предварительно смочите носитель, погрузив его в раствор для культивирования клеток (чашка Петри), чтобы минимизировать риск образования пузырьков

11. Загрузите диск, покрытый клетками, в носитель (рис. 9b, c, d), ячейки обращены к полости

12. Закройте крышку влажным держателем крышки или покрывающим сапфировым диском (CryoCapsule)

13. Загрузите сборку в специальный зажим (Рис. 5C, зажим № 2, 4, 5)

14. Завинтите зажим в держателе образца до полной фиксации

15. Загрузите держатель в HPM Live μ

16. Запустите цикл замораживания (ножная пластина или сенсорный экран

Рисунок 9:

Культура клеток варианты роста.Описанный ниже носитель A-all можно культивировать после стерилизации в обычной чашке Петри даже одновременно, чтобы определить наиболее подходящий протокол. B-a 3- или 6-миллиметровый диск с отметками (сапфир или Aclar) помещается так, чтобы ячейки были обращены к полости (выбранной в соответствии с вашим экспериментом). Держатель типа B с плоской стороной используется для завершения сборки в зажиме. Общая толщина превышает 1 мм (дополнительная толщина диска), поэтому зажим необходимо адаптировать (более глубокий или слегка гибкий). C-диск входит в полость держателя, полость должна быть равна толщине диска плюс толщина образца.D-Клетки выращиваются на покрытой пленкой ЭМ сетке, и клетки ориентированы в сторону полости. В зажимном узле можно пренебречь толщиной сетки, адаптация не требуется. E-CryoCapsule загружается в специально разработанный зажим с очень жесткими мерами для поддержки визуализации в реальном времени и HPF без повреждения сапфирового диска. F-клетки выращивают непосредственно внутри носителя. Глубина держателя выбирается в соответствии с толщиной образца и закрывается плоской стороной держателя B.

Примечание: скармливайте клетки свежей средой за один-два часа до эксперимента в соответствии с вашим протоколом. Сытые клетки будут лучше витрифицироваться, принимая сахар, присутствующий в среде для выращивания. Для эксперимента CLEM рассмотрите возможность использования среды без фенолового красного для устранения нежелательной флуоресценции .

г. Объемный образец, ткань

Стеклование объемного образца часто бывает проблематичным: в большинстве случаев образец имеет толщину более 200 мкм, что является пределом глубины стеклования.Поэтому рекомендуется разбавить образец перед замораживанием (вибратом, сверхострым лезвием бритвы, скальпелями Feather ^® ) до минимально возможной толщины. Отрегулируйте глубину держателей как можно мельче, чтобы снизить содержание воды и улучшить качество замораживания.

Предупреждение: сжатие образца слишком мелкой сборкой может повлиять на ультраструктуру.

Уменьшите количество воды , используя наполнитель (например, дрожжевую пасту) или криозащитное средство (CP) (10-20% декстрана 70000 кДа, 10% BSA).Если возможно, приготовьте образец непосредственно в CP для его пропитки и после переноса в носитель долейте в носитель CP.

Визуальным осмотром убедитесь, что нет пузырьков воздуха: воздух сжимается и поглощает часть давления, предотвращая замерзание HPF. Чтобы избежать образования пузырьков воздуха при закрытии, вы можете смочить плоскую сторону закрывающего держателя раствором CP перед закрытием.

Все комбинации могут иметь глубину от 25 мкм до 600 мкм (рисунок 6 C).Самые мелкие дадут наилучшие результаты. Более 200 мкм настоятельно рекомендуется использовать криозащитное средство для оптимальной сохранности.

4. Интеграция HPM Live μ в рабочий процесс CLEM

i. Крио-захват быстрого и небольшого биологического события

Ключевым моментом для регистрации динамики в CLEM является разница во времени между последним изображением, полученным во время визуализации в реальном времени, и иммобилизацией. В протоколах химической фиксации образец обычно иммобилизуют путем воздействия фиксатора при постепенной фиксации изображения образца (от миллисекунд до минут в зависимости от биологического образца).Временная корреляция равна 0 с, если визуализация продолжается во время фиксации (Stepanek & Pigino, 2017), но в то же время подвергает образец риску появления артефактов в процессе фиксации (Murk et al., 2003). Интересной альтернативой, которая еще не поступила в продажу, является микрофлюидная камера, которая позволяет крио-арест во время визуализации (Fuest et al., 2018). В настоящее время не существует автоматизированного решения для CLEM толстых образцов. На сегодняшний день самые быстрые процедуры остаются ручными, что предотвращает тесную временную корреляцию между последним изображением и крио-арестом (Heiligenstein et al., 2014; Веркаде, 2008).

Один из способов преодолеть это ограничение — культивировать и наблюдать интересующий образец в HPF-совместимой среде, такой как CryoCapsule (Heiligenstein et al., 2014). Криокапсула представляет собой сосуд чашеобразной формы. Дно состоит из сапфирового диска с ориентиром и разделительного кольца толщиной 50 мкм, сделанного из золота, для создания полости, в которой растут клетки. Два элемента удерживаются вместе пластиковой стенкой с внешним диаметром 4,5 мм и внутренним диаметром 2,8 мм. Независимая закрывающая сапфировая крышка помещается внутри пластиковых стенок, чтобы создать изолирующую среду для клеток во время визуализации и витрификации (рис.5 Е, 6 А). Использование сапфирового дна в настоящее время является лучшим компромиссом между механическим сопротивлением (Моос: 9), теплопроводностью (35 Вт · м ^-1 .K ^-1 ) и показателем преломления (1,76) (Heiligenstein et al., 2014). . Когда представляющий интерес монослой клеток культивируется в CryoCapsule, кратчайший путь света — это наблюдение за клетками снизу (рис. 10 A). Поэтому мы сначала оптимизировали нашу установку, чтобы она была совместима с инвертированными микроскопами (рис. 10 B).

Рисунок 10:

Физический путь от получения изображений живых клеток до HPF.A) В CryoCapsule клетки лежат на дне чашки, контактируя с ориентирами (углеродный отпечаток), кратчайший световой путь исходит от поддерживающего сапфирового диска внизу. B) Образец находится на кончике держателя образца, прямо над линзой микроскопа и рядом с камерой HPF. C-L физический путь образца между формированием изображения (C), HPF (I) и хранением в LN2 (L).

В лучших установках для световой микроскопии используются масляные иммерсионные линзы с высокой числовой апертурой, равной 1.4 N.A., что обеспечивает высокую чувствительность, малую глубину резкости и, следовательно, высокое разрешение во всех трех измерениях. Однако плохая теплопроводность масла снижает способность любой системы к стеклованию, поэтому его необходимо удалить перед замораживанием. Поскольку нашей целью является сокращение временного окна между визуализацией в реальном времени и витрификацией, это исключает введение этапа блоттинга между визуализацией и витрификацией. Альтернативные линзы, использующие погружение в воду (показатель преломления 1,333), также потребуют промокания, поскольку любая оставшаяся вода будет мешать стеклованию наблюдаемого материала.Следовательно, оставшимся решением является использование воздушных объективов для CLEM в реальном времени с последующим быстрым замораживанием.

Чтобы решить упомянутые выше вопросы и обеспечить быстрый переход от визуализации в реальном времени к замораживанию, мы разработали подвесную руку, пассивно покоящуюся в положении визуализации (рис. 10 B), ожидая, пока пользователь инициирует цикл витрификации. На практике эксперимент по замораживанию выполняется следующим образом.

1. Культура клеток в криокапсуле (рис. 9 E, 10 C)

2. Подготовьте клетки в соответствии с заданным экспериментом

3. Закройте криокапсулу с закрывающим сапфировым диском непосредственно в культуральной чашке Петри

4. Удалите излишки среды

5. Загрузите CryoCapsule в адаптированный зажим

6. Зафиксируйте зажим в держателе образца (сборка живых клеток)

7. Поместите сборку живых клеток для визуализации (Рис.10 A, B)

8. Сфокусируйте микроскоп, найдите интересующую клетку

9. Начните визуализацию (рис. 10 C)

10. Как только пользователь определит интересующее событие, запустите витрификацию (предустановка микроскопа , Сенсорный экран HPM или педаль)

11. Образец автоматически переносится в камеру стеклования (Рисунок 10 C-I)

    1. Образец отводится от линзы объектива (шаг 10D)

    2. Поворачивается на 180 ° (шаг 10E-H)

    3. Попадает в камеру HPF (шаг 10 I)

    4. Фиксация в безопасном положении ( Шаг 10 I)

    5. Запускается цикл HPF.

    Последовательность 10-11 происходит за 1,2 секунды, что позволяет немедленно заморозить многие биологические процессы.

12. После стеклования образец отводится (этап 10J, K)

13. Прямое высвобождение в сосуде Дьюара, заполненном жидким азотом (этапы 10 л)

Следующие этапы эксперимента CLEM (хранение, криогенная -световая микроскопия, замораживание, (крио-) приготовление FIB) — по проекту ученого (рис. 11).

Рисунок 11:

Упрощенные примеры рабочих процессов, доступных от живой флуоресцентной микроскопии до электронной микроскопии. Каждый рабочий процесс должен быть адаптирован к конкретному проекту и биологическому образцу.

Чтобы удерживать криокапсулу в нужном положении во время визуализации в реальном времени и предотвратить повреждение во время струи жидкого азота, зажим был разработан с определенной формой и размерами, чтобы адекватно направлять поток LN2 на образец во время стеклования. Позиционирование CryoCapsule по глубине определяет минимальное рабочее расстояние для воздушного объектива, равное 1.8 мм (рис.10 А, Б).

ii. Гибкий дизайн для рабочих процессов CLEM

Корреляционная световая и электронная микроскопия имеет столько же разновидностей, сколько и научные проекты. Обычно флуоресцентная световая микроскопия проводится перед любым ЭМ-наблюдением, поскольку ЭМ-изображение обычно включает окрашивание тяжелыми металлами, которое гасит сигнал флуоресценции. В идеале флуоресцентную визуализацию следует проводить на любом этапе между получением изображений в реальном времени и заключительным электронным микроскопом. Общий рабочий процесс, адаптированный к большинству научных проектов, в котором проверяется качество и точность, может включать следующие шаги (рис.11):

Хотя не все проекты проходят через все эти этапы, мы разработали нашу технологию с учетом этих процедур, чтобы сделать ее адаптируемой для каждого научного проекта и / или основной задачи принимающего учреждения.

Примечание: только три пути представлены на схеме выше. Многие отклоненные пути могут быть использованы с опытом, чтобы приспособиться к сложности проекта. Обратитесь к менеджеру вашего учреждения, чтобы изучить протокол, который адекватно соответствует вашим потребностям.

Чтобы получить наиболее прямой путь света для флуоресцентной визуализации живых клеток, конфигурация прибора HPF была разработана таким образом, чтобы он соответствовал корпусам инвертированных микроскопов (Nikon TiE-2, Zeiss Axiovert), оптимизируя обнаружение сигнала флуоресцентные белки.Если требуется крио-световая микроскопия, микроскоп (установленный на направляющих) можно отодвинуть (рис. 12 A, B), чтобы установить на него инверторный рычаг и вставить криообъектив в криостаж. Для крио-световой микроскопии инверторный кронштейн устанавливается для получения изображений живых клеток на вертикальном микроскопе (Zeiss LSM 900, рис. 12 C, D). Для крио-флуоресцентной визуализации крио-рычаг удаляется, чтобы соответствовать исходному уровню крио-столика и оптимизировать наиболее прямой путь света (рис. 12, E).

Рисунок 12:

Гибкая конструкция для установки в вертикальные и инвертированные микроскопы.A) Столик микроскопа Axiovert Inverted прочно связан с HPM Live μ. Б) Система разделена для проведения независимой визуализации живых клеток или крио-световой микроскопии с использованием инвертора объектива. C-D) Вертикальный микроскоп, оснащенный инвертором, позволяет получать изображения живых клеток. E) Удаление интервера позволяет установить крио-столик для прямой крио-световой микроскопии.

Чтобы оптимизировать доступ к оборудованию, учитывая, что рабочие процессы CLEM обычно требуют много времени, микроскоп может оставаться доступным для обычного использования LM, отделенного от HPM вне сеансов HPF.

5. Рабочий процесс получения изображений в реальном времени, крио-флуоресценции, флуоресценции в смоле и ЭМ: проверка на каждом этапе

В CLEM флуоресцентная визуализация в реальном времени позволяет напрямую наблюдать биохимическое событие, отмеченное флуоресцентными зондами, где более широкий биологический контекст события можно наблюдать с помощью ЭМ высокого разрешения. Путем сопоставления флуоресцентных и электромагнитных исследований мы могли очень точно заранее выбрать области, которые мы детально анализируем с помощью электромагнитного излучения.

Использование ЭМ обычно является дорогостоящим и часто требует много времени: не только визуализация и постобработка, которая может занять несколько часов (например,грамм. в 3D FIB / SEM), но также и подготовка образцов (окрашивание металла, заливка пластика, ультрамикротомия). Возможность использовать световую микроскопию для точного определения конкретного события и проверки качества образца после замораживания, но до получения ЭМ изображений, является революцией в корреляционной (3D) визуализации, которая экономит часы случайных исследований. Более того, возможность проверки и сравнения качества образца после получения изображений в реальном времени, замораживания, заливки пластмассой и наблюдения с помощью ЭМ также ограничивает визуализацию артефактов, появившихся во время подготовки образца.Преимущества и возможности использования световой микроскопии для управления ЭМ-изображениями и проверки целостности образцов в CLEM, как будет обсуждаться ниже, до сих пор недооценивались.

Здесь мы демонстрируем, как в три простых шага световая микроскопия может способствовать улучшению рабочего процесса CLEM: (i) оценка процесса HPF в криогенных условиях, (ii) оценка качества замещения замораживания и (iii) пространственная корреляция с ЭМ. В этом рабочем процессе клетки выращивали непосредственно на носителях HPF (глубиной от 25 до 100 мкм) [Wohlwend GmbH, Sennwald, Switzerland].Когда визуализация живых клеток была невозможна, клетки сначала фиксировали смесью полиформальдегида (PFA) и глутаральдегида (GA). Важно отметить, что, хотя здесь мы будем обсуждать CLEM для комнатной температуры, CLEM также может выполняться в криогенных условиях (cryoCLEM), ограничивая, если не предотвращая, образование артефактов подготовки образца.

и. Оценка образцов в криогенных условиях после замораживания под высоким давлением

Общий подход к использованию CLEM в исследованиях клеток заключается в выращивании двумерных слоев клеток на сетках ПЭМ с последующим их быстрым замораживанием путем глубокой заморозки (Dobro, Melanson, Jensen, & McDowall , 2010; Хэмптон и др., 2017; Касас, Дюма, Дитлер, Катсикас и Адриан, 2003; Равелли и др., 2020; Schultz, 1988) или замораживание под высоким давлением (Dahl & Staehelin, 1989; McDonald, 2009; Studer et al., 2001; Verkade, 2008). Поскольку толщина клеток обычно превышает 5 мкм, HPF является методом выбора для витрификации, чтобы предотвратить образование кристаллов льда, которые могут повредить хрупкую структуру клеток.

Носители HPF также можно удобно использовать для трехмерных культур клеток, создавая для клеток микросреду.Глубину носителей можно выбрать в пределах от 25 мкм до 300 мкм. Это также относится к носителям, в которых одна из поверхностей представляет собой сапфировый диск (как в CryoCapsule), с большим преимуществом, заключающимся в том, что они позволяют осуществить криозахват в течение 1,2 секунды после прямого наблюдения (рис.10), что невозможно с металлические носители.

В эксперименте, изображенном ниже (рис. 13, 14), шаги были следующими.

1. Клетки культивируют на носителе

2. Живое флуоресцентное изображение клеток перед замораживанием при промежуточном увеличении (20x) для создания обзора (рис.13A)

3. Изображение с высоким разрешением (режим 60x airyscan) получается в конкретном интересующем месте (рис. 13 A)

   Примечание: в зависимости от конкретных потребностей образцы могут быть включены в раствор криозащитного средства (например, декстран). 10-20%).

4. Если носитель закрыт плоской верхней крышкой (рис. 13 B), которую необходимо удалить после замораживания, плоская сторона носителя типа B должна быть покрыта липидной пленкой (например, фосфатидилхолином из яичного желтка, разведенным в этаноле. чтобы получить 1% раствор (вес / объем) (Studer et al., 2014)

5. После того, как образец зажат между двумя держателями, он переносится в держатель образца HPF для замораживания (рис. 13 C, D).

6. образец замораживают под высоким давлением (рис. 13 E, F)

7. удаляют верхнюю поверхность носителя (этому этапу способствует липидный слой, этап 4)

8. образец вводится в криостадия, позволяющая получать трехмерные изображения в криогенных условиях в среде, предотвращающей загрязнение льда из атмосферы (рис. 13 G).

9. Сцена оснащена специальным держателем для решеток ТЕМ или держателей HPF.

10. Крио-флуоресцентная визуализация позволяет сделать первый шаг в процессе валидации пробоподготовки CLEM (рис. 14). Поскольку большинство флуоресцентных зондов видны в криогенных условиях, это позволяет получать изображения до и после HPF, чтобы оценить эффект HPF, например на морфологию клеток, а также на образование льда.

11. Морфология клеток оценивается с помощью флуоресцентных маркеров, как показано для клеток фибросаркомы (рис.14 F).

Рисунок 13: Рабочий процесс

Live to CryoLM. A-клетки, выращенные непосредственно на носителе HPF, визуализируются вживую в капле среды на вертикальном микроскопе. B — Образец заключен с помощью плоской стороны держателя типа B. Избыток среды удаляется. C-Сборка, промокание и загрузка производятся на станции загрузки. D-Зажим, содержащий держатели, закручен до полной фиксации. E-Зажим расположен вертикально, чтобы обеспечить прямой контакт с жидким азотом во время процесса стеклования.F — образец загружается в HPM Live μ, и начинается стеклование. G — Образец визуализируется при криогенной температуре на предметном столике Linkam CMS196 до подготовки к электронной микроскопии.

Рис. 14: От визуализации живых клеток до криофлуоресценции после замораживания под высоким давлением.

Клетки фибросаркомы (HT1080; гистон 2B-mCherry и GFP-Lamin A) выращивали непосредственно на носителях HPF без дополнительного покрытия перед посевом. После дополнительного окрашивания плазматической мембраны (клеточная маска зеленый, Invitrogen) изображения живых клеток получали с использованием режима Airyscan SR-4Y на вертикальном Zeiss LSM900 (A-C).(A) Обзор всего носителя. Увеличенная область показывает ламин A и плазматическую мембрану после возбуждения 488 нм (B) и гистон 2B после возбуждения 561 нм (C). После HPF изображения были получены в криогенных условиях, снабжая Zeiss LSM900 столиком Linkam CMS196 (D-F). Та же область, что и до замораживания, показала сохраненную флуоресценцию как при возбуждении 488 нм (D), так и при возбуждении 561 нм (E). Обратите внимание на то, что при возбуждении 561 нм наблюдается повышенное отражение от несущей. Наконец, изображения с высоким разрешением (размер пикселя 79 × 79 × 450 нм) могут быть получены в интересующей области (F) с помощью объектива с 100-кратным увеличением.

Примечание: после замораживания некоторые клетки кажутся набухшими (рис. 14). В настоящее время неизвестно, является ли это физическим артефактом или результатом изменения оптического пути, например связано с изменением показателя преломления. Однако это видимое набухание исчезает после замораживания.

Интересно, что при использовании возбуждающего лазера 561 нм для изображения образца в криогенных условиях обнаруживается более сильный фоновый сигнал из-за более высокого отражения носителя по сравнению с визуализацией живых клеток (рис. 14E).Хотя это является недостатком для крио-флуоресцентной визуализации, тот факт, что образец носителя также виден в ЭМ, позволяет нам использовать фоновые функции для навигации, чтобы улучшить корреляцию между обоими модальностями визуализации.

Особый интерес для возможной крио-ЭМ визуализации заключается в том, что образование льда можно легко оценить с помощью криофлуоресценции.

При использовании криозащитного средства (например, 10% декстрана) образцы выглядят более прозрачными, менее молочными при отображении в криофлуоресценции.Молочный вид, скорее всего, связан с образованием мелких (100-200 нм) кристаллов льда, которые слишком малы, чтобы их можно было наблюдать, но достаточно большие, чтобы вызывать рассеяние. Следовательно, уже на этой ранней стадии исследователи могут оценить качество образцов и выбрать, какие образцы использовать для крио-ЭМ или замораживания.

ii. Сохранение флуоресценции после замещения замораживанием

Замещение замораживанием (FS) — популярный метод подготовки биологических образцов для ЭМ из-за его высокой степени сохранности ткани.Во время FS замороженный под высоким давлением образец постепенно доводится до комнатной температуры, подвергаясь воздействию контрастных веществ (пятна тяжелых металлов) и погружается в смолу (FEDER & SIDMAN, 1958; Walther & Ziegler, 2002).

FS — это трудоемкий процесс, который занимает несколько дней. Следующие ниже процедуры электронной микроскопии еще дольше и дороже. Поэтому возможность выбора образцов высокого качества после HPF-FS становится важной, чтобы избежать неадекватных процессов электронной микроскопии.

Хотя окраски тяжелых металлов, используемые в большинстве протоколов, подавляют флуоресценцию флуоресцентных зондов, некоторые протоколы позволяют сохранить флуоресценцию после FS (Johnson et al., 2015; Kukulski et al., 2011; Nixon et al., 2009). ; Peddie et al., 2014, 2017). Здесь мы использовали следующий процесс для оценки сохранности образца перед электронной микроскопией:

1. Клетки были выращены на алюминиевом носителе (рисунки 9F и 14)

2. Получено отображение изображений живых клеток (20x)

3. Получено детальное получение изображений с высоким разрешением (60x, режим Airyscan)

4. HPF

5. ФС в 0.2% уранилацетат, 5% h3O в сухом ацетоне, 5 часов при -90 ° C.

6. Постепенное нагревание (+ 5 ° C / час) до -45 ° C

7. 3 полоскания в сухом ацетоне

8. Пропитка 25% R221 в течение 2 часов

9. 50% R221 в ацетоне для 2 часов

10. Пропитка 75% R221 в ацетоне в течение 2 часов и постепенное нагревание до −30 ° C

11. Пропитка 100% R221 в течение ночи

12. Пропитка 100% R221 в свежем растворе и УФ-отверждение 48 часов при −30 ° С.

13. Постепенное нагревание + 5 ° C / час до 20 ° C

14. Сбор образца

15. Картирование флуоресценции смолы (20x)

16. Сбор данных с высоким разрешением (режим 60X Airyscan)

Примечание: смола R221 (CryoCapCell, Франция) создает низкий фон и высокий контраст при сканирующей электронной микроскопии и, таким образом, позволяет использовать низкую концентрацию уранилацетата (0,2%) в качестве окрашивающего агента. Низкая концентрация уранила ограничивает гашение флуоресцентных зондов, присутствующих в биологическом образце.Смола R221 совместима со стандартными флуорофорами, такими как красители AlexaFluor, или флуоресцентными белками, такими как GFP и mCherry.

Примечание 2: флуоресцентные зонды, которые утратили свою активность в криогенных условиях (например, DAPI и DsRed), не были реактивированы после смолы FS (Kaufmann, Hagen, & Grünewald, 2014), в то время как другие зонды, которые видны как в криогенных условиях, так и может использоваться комнатная температура (например, DAPI можно заменить на Hoechst для окрашивания ядер) (Faoro et al., 2018; Heiligenstein et al., 2014).

Способность сохранять флуоресцентные зонды после погружения в смолу позволяет с помощью флуоресцентной визуализации оценить структурную сохранность образцов после того, как они вернутся к комнатной температуре (рис. 15), и конкретно определить интересующую область перед переходом в ЭМ. .

Рис. 15. Флуоресценция, сохраняющаяся в смоле R221 после замораживания под высоким давлением и замораживания.

Остеобласты человека (NHOst), выращенные непосредственно на необработанных носителях HPF и зафиксированные 4% PFA и 0.1% GA. Клетки были проницаемыми, затем было проведено окрашивание антителами (AE), нацеленными на клатрин (Alexa Fluor 647 B, G) и остеокальцин (Alexa Fluor 488 D, I), и дополнительные химические красители были использованы для окрашивания актина (Phalloidin, Alexa Fluor 568, C, H) и ядро ​​(DAPI E, J). Затем клетки были визуализированы на Zeiss LSM900 и заморожены с использованием HPM Live μ. Впоследствии клетки были встроены в смолу R221 с использованием замораживания. Изображения до HPF (A-E) и после HPF / FS (FJ) показывают одни и те же интересующие области в обоих условиях.Красители Alexa Fluor сохраняют свою флуоресценцию после HPF и FS, однако флуоресценция DAPI теряется после HPF и FS. Масштабные линейки A, F 200 мкм, B-J 50 мкм

iii. Корреляция флуоресценции с SEM: в сторону 3D CLEM

Перед переносом образца на SEM поверхность блока следует сгладить, удалив первый слой смолы с помощью микротомии. Обнажение поверхности приводит к увеличению детализации ЛМ (рис. 16). Однако микротомия может удалить ценные части образца (например,грамм. часть ячеек), что может привести к потере важной информации для 3D CLEM.

Рисунок 16. Соотношение флуоресцентной и растровой электронной микроскопии.

(A) Мультфильм, представляющий установку. Клетки, выросшие на носителе, залиты пластиком. После удаления носителя ячейки находятся в верхней части блока. (B-D) Клетки MLO-A5, выращенные непосредственно на носителе HPF. Клетки фиксируют 2% PFA и 0,1% GA, а затем повышают проницаемость с помощью 0,1% X-100 Triton. Клетки окрашивают антителом против остеокальцина (2 ^nd AB alexa fluor 488 нм) и фаллоидин-Alexa Fluor 568 нм для окрашивания актиновой нити.После этого клетки замораживают с использованием HPF и внедряют в R221 посредством замораживания замещения. (B) Верх блока, отображаемый с помощью флуоресцентной световой микроскопии (LM) и вторичного электронного SEM. Корреляция двух обзоров была использована в качестве первого приблизительного согласования CLEM. Белая рамка: площадь, указанная в D. Полосы: 500 мкм. (C) Интересующая область, изображенная с высоким разрешением. Размер пикселя: 0,043 x 0,043 x 0,150 мкм. Здесь изображение представляет собой 8 Z-срезов. Обратите внимание на сохранившиеся волокна актина. Столбики: 10 мкм (D) Наложение CLEM было выполнено с использованием СЭМ-изображения с отраженными электронами.Синее поле: область изображений LM с высоким разрешением, показанная в C. Желтое поле: увеличенная область справа в D. * представляет две точки привязки, используемые для создания корреляции. Следует отметить, что с помощью ЭМ визуализируется только поверхность, поэтому не все контуры ячеек видны, как в LM. Прутки: 50 мкм.

Эту проблему можно преодолеть, сначала покрывая носитель слоем гидрогеля или коллагена, создавая спейсер между носителями и клетками. При использовании этого промежуточного слоя первый слой, удаленный ультрамикротомией, будет содержать только коллаген и смолу, в то время как клетки останутся нетронутыми.Возможность наблюдать больше деталей как в LM, так и в EM улучшит корреляцию, от которой критически зависит CLEM.

Хотя первая предварительная корреляция крио-флуоресценции и визуализации SEM может быть сделана на основе визуального наблюдения морфологии клеток и других поверхностных маркеров, требуется использование специального программного обеспечения для точного определения интересующей области для корреляции (Пол -Gilloteaux et al., 2017). Кроме того, криофлуоресцентное изображение поможет согласовать прямые изображения и изображение, полученное с помощью SEM, для анализа после получения.Таким образом, мониторинг каждого шага способствует контролю качества экспериментов и, таким образом, повышает эффективность рабочего процесса визуализации и анализа с помощью ЭМ.

6. Перспективы

В этой главе мы показали, как HPF в целом и HPM live μ в частности находятся на перекрестке мультимодальных изображений, будучи центральным игроком в подготовке и сохранении образцов, что имеет решающее значение для CLEM и совместимо с все современные подходы CLEM. Комбинируя эту уникальную установку HPM Live μ, CryoCapsule и инновационную смолу для заливки (R221 ^® , CryoCapCell, Франция), можно получить полный рабочий процесс от 3D Live Cell до 3D EM CLEM, визуализируя образец с помощью флуоресценции на каждом этапе процесса.Однако некоторые проблемы все еще существуют.

Последние годы показали большую динамику в области корреляционной микроскопии и растущую потребность в различных методах световой микроскопии (живой, фиксированной, криогенной) для наблюдения биологических явлений. При разработке нашего нового микроконтроллера HPM live μ основная идея заключалась в том, чтобы напрямую связать визуализацию в реальном времени с процессом витрификации. Первой идеей было построить HPM со встроенным конфокальным микроскопом. Это имело бы два преимущества: это могло бы потенциально снизить общую стоимость системы (HPM + микроскоп), а также минимизировать общий размер комбинированной системы.Последнее по-прежнему является предметом внимания, поскольку HPM Live μ является большой системой и требует специального места для использования в оптимальных условиях. Тем не менее, обратная сторона этой стратегии будет заключаться в ограниченной гибкости встроенного микроскопа (предопределенной и трудноосуществимой с современным уровнем техники).

В последние годы HPF взял на себя центральную роль в подготовке образцов для мультимодальной визуализации, что повысило важность мониторинга и оценки качества замороженного образца.HPF часто называют простой техникой, в которой мало внимания уделяется точной, но важной информации об используемых условиях замораживания. Критические параметры, которые влияют на конечный результат качества стеклования (комбинация кривой HPF, подготовки образца и выбора носителя для образцов), обычно не хранятся для долгосрочного использования, хотя они могут значительно помочь нам оптимизировать замораживание и сохранение образцов.

По этой причине мы представили усовершенствованный графический интерфейс пользователя и высокоточные измерения для регистрации событий в камере HPF во время выстрела HPF.Мы записываем и сохраняем параметры для каждого отдельного образца, чтобы исследовать их и оптимизировать подготовку образцов. В долгосрочной перспективе эта совокупная информация станет источником знаний для лаборатории и растущего сообщества HPF. Мы предполагаем, что более точная настройка параметров HPF вместе с подготовкой образцов поможет остекловать образцы, которые до сих пор было невозможно криоиммобилизовать.

С экспериментальной точки зрения, увеличивающееся разнообразие образцов, требующих оптимального сохранения ультраструктуры, вероятно, приведет к разработке более сложных носителей образцов, позволяющих взаимодействовать с образцом при наблюдении за ним до HPF.Ограниченная функциональность алюминиевых держателей заставляет задуматься о разработке новых держателей HPF, при этом CryoCapsule является первым в своем роде.

Развитие передовой оптической микроскопии с середины 1990-х годов и недавнее возобновление интереса к электронной микроскопии с использованием крио-ЭМ открывают новую эру для CLEM. Он подчеркивает передовые методы подготовки проб, уже применяемые в этой области, и поощряет разработку новых. В этом контексте мы ожидаем возрастающего интереса к стеклованию в области световой микроскопии и растущего спроса на гибкую и хорошо управляемую заморозку под высоким давлением, подходящую как внутри, так и за пределами области электронной микроскопии.

8. Вклад авторов

XH, JH, MB, LM, FE придумали и выпустили HPM Live μ. XH, MdB, NS и AA провели эксперимент, подтверждающий принцип работы. MKtL предоставил клетки для экспериментов и провел ультрамикротомические срезы.

FS, JL, EL участвовали в интеграции микроскопа и различных связанных тестах совместимости и стабильности. JS, GR поддержали начальную интеграционную работу в Институте Кюри и предоставили технические и научные ресурсы. XH, MdB, NS и AA написали эту главу с комментариями и дополнениями всех авторов.

7. Благодарности

Эта работа — результат многолетнего сотрудничества. Среди основной поддержки мы благодарим ABRA Fluid AG, Виднау, особенно Маркуса Фрея за его техническую поддержку в разработке ядра HPM Live μ, мы выражаем признательность Nikon Imaging Center @ Institut Curie, особенно Люси Сенгманивонг. -CNRS и визуализация клеток и тканей (PICT-IBiSA), Институт Кюри, член Французской национальной исследовательской инфраструктуры France-BioImaging (ANR10-INBS-04).Люси Коллинсон и группе EM STP в Институте Фрэнсиса Крика за полезные обсуждения и комментарии по улучшению работы пользователей с HPM, а также различным инженерам Carl Zeiss, которые поддерживали техническую интеграцию системы Airyscan. Мы также хотели бы поблагодарить Катарину Вольф за предоставленные клетки фибросаркомы. MdB, NS и AA были поддержаны грантом Advanced Investigator Европейского исследовательского совета (ERC) (h3020-ERC-2017-ADV-788982-COLMIN), AA также поддерживается грантом VENI Нидерландской научной организации NWO (VI.Veni.192.094)

Восстановление камеры Cyro на Кипре

Доказано, что криотерапия помогает уменьшить воспаление, повысить уровень работоспособности и метаболизм, уменьшить хроническую боль и усталость и дать положительный импульс всему вашему телу. Давайте расширим каждый из них, чтобы лучше понять, что такое криотерапия.

Уменьшает воспаление

Прикладывали ли вы когда-нибудь пакет со льдом к травме? Если да, то вы уже испытали криотерапию в меньшем масштабе.

Криотерапия на этом уровне и использование криокапсулы ICE QUEEN Whole Body Cryo Therapy (WBCT) уменьшат все воспаления во всем вашем теле.Исцеление будет происходить в более чем одной области одновременно и будет намного эффективнее и эффективнее.

Представьте себе травму руки и ноги; Криотерапия автоматически воздействует на эти области. Криотерапия также стимулирует блуждающий нерв, что, в свою очередь, снижает беспокойство и усталость.

Блуждающий нерв — это «менеджер» вашего внутреннего нервного центра, а именно парасимпатической нервной системы.

Подобно хорошему менеджеру, блуждающий нерв выполняет фантастическую работу по надзору за широким спектром важнейших функций; включая передачу нервных импульсов каждому органу вашего тела.

Новое исследование теперь показало, что это может быть недостающее звено при лечении хронических воспалений, может ли это быть началом захватывающей новой области лечения, которая оставляет позади обычные повседневные лекарства?

Повышает уровень производительности

Скорее всего, вы знаете, что многие спортсмены регулярно используют криотерапию, поскольку лечение помогает им восстановиться после недавней активности. Поскольку сила суставов и мышц увеличивается, спортсмены могут быстрее возобновить тренировки и улучшить свои результаты после любых заболеваний.Кроме того, во время криотерапии мышцы и ткани не замерзают, поэтому можно почти сразу начать тренировку, в отличие от ледяных ванн, мышцам не нужно время для восстановления после сеанса криотерапии.

Повышенный метаболизм

Кто не хотел бы сжигать калории / худеть, просто стоя на месте в течение 2 минут?

Повышенный метаболизм — одно из главных преимуществ криотерапии. После сеанса Ледяной королевы WBCT организм сжигает огромное количество энергии, чтобы разогреться и восстановить его до нормального уровня, хотя вы не заметите этого во время простого 2-минутного сеанса WBCT или даже после него, вы, тем не менее, сгорите примерно От 500 до 800 калорий во время и после этого процесса WBCT.Это эквивалентно почти 3 часам / 18 км быстрой ходьбы для человека среднего роста!

Снижение хронической боли и усталости

Для тех, кто страдает хронической усталостью, фибромиалгией или другими общими болями в теле, криотерапия уменьшает все эти симптомы. Некоторые люди испытывают облегчение на несколько часов, в то время как другие наслаждаются облегчением, которое длится несколько дней и даже дольше. Каждый человек индивидуален, поэтому результаты будут разными, большинство участников считают, что две минуты кажущейся простуды хорошо стоят многих часов / дней / недель облегчения боли позже.Это позволяет вам начать лучше управлять своим недугом и вернуться к нормальному образу жизни. Повторение, однако, приведет к созданию, чем больше используется этот WBCT, тем дольше продлится разгрузка или восстановление.

Стоит ли пробовать криотерапию всего тела? | Wellness

Тело Лиши Уэст пережили отжим.

Как ветеран морской пехоты США и бывший боевой инструктор, она несколько раз в неделю проходила пешком 15 с лишним миль с рюкзаком весом 150 фунтов за спиной. Подошвы ее ступней покрылись волдырями, отвалились ногти, ноги затекли.«Кровь в стуле — не редкость» из-за режима тренировок, — говорит Уэст, который служил с 1998 по 2002 год. «Мое тело серьезно пострадало».

Но 45-летний мужчина, живущий в Каламазу, штат Мичиган, не остановился. Она не только работает над получением степени MBA, но и управляет собственным финансовым и страховым агентством, а также регулярно занимается поднятием тяжестей и плаванием.

И на несколько минут почти каждое утро в течение последних трех лет она почти голая ступала в камеру с отрицательной температурой 250 градусов по Фаренгейту (или холоднее).Это более чем в два раза холоднее сухого льда.

«Это лучший способ начать (день)», — говорит Уэст, который платит 169 долларов в месяц за неограниченное количество процедур, называемых криотерапией всего тела, хотя отдельные сеансы могут стоить до 100 долларов в некоторых районах страны. Зачем? Первоначально, чтобы облегчить боль в спине и ригидность мышц после восторженных отзывов от ее профессиональных клиентов-спортсменов. Но Уэст продолжила лечение, потому что она считает, что они приносят пользу, включая больше энергии и внимания, ускоренный метаболизм, улучшенную переносимость холода и боли, более быстро растущие волосы и ногти, более молодую кожу и более здоровый сон.«Я действительно чувствую разницу … когда пропускаю несколько дней», — говорит она.

Криотерапия всего тела, что по сути означает «лечение холодом», — это процедура, при которой тело подвергается воздействию температур ниже отрицательных 200 градусов по Фаренгейту в течение двух-четырех минут. Хотя он использовался для лечения таких состояний, как рассеянный склероз и ревматоидный артрит в Японии с конца 1970-х годов, он использовался только в западных странах в течение последних нескольких десятилетий, в первую очередь для облегчения мышечной боли у элитных спортсменов, согласно Кокрановскому обзору 2015 года. четыре исследования.

Но теперь спа, тренажерные залы и криотерапевтические учреждения рекламируют преимущества, включая потерю веса, более молодую кожу, лучшее настроение, больше энергии и многое другое — несмотря на то, что это не регулируется Управлением по контролю за продуктами и лекарствами США. Даже Cryohealthcare, компания, производящая оборудование для криотерапии, отмечает, что терапия «предназначена для дополнения программ оздоровления и хорошего самочувствия, без лечения каких-либо медицинских заболеваний, расстройств или болезней».

«Хотя кажется, что это может дать некоторые положительные результаты, это не похоже на прорыв в технологической инновации, которая изменит медицину», — говорит д-р.Халли Цвибель, директор по спортивной медицине Колледжа остеопатической медицины Нью-Йоркского технологического института на Лонг-Айленде. «На данный момент это похоже на дополнительный тип лечения».

Чего можно ожидать от сеанса криотерапии?

В зависимости от учреждения вам могут выдать перчатки, носки, тапочки, маску для лица, наушники, нижнее белье или все вышеперечисленное для защиты чувствительной кожи перед входом в камеру криотерапии. По словам Уэста, хотя сразу становится холодно, время летит незаметно.«У вас будет дрожь; у вас не будет ощущения, что вы замерзли», — говорит она, отмечая, что средство просто проникает через кожу, поэтому органы остаются в безопасности. К тому же, добавляет она, «в любой момент можно открыть дверь, чтобы выйти».

Возможные преимущества криотерапии

Предполагаемые преимущества криотерапии включают:

• Обезболивание мышц и суставов
• Похудание
• Более молодая кожа
• Лучшее настроение и бодрость

Обезболивающее для мышц и суставов

Если вам когда-либо приходилось замораживать скрученную лодыжку или болели плечи, значит, вы лечили себя эффективной формой криотерапии.Прикладывать холод к травме на 15 минут три-четыре раза в день «очень эффективно», — говорит Джон Шрайнер, сотрудник Американского колледжа спортивной медицины, базирующийся в Мичигане. Но польза от этого для всего тела менее очевидна.

Один из обзоров исследований спортсменов, опубликованный в Международном журнале спортивной медицины за 2017 год, например, предполагает, что криотерапия может быть эффективной для уменьшения мышечной боли, воспаления и повреждения клеток. Исследования также показали, что у спортсменов может возникнуть ощущение, что они быстрее восстанавливаются, когда они используют криотерапию, «что важно», — говорит Цвибель.Тем не менее, исследования недостаточно надежны, чтобы определить, как долго, как часто и при каких температурах криотерапия может работать лучше всего, если вообще работает.

Теория, лежащая в основе криотерапии для похудания, заключается в том, что низкие температуры заставляют ваше тело усердно работать, то есть сжигать калории, чтобы оставаться в тепле. В криотерапевтических курортах утверждается, что за один сеанс сжигаются сотни калорий, а повторное использование может повысить ваш метаболизм, помогая сжигать больше калорий в течение всего дня.

Запад, например, замечает разницу в ее терпимости к погоде Мичигана.«Мой метаболизм увеличился, поэтому я не простужаюсь», — говорит она.

Но на самом деле есть способы похудеть лучше. «Холод действительно ускоряет обмен веществ, пытаясь согреть тело», но продавать это как терапию для похудания — непростая задача, — говорит Шрайнер. По словам Сьюзан Альберс, психолога из клиники Кливленда, которая специализируется на проблемах с питанием и похудании, для лучшего похудания вам, вероятно, придется изменить свои пищевые привычки. «(Криотерапия всего тела) — это трехминутная процедура, и мы всегда ищем ее, чтобы решить наши проблемы простым способом», — говорит она.«Так не работает».

Уэст говорит, что с тех пор, как она начала регулярные процедуры криотерапии всего тела, ее кожа выглядит лучше, чем за долгое время. «На это уходит много лет», — говорит она.

Но доктор Мари Джин, дерматолог из Сан-Франциско, не предлагает людям, ищущим источник молодости, вкладывать в него свои деньги. «Снижение температуры помогает уменьшить воспаление, поэтому часто люди считают, что уменьшение воспаления может помочь с множеством… воспалительных проблем или проблем с кожей», — говорит она.«Но это недолго».

Лучше делать то, что, как известно, работает: защищать кожу от солнца, не курить и проконсультироваться с дерматологом по поводу одобренных FDA методов лечения, таких как рецептурные препараты для местного применения или кожные наполнители. «Нет ничего, что могло бы помочь в борьбе со старением», — говорит Джин, отмечая, что это зависит от состояния вашей кожи и от того, сколько вы хотите потратить. «Речь идет о том, чтобы быть здоровым, избегать вещей, которые вредны для здоровья, и проводить процедуры, полезные для вашей кожи».

Для Уэста выход из камеры криотерапии вызывает «чувство очень эйфории», — говорит она.Ведь она выжила! Но хотя процедура может временно улучшить ваше настроение и уровень энергии, большинство исследований, посвященных тому, может ли она помочь в лечении психических заболеваний, недостаточно сильны и недостаточно масштабны, чтобы делать выводы, говорит Альберс.

«Теория, лежащая в основе этого, заключается в том, что он высвобождает эндорфины и ваш естественный адреналин, и он заставляет вашу кровь течь по всему телу, что может быть полезно для людей, которые испытывают тревогу и депрессию», — говорит она. «Но я не уверен, как долго [это сработает].«

Плюс ко всему, тревога и депрессия — сложные состояния, которые лучше всего лечит специалист по психическому здоровью, — говорит Альберс. Конечно, никто не мешает вам делать и то, и другое». Любой вид [альтернативной] терапии, подобной этой … часто является хорошим дополнением к некоторым традиционным вещам, которые вы делаете, — говорит она. — Это может быть другой взгляд на это — сочетание с другими методами лечения ».

Безопасна ли криотерапия всего тела ?

Криотерапия не безопасно для всех.Лечение не следует использовать беременным женщинам или людям с различными заболеваниями, включая тяжелую гипертонию и различные проблемы с сердцем, предупреждает Cryohealthcare. Детям до 18 лет требуется согласие родителей.

Цвибель отмечает, что люди с аллергией на холод или нервными расстройствами, такими как невропатия, могут ухудшить свое состояние, если попробуют криотерапию. И хотя лечение кажется безопасным при правильном применении (например, короткими струями, под наблюдением и без мокрой одежды, которая может замерзнуть и вызвать обморожение), оно может вызвать раздражение кожи, подобное ветровому ожогу или, в редких случаях, даже быть фатальным: лечение привлекло внимание общественности в 2015 году, когда сотрудник криотерапевтического спа-салона умер, войдя в камеру без присмотра, и так и не вышел.Совсем недавно женщина из Нью-Йорка подала в суд на свой тренажерный зал и криотерапевтическую компанию после того, как после процедуры у нее остались, по ее словам, необратимые рубцы. Поскольку процедура не регулируется FDA, вам придется проявить должную осмотрительность, чтобы найти объект, если таковой имеется, которому вы доверяете.

«Это могло быть правильным для некоторых людей, — говорит Цвибель, — и определенно могло быть неправильным для некоторых людей — это важно».

Преимущества криотерапии: 5 причин посетить

Криокапсулы не являются камерами для полного замораживания человека, как в Футураме.Несмотря на то, что в обоих случаях используется жидкий азот, криокапсулы предназначены для кратковременного воздействия сильного холода на организм. Вся процедура длится не более двух минут, в течение которых температура в камере падает до 284 ° F, не проникая в тело.

Воздействие на верхние слои кожи плодотворно влияет на нормализацию многих биологических процессов. Ниже вы можете найти пять причин попробовать криокапсулы на себе.

1.У вас лишний вес

Причины лишнего веса могут быть разными, как и способы борьбы с ним. Кто-то потеет в спортзалах, кто-то изнуряет себя строгими диетами, а кто-то даже лежит под скальпелем. Однако есть альтернативный способ — похудание с помощью криотерапии. Эффективность этого безболезненного и простого метода обусловлена ​​реакцией организма на резкое изменение температуры.

Поверхностные сосуды кожи сужаются, внутри тела накапливается тепло, увеличивается приток крови к внутренним органам, что в сочетании с контролируемой стрессовой ситуацией для организма вызывает сжигание жира.Этот процесс также стимулирует переход белого жира в коричневый. В среднем за 15 сеансов сжигается около 3 кг лишнего жира. Это довольно впечатляющий результат, который достигается без физических усилий в общей сложности за 30 минут!

2. У вас высокий уровень стресса

Внешние и внутренние стрессовые факторы со временем подрывают нервную систему, и это действительно усложняет жизнь, но криотерапия (1) может помочь в этом. Под воздействием низких температур происходит мощный выброс эндорфинов, ослабляющих действие стрессовых факторов.В результате в организме вырабатывается собственная защитная реакция, которая помогает сохранять спокойствие даже в экстремальных ситуациях. Исчезает бессонница, проходят хроническая усталость, чрезмерная раздражительность, различные навязчивые мысли.

Прочтите: Йога для управления стрессом

3. Вы часто болеете

Неожиданная простуда, которая регулярно возвращается, является явным признаком ослабленной иммунной системы. Восстановить его можно разными способами, от употребления свежих фруктов до лекарств.Но существует способ сделать это без лекарств. В отличие от обычной вакцинации, криотерапия использует только внутренние ресурсы вашего организма.

Развитый иммунитет убережет вас от самых разных инфекционных вирусов и бактерий. Кратковременное и резкое охлаждение заставляет организм активировать собственные «спящие» резервы, проводить полную самодиагностику всех систем и запускать гормональную реакцию для полного баланса организма.

4. У вас болят суставы

Чрезвычайно низкие температуры стимулируют лимфатический и венозный отток, уменьшая отек и улучшая кровообращение.Это способствует укреплению опорно-двигательного аппарата и суставов, запускает восстановительные процессы. Регулярное посещение криопрепаратов позволит лечить такие заболевания, как артрит, артроз и остеопороз.

Всего 10-15 сеансов и пациент надолго забывает о резких болях в коленях и дискомфорте в суставах. Криотерапия показана не только пациентам, но и абсолютно здоровым людям, так как исключает риск самого заболевания.

Читать: Успокоить боль в мышцах без таблеток

5.У вас проблемы с кожей

Это относится к людям с такими заболеваниями, как псориаз, экзема, эритроцитоз и атопический дерматит. Более низкая температура увеличивает кровоток и лучше насыщает клетки кожи, запуская регенеративные процессы. Курс криотерапии делает кожу молодой и подтянутой, устраняет сухость и шелушение, способствует выработке коллагена, повышает ее эластичность, снимает отечность, воспаление и зуд.

Следует отметить, что зоны, особо чувствительные к холоду, защищены.К ним относятся ступни и руки. Лицо при этом «выглядывает» из капсулы через специальное окошко, необходимое для безопасного дыхания. Польза для здоровья от криотерапии имеет системный эффект, и лицо тоже получает пользу, даже не касаясь холода.

Криотехника для микроскопических образцов получает финансирование

HPM Light µ [Изображение любезно предоставлено CryoCapCell]

CryoCapCell (Париж) заявила во вторник, что она собрала 1,5 миллиона евро (1,6 миллиона долларов) из фонда начального капитала компании Seventure Partners Quadrivium 1.

Деньги пойдут на технологию CryoCapCell для замораживания образцов живых тканей посредством сверхбыстрой витрификации (или криогенизации) под высоким давлением, предотвращающей изменение биологических структур. Цель состоит в том, чтобы изначально использовать эту технологию для электронной микроскопии исследования рака.

«Технология стеклования под высоким давлением в сочетании с оптической микроскопией, разработанная CryoCapCell, является поистине революционной инновацией: она позволит ученым лучше исследовать живые образцы, открывая тем самым совершенно новые области исследований и применения, которые могут оказать значительное влияние на исследование и разработка биологических структур », — сказал в пресс-релизе Филипп Трамой, директор по инвестициям фонда посевного капитала Quadrivium 1 компании Seventure Partners.

Использование корреляционной микроскопии в исследовательских лабораториях приведет к лучшему пониманию взаимосвязи между биологическими структурами и их функцией. По словам представителей CryoCapCell, полученные результаты могут оказаться незаменимыми при изучении опухолей.

«В борьбе с раком понимание живой ткани требует динамических наблюдений с высоким разрешением на разных уровнях», — сказал Ксавье Хейлигенштейн, соучредитель CryoCapCell.

«Чтобы помочь установить точную взаимосвязь между морфологией и функцией клеток, наша технология витрификации под высоким давлением в сочетании с инструментами динамического наблюдения становится центральным элементом в анализе биологических механизмов, лежащих в основе раковых заболеваний.Наша технология позволяет наблюдать биологическое событие в реальном времени с помощью фотонного микроскопа с последующим стеклованием образца менее чем за две секунды », — сказал Хейлигенштейн.

Институт Кюри и Arts et Metier поддержал разработку технологии защиты конфиденциальности CryoCapCell, которая также выиграла от прочной промышленной сети в регионе Клермон-Ферран.

Созданная в 2011 году, CryoCapsule может выполнять весь рабочий процесс корреляционной микроскопии посредством стеклования и замораживания под высоким давлением.Благодаря сотрудничеству с ABRA Flui, первоначальным разработчиком HPM010, CryoCapsule в прошлом году выпустила то, что, как сообщается, является первым морозильным аппаратом высокого давления, связанным с инвертированным микроскопом: HPM Light µ.

[Хотите оставаться в курсе содержания MDO? Подпишитесь на нашу еженедельную электронную рассылку новостей. ]

.