Рубрика

Козье молоко при раке: Козье молоко при онкологии: можно ли пить, польза

Содержание

Медики рассказали, какой вид молока может предотвратить рак

Для лечения рака молочной железы, меланомы, рака толстой кишки, рака легких применяется козье молоко.

Но не следует забывать, что оно полностью противопоказано при раке простаты, раке мочевого пузыря, пишет Hyser.

Известно, что козье молоко имеет в своем составе полезные свойства, хотя оно довольно низкокалорийно - всего 70 Ккал на 100 мл. Зато показатели его жирности равны до 5,4%.

Группа ученых при Университете Лунд в Шведции провела исследование по воздействию козьего молока на рак. Результаты были опубликованы в официальном издании Американского научного сообщества по диетологии.

В ходе исследования, ученым удалось подтвердить, что белок козьего молока, к примеру при раке прямой кишки, значительно замедляет процесс метастазирования и препятствует распространению раковых клеток по организму.

Козье молоко просто незаменимо в рационе питания ребенка.

Свежевыдоенное козье молоко обладает мощной бактерицидной активностью, благодаря чему не скисает значительно дольше коровьего даже при комнатной температуре (в тепле оно сохраняет свежесть до 3 дней, в холодильнике - больше 7). Сразу после доения необходимо процедить и охладить козье молоко. Польза и вред его для организма человека хорошо изучены:

Козье молоко способствует росту иммунитета против инфекционных заболеваний за счет высокого содержания линолевой и линоленовой ненасыщенных жирных кислот. Это же приводит к нормализации обмена холестерина и производит антиатеросклеротическое действие.

Небольшое, по сравнению с коровьим молоком, количество оротовой кислоты предотвращает развитие синдрома ожирения печени.

Козье молоко отлично справляется с расстройствами кишечника и повышенной кислотностью пищеварительного сока. Лизоцим помогает снять воспаление слизистой оболочки и способствует восстановлению ее целостности. Эти особенности важны для использования продукта в профилактике и лечении гастритов, язвы желудка и двенадцатиперстной кишки.

В любых случаях дефицита кальция и нарушениях его усвоения козье молоко оказывает существенную помощь. Оно снижает риск развития рахита у грудных детей и остеопороза у пожилых, облегчает процесс восстановления после травм, переломов и растяжений.

Большие количества витамина B12 нормализуют обмен веществ и кроветворение, обилие калия полезно для работы сердца и сосудов.

Популярные новости сейчас Показать еще

Ранее Стена писала о том, что в МОЗ рассказали, какие лекарства для украинцев будут выдаваться бесплатно.

Также Стена сообщала, что медики дали советы, как и чем накормить ребенка в жару.

Напомним, что в коровьем молоке и мясе новые патогены, связанные с развитием рака.

Читайте Ukrainianwall.com в:

Козье молоко при раке желудка, легких, молочной железы

Доброе время суток! Меня зовут Халисат Сулейманова - я фитотерапевт. В 28 лет себя вылечила от рака матки травами (больше про мой опыт выздоровления и почему я стала фитотерапевтом читайте здесь: Моя история). Перед тем как лечиться по народным методам описанным в интернете, просьба, консультируйтесь со специалистом и лечащим врачом! Это сэкономит ваше время и деньги, поскольку заболевания разные, травы и методы лечения разные, а есть еще сопутствующие заболевания, противопоказания, осложнения и так далее. Пока добавить нечего, но если Вам нужна помощь в подборе трав и методик лечения, можете меня найти вот по контактам:

Халисат Сулейманова

Страничка Instagram: instagram.com/fitoterapevt1

Телефон:  8 918 843 47 72

Почта: [email protected]

Консультирую бесплатно.

Письмо читателя:

Здравствуйте, Халисат.
Хотелось бы получить у Вас консультацию.
Как писала я Вам вчера, у мое мамы рак легких 4 степени. Лечимся уже 4 год. Врачи сказали что еще один курс химиотерапии она не выдержит, так как слишком сильно ослаб организм. Посоветовали уехать в деревню на свежий воздух, пить козье молоко и больше есть фруктов и ягод.
Хотим попробовать попить АДС-2 или настойку зеленых грецких орехов на керосине, не знаем что лучше. Дайте совет, пожалуйста!

Молочные продукты очень полезны для нормальной деятельности организма. Многие говорят о том, что использование козьего молока при раке не только избавит от данного заболевания, но и поможет укрепить защитные силы организма. В сравнении с коровьим молоком оно имеет в своем составе большее количество полиненасыщенных жирных кислот. Его часто рекомендуют использовать тем, у кого есть проблемы с усваиванием лактозы.

Полезные свойства

Помимо низкой алергенности в нем есть и линолиновая кислота, триглицериды. Благодаря своему составу молоко:

  • обеспечивает непосредственное прямое поступление в организм энергии;
  • препятствует откладыванию жира в тканях;
  • способно снижать уровень холестерина в крови и сосудах.
  • олигосахариды оказывают противовоспалительное влияние на ЖКТ.

Многие ученные говорят о том, что козье молоко при раке желудка очень полезно, так как нормализует работу пищеварительной системы, а также способствует нормальному продуцированию ферментов.

В нем также есть антимикробные и антитромбические пептиды. Это препятствует образованию тромбов. Оно способно быстро выводить токсины, оказывать антиоксидантный эффект, не вызывает аллергических реакций. Кроме того в нем есть свободный таурин.

Рак и молоко

Особенно ценным считают молочный жир. Жирные кислоты, которые входят в состав, помогают тормозить развитие рака. Есть много сведений о том, что козье молоко помогает от рака. Согласно некоторым отчетам об исследованиях капроновая, каприновая и каприловая кислоты тормозят развитие раковых клеток, угнетают рост и развитие быстрорастущих клеток.

Онкология молочной железы

Очень часто женщины страдают от данного заболевания. Причины его возникновения могут быть различные. Врачи рекомендуют проводить оперативное хирургическое вмешательство для решения данной проблемы. Но не стоит особо спешить, можно попытаться воспользоваться средствами народной медицины. Много есть положительных отзывов об использовании продукта козьей жизнедеятельности. Для лечения можно использовать такой рецепт.

Возьмите стакан веточек молодого вишневого дерева и залейте их 2 л козьего молока. Поместите все на плиту и томите на протяжении 6 часов на медленном огне. Пить нужно по ½ стакана трижды в день между приемами пищи. Длительность лечения – 70 дней.

Простые способы лечения сложных заболеваний:

Онкология легких

Многие считают, что это заболевание в основном поражает тех, кто курит. Да, это один из факторов, который провоцирует его возникновение, но он не всегда является решающим. Многие врачи не раз заявляли о том, что применение козьего молока при раке легких оказывает положительное влияние. Это связывают и с тем, что наличие полезных веществ помогает связывать и выводить скопившиеся смолистые вещества.

В данном случае рекомендуют использовать следующее средство. Возьмите столовую ложку лапчатки гусиной и залейте стаканом козьего молока. Прокипятите на слабом огне на протяжении 5 минут. После процедите и принимайте по ½ — 1 стакану 2-4 раза в день.

Не будет лишним и то, если Вы ежедневно будете выпивать по 200 мл чистого молока. Это поможет не только восполнить дефицит кальция, но и нормализовать функционирование всего организма и его систем.

Онкология предстательной железы

Все мужчины после 40 лет, а в последние годы и раньше, могут испытывать некий дискомфорт в плане мочеполовой системы. Они не решаются заговорить об этом и терпят до последнего, а это порой может привести к негативным последствиям. Одно из них рак простаты. Лечение его достаточно непростое и чаще всего заканчивается проведением хирургической операции. Но многие лекари говорят о пользе козьего молозива при раке простаты.

Но помимо такого чудодейственного влияния врачи еще говорят о том, что ежедневное выпивание ¼ л данного продукта поможет повысить выносливость мужского организма, что приведет к возможности наслаждаться интимной близостью более длительное время. Помимо этого оно снижает нагрузку на сердечную мышцу, которая возникает во время полового акта.

Некоторые советуют проводить клизмы с молозивом данного животного. Для этого стоит развести небольшое количество в воде. Соотношение 1:4. Далее немного подогрейте и вводите в прямую кишку. Немного постарайтесь подержать его в середине.

Соедините эту процедуру с внутренним приемом молока и результат должен Вас порадовать.

Помните, что перед началом приема нужно проконсультироваться с врачом.

Здоровья Вам!

Полезные статьи:

Рак груди: история одной победы

Свой диагноз Наталья узнала, когда ей было чуть за сорок. Дочь - студентка, сын - школьник, у самой - ответственная работа главным инженером на предприятии, руководство пятью цехами. Когда из-за плохого самочувствия пришлось оставить работу, она была уверена, что отдохнет дома пару месяцев и вернется в строй. Но здоровье не позволило. Лечение, которое назначали, не приносило улучшения. Дошло до того, что женщина не могла встать с постели.

На очередном обследовании груди врач поставил диагноз "мастопатия", который достаточно распространен и не насторожил нашу героиню. Женщина полностью доверилась врачу, который не назначил никакого лечения, а попросил "показаться через год". Этот поход к врачу так и не состоялся...

В июле 2003 года Наталья Николаевна обнаружила на правой молочной железе уплотнение размером в грецкий орех.

"Это были выходные. Я еле пережила субботу и воскресенье, чтобы в понедельник пойти в больницу", - вспоминает женщина.

УЗИ подтвердило худшие опасения - врачи обнаружили рак груди в четвертой стадии.

"Не описать словами, какое у меня было тогда ощущение, как будто полусон, полубред. Ты находишься в таком оцепенении, что у тебя нет сил ни жить, ни тем более бороться", - говорит Наталья Николаевна.

Борьба за жизнь

Семь лет Наталья Шестакова прожила на одних таблетках, между домом и больницей. Депрессия подтолкнула ее даже купить заранее одежду для собственных похорон, но позднее она ее сожгла.

Женщина считает, что жива только благодаря любимому мужу и детям. Они постоянно одергивали ее, встряхивали и заставляли бороться.

Повезло ей и в том, что она смогла принять участие в клинических исследованиях нового препарата, который еще не был разрешен к обращению в России.

"У меня была высокоагрессивная форма рака молочной железы. Если ее не лечить новыми препаратами, то люди сгорают буквально за несколько месяцев", - говорит Шестакова.

По ее словам, обследование в российском онкологическом научном центре имени Блохина РАМН показало, что жить ей осталось месяца три. Оперировать не было смысла, потому что обнаружили метастазы в печени, в подмышечной области. Оставался последний шанс - это химиотерапия.

"Никто ничего не обещал, никто ничего не гарантировал. Я согласилась, другого выхода не было" - вспоминает собеседница.

За два с половиной года Наталья Николаевна прошла множество процедур облучения и сеансов химиотерапии.

"После двух с половиной лет интенсивного лечения, которые дались, мягко говоря, нелегко, мне на очередном обследовании сказали, что злокачественных образований не обнаружено. Я просто боялась в это верить", - признается наша героиня.

Не теряйте веры

После 25 лет супружеской жизни, когда болезнь Натальи была еще в самом начале, они вместе с мужем решили обвенчаться. По ее словам, решение было продуманным, но никак не связанным с надеждами на исцеление. Однако семья Шестаковых не исключает, что и это тоже помогло.

"У нас была серебряная свадьба, и мы решили это дело приурочить. Я тогда уже болела, была на венчании в парике. Дочь помогла с организацией таинства: нашла храм, договорилась с батюшкой", - говорит Наталья Николаевна.

Она также вспоминает добрым словом свою личную козу, которую завела, когда во время болезни перебралась жить из Москвы на дачу. По словам Натальи Шестаковой, козье молоко повышает иммунитет, очищает печень и кровь. За 2,5 года химиотерапии, у женщины два раза был плохой анализ.

Сегодня Наталья Шестакова, пережившая все этапы болезни и выздоровления, возглавляет координационный совет "Движения против рака", которое объединяет больных и членов их семей. Филиалы организации работают в 15 регионах России. Их основная задача - обеспечить доступность инновационных лекарств для больных раком, особенно для молодых женщин.

При организации работает школа пациентов, где они делятся своим мнением и опытом, для них читают лекции профессиональные онкологи, которые доступным языком объясняют, что это за болезнь и как с ней бороться.

Наталья Шестакова желает всем, кому когда-либо приходится сталкиваться с онкологией, не отчаиваться, не опускать руки. Она уверена, что за жизнь можно и нужно бороться.

Противораковые свойства козьего молока, противопоказания при раке

Общие сведения о козьем молоке, отличие от коровьего молока.

В сравнении с коровьим молоком, козье молоко имеет большее количество омега 3 и омега 6 полиненасыщенных жирных кислот, большее количество конъюгированной линолевой кислоты, большее количество триглицеридов со средней и короткой цепью и липопротеинлипазы, а также низкое содержание лактозы.

В силу своего состава козье молоко имеет уникальную способность обеспечить  прямое поступление энергии в организм, вместо откладывания жира в жировых тканях, как у коровьего молока. Кроме того жирные кислоты козьего молока снижают уровень холестерина в сыворотке крови и сосудах, обеспечивая профилактику сердечно-сосудистых заболеваний.

Дополнительно можно указать на то, что олигосахариды козьего молока изначально имеют противовоспалительную функцию на ЖКТ, особенно на толстый кишечник, а кислотная среда от козьего молока создает менее плотный пищевой кластер, по сравнению с коровьим молоком.

Козье молоко содержит множество антимикробных и антитромбических пептидов, препятствующих слипанию тромбоцитов и образованию тромбозов в сосудистой сети.

Козье молоко содержит большое количество высокоусвояимого витамина А, практически нет каротина, что делает молоко и масло из козьего молока более белым и легкоусвояимым.  Большое количество калия, кальция, селена, фосфора, и меди, оказывает козьему молоку разносторонний положительный эффект на здоровье.

Научно доказано, что свежее сырое козье молоко имеет сильный антиоксидантный эффект, в сравнении с пастеризованным молоком, потому что содержит большие уровни фенола (галльской кислоты) и флавоноидов.

Употребление козьего молока не дает аллергических реакций, т.к. в отличие от коровьего молока не содержит аллергичный альфа-1s-казеин, что делает его необходимым продуктом для маленьких и пожилых людей с аллергией на коровье молоко. Низкое, по сравнению с коровьим содержание трудноусвояимого казеинового белка позволяет использовать козье молоко при лечении заболеваний ЖКТ (язва желудка, колит, запор, понос), кожных заболеваний (дерматиты, экзема, псориаз), нервных заболеваний (бессонница, астма) и др.

Козье молоко содержит свободный таурин, серосодержащую кислоту, которая является стимулятором роста, нейронной активности, регулятором роста костной ткани, лечения жировой дистрофии печени у детей, профилактике сердечно-сосудистых заболеваний.

Противораковые свойства козьего молока и противопоказания при раке.

Особенную ценность представляет молочный жир козьего молока (не путать с жирностью молока, маслом количество которого около 80%, а молочного жира в нем около 20%). Жирные кислоты козьего молока, например линолевая и альфа-линоленовая кислота, капроновая, каприловая, лауриновая, миристиновая, пальмитированная, эфирные липиды, гликосфинголипиды и др., которые тормозят развитие рака кожи, в том числе и злокачественной меланомы, рака легких, рака молочной железы, рака толстого кишечника.  В амбулаторных условиях продемонстрированно снижение пролиферативного действия прямой и ободочной кишки.

ОСТОРОЖНО! Согласно научным исследованиям каприновая, капроновая и каприловая жирные кислоты тормозят значительно (более 60-70%) развитие рака толстой кишки, рака кожи, рака молочной железы, а также угнетают рост других быстрорастущих клеток, например нормальных, здоровых клеток толстого кишечника, до 30%, при введении этих кислот в организм в больших количествах. Кроме того жирные кислоты повышают риск возникновения рака поджелудочной железы, поэтому козье молоко противопоказано больным с заболеваниями поджелудочной железы (например, панкреатит, камни в желчном пузыре). С осторожностью нужно относиться к приему козьего молока при раке простаты и раке почки, — жирные кислоты могут простимулировать эти виды рака. Также нужно помнить, что большое количество активного кальция в молочных продуктах и особенно в козьем молоке снижает циркуляцию гормонально активного витамина D3 ( дигидроксивитамина D3), снижая таким образом риск развития рака толстого кишечника, но стимулируя развитие рака простаты. Еще, помните, что в козьем молоке очень мало железа и почти нет фолиевой кислоты, что со временем вызывает или усугубляет железодефицитную анемию, вызывая миелопролиферативный синдром, т.е. риск развития острого лейкоз. 

Цветков Сергей Иванович, врач-онколог, Новосибирск.

Молоко поможет в борьбе с раком желудка

Китайские ученые обнаружили, что фрагмент пептида, выделенный из коровьего молока, имеет мощную противоопухолевую активность против клеток карциномы желудка. По их мнению, эти данные могут лечь в основу разработки нового терапевтического препарата для лечения рака желудка. Результаты проведенного исследования опубликованы в журнале Journal of Dairy Science.

Китайские ученые из Иланьского университета на Тайване обнаружили, что фрагмент пептида, выделенный из коровьего молока, имеет мощную противоопухолевую активность против клеток карциномы желудка. По их мнению, эти данные могут лечь в основу разработки нового терапевтического препарата для лечения рака желудка. Результаты проведенного исследования опубликованы в журнале Journal of Dairy Science.

Рак желудка – это злокачественная опухоль, растущая из эпителиальных клеток слизистой (внутренней) оболочки желудка. По данным ВОЗ, от рака желудка в мире ежегодно погибает до 800 тысяч человек. В большинстве случаев опухоль диагностируется уже на поздних стадиях, и в этом случае общая пятилетняя выживаемость пациентов составляет всего 15 %.

В настоящее время основным и практически единственным методом лечения рака желудка является хирургическая операция – частичное или полное удаление органа, а также химиотерапия и лучевая терапия, имеющие лишь вспомогательное значение. В связи с этим, отмечают исследователи, требуются новые терапевтические стратегии для улучшения прогноза заболевания и качества жизни больных.

В своем исследовании ученые изучили воздействие трех пептидных фрагментов, выделенных из лактоферрицина B – молочного белка, имеющего антимикробные, противовирусные и иммуномодуляторные  свойства.

Также лактоферрицин обладает антиканцерогенной активностью против клеток фиброкарциномы, меланомы, лейкемии и кишечной карциномы, причем эффективная концентрация данного протеина, подавляющая опухоль, не влияет на здоровые ткани. Лактоферрицин атакует больную клетку, связываясь с ассиметрично ориентированными молекулами на ее мембране, после чего активирует механизм ее самоликвидации (апоптоз).

Исследования ученых in vitro показали, что один из фрагментов молочного белка – лактоферрицин B25 (LFcinB25) – оказался способен снижать выживаемость человеческих клеток аденокарциномы желудка в зависимости от дозировки и времени воздействия на линии клеток.

Спустя час после добавления лактоферрицина B25 к культуре клеток аденокарциномы желудка LFcinB25 связался с их поверхностью, а спустя сутки раковые клетки сократились в размере и утратили способность удерживаться на поверхности. Помимо этого, на раннем этапе воздействия LFcinB25 смог снизить жизнеспособность клеток посредством апоптоза и аутофагии (самопереваривания).

По словам ведущего автора исследования Вэй Чжун Чена (Wei Jung Chen), полученные данные свидетельствуют о большом терапевтическом потенциале лактоферрицина B25, на основе которого можно создать новый противоопухолевый препарат с химиотерапевтическими свойствами для лечения рака желудка.

Козье молоко при онкологии легких

О пользе данной жидкости известно многое. Его часто используют как средство для лечения многих заболеваний. Полезно также козье молоко при раке легких. В его составе находится большое количество омега 3 и 6 кислот. Его часто рекомендуют использовать детям, так как оно содержит небольшое количество лактозы.

 

Купить курс лечения онкологии легких

 

Полезные свойства

Этот продукт обладает целым рядом полезных свойств для человеческого организма:

 

  • Молоко богато линолевой кислотой, триглицеридами и липопротеинлипазой. Оно дает возможность попадать энергии напрямую в организм, а не откладываться жиру в жировых тканях.
  • Оно помогает снизить уровень холестерина в крови, тем самым производя профилактику сердечно-сосудистых заболеваний.
  • Наличие полисахаридов помогает оказать противовоспалительное действие на ЖКТ.
  • Некоторые другие компоненты провоцируют использование молока от рака легких. Оно разрушительно действует на онкоклетки и замедляет рост самого образования.
  • А вот кислотная среда образует менее плотный пищевой кластер.
  • В составе находятся и антитромботические или антимикробные пептиды.
  • Есть также легко усваиваемый витамин А. Он обладает и способностью выводить из организма токсины.

Употребление его не вызывает аллергических реакций, потому что в нем отсутствует специфический белок. Это делает его незаменимым для маленьких детей и аллергиков.

 

 

Козий продукт против онкологии

Есть много сведений о том, что данное вещество положительно влияет на устранение образований. Особенную пользу в данном случае оказывают жирные кислоты. Именно они способны блокировать развитие и распространение образования. Не стоит забывать еще и о том, что козье молоко при онкологии легких может выводить из данного органа скопившиеся там вредные вещества. Особенно это характерно для тех, кто имеет такую вредную привычку как курение. Оно поможет вывести смолистые вещества и очистить дыхательную систему.

Многие ученные говорят о том, что за сутки стоит выпивать около полу литра. Желательно разбить это количество на несколько приемов. Еще лучше эффект можно получить, если его немного подогреть перед употреблением.

Но не смотря на все положительные качества есть и мнение о том, что его не стоит употреблять больным онкологией. Некоторые ученые придерживаются размышления о том, что помимо угнетения роста поврежденных клеток, происходит угнетение и прочих быстрорастущих клеток. Именно поэтому дать ответ на вопрос можно или нет козье молоко при раке легких, никто однозначно не может. Так что принимать решение придется именно Вам.

Диета при химиотерапии онкологических заболеваний

Химиотерапия – это серьезное испытание для всего организма, ведь вместе с быстрорастущими раковыми клетками она нередко губит еще и быстрорастущие здоровые клетки организма (например, волосяные фолликулы и т.д.). Питание во время химиотерапии играет довольно серьезную роль, ведь оно способствует поддержанию здорового состояния организма.

Питание при химиотерапии

Не забывайте о том, какое разрушительное действие несет химиотерапия, и диета может спасти ваш организм от нежелательных явлений. Прежде всего, организуйте для себя сбалансированное питание, которое поможет вам преодолеть все невзгоды. В него обязательно должны входить:

  1. Овощи, ягоды и фрукты. Организуйте себе, по крайней мере, два перекуса в день, в которые вы будете употреблять в пищу именно фрукты, а овощами гарнируйте каждое мясное блюдо. Эти продукты полезны и в свежем, и в печеном, и в паровом виде. Обилие фруктов в рационе позволит организму получать силы и энергию, отчего вы будете чувствовать себя лучше.
  2. Курица, рыба, мясо, яйца. Очень важно включить в рацион достаточное количество качественного белка, который можно получать из этой группы продуктов. Кроме белков животного происхождения, прекрасно подойдут и те, что имеют растительное происхождение – это, прежде всего, все бобовые, грибы, орехи, гречневая крупа и ржаные изделия. Из-за лечения многие пациенты ощущают смену вкусовых ощущений, и не все готовы есть мясо. Если оно больше не нравится вам, можно попробовать кушать его с большим количеством различных ароматных и неострых специй. Впрочем, можно заменить его морепродуктами или другими источниками протеина.
  3. Хлеб и каши. В обычных диетах правильного питания эти продукты рассматриваются как потенциально опасные из-за высокой калорийности, но больные их воспринимают хорошо, и они прекрасно годятся для завтраков.
  4. Молочные продукты. Продукты этой группы должны ежедневно присутствовать в рационе, ведь они не только несут белок, но и обогащают организм витаминами и минералами.

Если говорить в общем о меню, на завтрак полезно будет скушать кашу и бутерброд с сыром, на ланч – стакан молока или кефира и фрукт, в обед прекрасно подойдет легкий овощной суп и салат, на полдник стоит скушать фрукт или фруктовый салат с йогуртной заправкой, а на ужин – порцию мяса, рыбы или птицы с гарниром из овощей. Перед сном можно позволить себе фруктов или закуску из молочных продуктов.

Диета во время химиотерапии и после нее

Многие люди, внимательно относящиеся к своему здоровью, знают о том, что диета при химиотерапии может существенно помочь справиться с побочными эффектами, которые нередко сильно омрачают химиотерапию. Питание при химиотерапии должно учитывать следующие факторы:

  1. Питание перед химиотерапией, то есть непосредственно перед сеансом, не должно быть обильным, но и на пустой желудок тоже приходить нельзя.
  2. Откажитесь на этот период от жирной, тяжелой пищи, а также от большого количества пряностей и острых приправ.
  3. К вопросу о том, какое нужно питание после химиотерапии, то есть после сеанса, тут ответ прост – самое обычное. А если вы испытываете тошноту, стоит перейти на дробное питание – кушать по чуть-чуть, но часто.

   Важно учесть, что диета после химиотерапии предполагает отказ от тяжелой, жирной, мучной пищи хотя бы на несколько недель, даже если вы хорошо перенесли курс. В случае если вы чувствуете тошноту, не ешьте ваши любимые блюда несколько дней, иначе они навсегда могут потерять привлекательность в ваших глазах.

Сравнение влияния соевого и козьего молока на активность онкомаркерных ферментов во время гепатоканцерогенеза у крыс

Malays J Med Sci. 2001 Jan; 8 (1): 41–45.

Департамент питания и наук о здоровье, факультет медицины и медицинских наук, Universiti Putra Malaysia 43400, Серданг, Селангор, D.E., Малайзия.

Переписка: доц. Проф. Д-р Асмах Рахмат, Департамент питания и наук о здоровье, Факультет медицины и медицинских наук, Universiti Putra Malaysia 43400, Серданг, Селангор Д.Электронная почта: [email protected]

Получено 24 сентября 2000 г .; Пересмотрено 21 декабря 2000 г .; Принято 15 января 2001 г.

Copyright © Penerbit Universiti Sains Malaysia, 2001

Abstract

Молоко - это физиологическая жидкость, которая имеет высокую питательную ценность, а соевые бобы обладают сильными антиоксидантными свойствами, которые, как считается, ингибируют канцерогенез. Целью этого исследования было изучить влияние введения соевого и козьего молока на гепатоканцерогенез у крыс (получавших диэтилнитрозамин; DEN и ацетиламинофлуорен; AAF) путем определения активности плазменной гамма-глутамилтранспептидазы (GGT) и щелочной фосфатазы (ALP). ).Тридцать шесть крыс вида Sprague-Dawley были разделены на 6 групп: контрольная, DEN / AAF, соевые бобы, DEN / AAF с обработкой сои, козье молоко и DEN / AAF с обработкой козьим молоком. Принимали соевое и козье молоко по 5 мл / день. Крыс умерщвляли через 8 недель и собирали кровь. Лечение DEN / AAF вызывало повышение уровней ALP и GGT и значительное снижение веса (p <0,05). Активность ALP и GGT значительно снизилась после приема соевого и козьего молока (p <0.05). Введение только козьего молока и сои не вызывало каких-либо изменений активности ферментов. Сравнение эффекта сои и козьего молока на снижение активности ферментов (ALP и GGT) не дало значимых значений (p> 0,05). Однако снижение веса наблюдалось у крыс, получавших соевое, а также козье молоко. Полученные результаты позволяют предположить, что соевое и козье молоко могут действовать как противораковые агенты при гепатоканцерогенезе, хотя для дальнейшего выяснения этого аспекта требуются дальнейшие исследования.

Ключевые слова: соя, козье молоко и гепатоканцерогенез

Введение

Молоко - это физиологическая жидкость с высокой питательной ценностью, поскольку оно естественно богато энергией, белками, витаминами и минералами. Сообщается, что компонент сывороточного протеина в грудном молоке обладает противоопухолевой активностью (1). Одно исследование (2) показало, что молочный жир содержит ряд потенциальных антиканцерогенных компонентов, включая конъюгированную линолевую кислоту, сфингомиелин, масляную кислоту и простые эфиры липидов.Конъюгированная линолевая кислота подавляла пролиферацию клеточных линий злокачественной меланомы человека, колоректального рака, рака груди и легких. У животных он уменьшал частоту химически индуцированных эпидермальных опухолей у мышей, неоплазии желудка у мышей и аберрантных очагов крипт в толстой кишке крыс (1).

Соя содержит несколько природных фенольных и флавоноидов, которые обладают сильными антиоксидантными свойствами и, как считается, ингибируют канцерогенез. Большое внимание было уделено генистеину и даидзеину, преобладающим изофлавонам сои (3).Эпидемиологические исследования, in vitro, и лабораторные животные подтверждают гипотезу о том, что фитохимические вещества в соевых продуктах обладают антиканцерогенными свойствами (4,5). Кроме того, ингибиторы протеаз, ингибитор Боумена-Бирка, гексафосфат инозита (фитиновая кислота), лигнаны, фитостерины и сапонины, содержащиеся в соевых продуктах, также могут обладать биологической активностью, связанной с ингибированием канцерогенеза (4–7).

γ-глутамилтранспептидаза (GGT, E.C 2.3.2.2) и щелочная фосфатаза (ALP, E.C 3.1.3.1) относятся к маркерным ферментам, за которыми наблюдали во время канцерогенеза (8,9). GGT - фермент-маркер рака печени. Сообщалось, что ALP, фермент-маркер в тесте функции печени, полезен в качестве маркера неопластической трансформации и гепатоканцерогенеза (10). Целью этого исследования было сравнить эффекты введения соевого и козьего молока на активность ALP и GGT у крыс, индуцированных гепатоканцерогенезом, с использованием диэтилнитрозамина (DEN) и 2-ацетиламинофлуорена (AAF).

Материалы и методы

Chemicals

Диэтилнитрозамин (DEN) (Sigma Chemical Co, США), 2-ацетиламинофлуорен (AAF) (Sigma Chemical Co, США), γ-глутамилкарбоксинитроанилид (Sigma Chemical Co, США), p- динатрий нитрофенилфосфат (Sigma Chemical Co, США) и все другие химические вещества и другие используемые реагенты были самого высокого качества, доступного на рынке. Основной рацион из крысиного корма был приобретен у Gold Coin Co. Ltd. (Малайзия).

Обработка животных

Использовали

самцов крыс Sprague-Dawley (Animal House, Universiti Putra Malaysia) в возрасте 7–8 недель и массой 120–150 г.Крыс содержали индивидуально в хорошо вентилируемом помещении (30 ° C), содержали на обычном или обработанном корме для крыс и давали воду ad libitum . Крысы были разделены на шесть групп по 5–8 крыс в каждой. Контрольная группа (группа 1) на протяжении всего эксперимента получала базовую диету. Контрольные группы соевого и козьего молока (группы 3 и 5) получали основной рацион и добавляли соевое или козье молоко по 5 мл / день для каждой крысы. Группы 2, 4 и 6 были индуцированы гепатоканцерогеном; крысы в ​​группе 2 получали основной рацион, крысы в ​​группах 4 и 6 получали добавку либо соевого, либо козьего молока в дозах, указанных ранее.

Индукция гепатоканцерогенеза

Химически индуцированный гепатоканцерогенез проводили с использованием метода Солта и Фарбера (11). Крысам внутрибрюшинно вводили однократную дозу ДЭН из расчета 200 мг / кг массы тела. После 2-недельного периода восстановления крыс кормили диетой (мас. / Мас.), Содержащей 0,02% (мас. / Мас.) AAF, в течение 2 недель. Добавки соевого и козьего молока крысам, получавшим гепатоканцероген, начали в начале введения DEN. Прием добавок продолжали в общей сложности 8 недель, после чего крыс умерщвляли.

Определение активности ферментов-маркеров

Кровь была взята из сердечной пункции. Активность GGT и ALP в плазме определяли согласно методикам, описанным Jacobs (12) (с некоторыми модификациями) и Jahan и Butterworth (13), соответственно. Активности как GGT, так и ALP в плазме выражали в МЕ / л.

Статистический анализ

Полученные результаты были проанализированы с использованием дисперсионного анализа и t-критерия Стьюдента. Значение p <0,05 считалось достоверным.

Результаты

Результаты показывают, что лечение DEN / AAF вызывало повышение уровней ALP и GGT и значительное снижение веса (p <0,05) (). Активности ALP и GGT значительно снизились у крыс, получавших DEN / AAF, после введения соевого и козьего молока (p <0,05). Введение только козьего молока и сои не вызывало значительных изменений активности ферментов по сравнению с контрольными значениями. Достоверных различий в активности ALP и GGT не было (p> 0.05) среди двух обработок. Однако снижение веса также наблюдалось у крыс, получавших соевые бобы и козье молоко ().

Таблица 1.

Влияние соевого и козьего молока на активность гамма-глутамилтранспептидазы и щелочной фосфатазы у крыс, вызванных раком плазмы.

Группы ГГТ в плазме (МЕ / л) ЩФ в плазме (МЕ / л)
1. Контроль 6.19 ± 0,50 343,80 ± 21,98
2. DEN / AAF 10,15 ± 0,66 a 490,85 ± 36,50 a
3. Соя 7,31 ± 0,65 b 338,32 ± 17,64 b
4. Обработка DEN / AAF + сои 8,05 ± 0,45 b 312,68 ± 28,57 b
5. Козье молоко 6,95 ± 0,37 b 292.74 ± 29,97 b
6. Обработка DEN / AAF + козьим молоком 8,47 ± 0,26 b 333,29 ± 37,54 b

Таблица 2.

Влияние различных обработок на Прирост массы тела

Группы Прирост массы (г)
1. Контрольный 218,33 ± 2,19
2. DEN / AAF 170.00 ± 9,36 a
3. Соя 171,25 ± 9,04 a
4. Обработка DEN / AAF + сои 177,67 ± 3,51 a
5. Козье молоко 160,80 ± 6,87 a
6. DEN / AAF + лечение козьим молоком 177,67 ± 7,47 a

Обсуждение

Оптимальный подход к борьбе с раком - профилактика.Хотя рацион человека содержит компоненты, способствующие развитию рака, в нем также есть компоненты, которые могут его предотвратить (2). Наблюдения в ходе исследований на животных показали, что молочный жир снижает частоту возникновения химически индуцированных опухолей (14). До сих пор не сообщалось об определении ферментов у животных, получавших соевое или козье молоко с экспериментально индуцированным канцерогенезом. Из результатов, полученных в настоящей работе, следует, что соевое и козье молоко снижало тяжесть канцерогенеза, что отражалось в снижении активности ферментов маркеров опухолей плазмы i.e GGT и ALP (8–10). Различные методы лечения повлияли на вес тела. Снижение веса также наблюдалось у крыс, получавших только соевые бобы и козье молоко. Это может указывать на то, что соевое и козье молоко можно использовать для снижения или поддержания массы тела.

Молочная корова или коза обладают способностью извлекать из корма потенциальные антиканцерогенные агенты, такие как бета-ионон и госсипол, и переносить их в молоко (2). В исследованиях на животных, сравнивающих канцерогенный потенциал молочного жира или сливочного масла с богатыми линолевой кислотой растительными маслами или маргарином, было выявлено меньшее развитие опухолей при использовании молочных продуктов (2).

Было показано, что изолят соевого белка подавляет рост опухолей простаты человека, трансплантированных мышам (14). Сообщалось о in vivo ингибировании заболеваемости или прогрессирования рака соевыми продуктами или чистым изофлавоном при раке желудка (15), лейкемии (16), раке груди (17) и других (18). Напротив, некоторые исследования не обнаружили ингибирующего действия in vivo на сои на онкогенез. Макинтош и др. (19) и Рао (20) сообщили в своих исследованиях, что соевые диетические средства способствуют развитию опухолей.Здесь мы сообщаем о влиянии добавок сои на химически индуцированный канцерогенез. Сравнение действия соевого и козьего молока не дает большой разницы. Различия в активности ALP и GGT в обоих вариантах лечения не были значительными. Интересно отметить, что соевые бобы имели эффект, аналогичный козьему молоку.

Механизм действия, предложенный для защитного действия соевого и козьего молока во время канцерогенеза, аналогичен для витамина E или C и других антиоксидантов.Возможные механизмы включают удаление свободных радикалов, образующихся при гепатоканцерогенезе. Хорошо известно, что антиоксиданты замедляют или ингибируют окисление и перекисное окисление липидов.

Заключение

В заключение, добавление соевого и козьего молока вызывало снижение тяжести канцерогенеза, что указывает на защитный эффект соевого и козьего молока у крыс, индуцированных гепатоканцерогенезом. Полученные результаты свидетельствуют о том, что соевое и козье молоко эффективно действуют как противораковые агенты при гепатоканцерогенезе, хотя необходимы дальнейшие исследования.

Благодарности

Авторы благодарят Malaysian Animals Genetics Sdn. Bhd., На поставку козьего молока, а также UPM на краткосрочный грант (1998 г.).

Ссылки

1. Хаканссон А., Борис З., Стен О., Хемант С. Апоптоз, индуцированный белком грудного молока. Труды национальных академических наук США. 1995. 92: 8064–68. [Google Scholar] 2. Parodi PW. Компоненты жира коровьего молока как потенциальные антиканцерогенные средства. Журнал питания. 1997. 127 (6): 1055–60. [PubMed] [Google Scholar] 3.Ван Х., Мерфи, Пенсильвания. Изофлавоновый состав американской и японской сои в Айове: влияние сорта, года урожая и местоположения. J. Agric. Food Chem. 1999; 42: 1647–77. [Google Scholar] 4. Кеннеди AR. Доказательства использования соевых бобов в качестве средств профилактики рака. J. Nutr. 1995; 125: 733S – 743S. [PubMed] [Google Scholar] 5. Messina MJ, Persky V, Setchell KD, Barnes S. Потребление сои и риск рака: обзор данных in vitro, и in vivo, . Nutr Cancer. 1994; 21: 113–31. [PubMed] [Google Scholar] 6.Рао А.В., Сун МК. Сапонин как антиканцерогены. J. Nutr. 1995; 125: 717S – 724 S. [PubMed] [Google Scholar] 7. Шамсуддин AM. Инозитолфосфатаза обладает новой противораковой функцией. J.Nutr. 1995; 125: 725S – 732S. [PubMed] [Google Scholar] 8. Хендрих С., Пито ХК. Ферменты метаболизма глутатиона как биохимические маркеры гепатоканцерогенеза. Обзоры рака и метастазов. 1987. 6: 155–78. [PubMed] [Google Scholar] 9. Мох DW. Множественные формы кислой и щелочной фосфатазы: генетика, экспрессия и тканеспецифическая модификация.Clin Chim Acta. 1986. 161: 123–35. [PubMed] [Google Scholar] 10. Рахмат Асмах, Нга Ван Зурина Ван, Шамаан Нор Арипин, Гапор Абдул, Кадир Халид Абдул. Длительное введение токотриенолов и активности ферментов-маркеров опухолей во время гепатоканцерогенеза у крыс. Питание. 1993; 9: 229–32. [PubMed] [Google Scholar] 11. Солт Д., Фарбер Э. Новый принцип анализа химических канцерогенов. Природа. 1976; 263: 701–3. [Google Scholar] 12. Джейкобс WLW. Колориметрический анализ гамма-глутамилтранспептидазы.Clin Chim Acta. 1971; 31: 175–79. [PubMed] [Google Scholar] 13. Джахан М., Баттерворт П.Дж. Щелочная фосфатаза куриной почки. Фермент. 1986; 35: 61–69. [PubMed] [Google Scholar] 14. Чжоу JR, Gugger ET, Tanakan T, Guo Y, Blackburn GL, Clinton SK. Фитохимические вещества сои подавляют рост перевиваемой карциномы простаты человека и ангиогенез опухоли у мышей. J. Nutr. 1999; 129: 1628–35. [PubMed] [Google Scholar] 15. Янагихара К., Ито А., Тоге Т., Нумото М. Антипролиферативные эффекты изофлавонов на линии раковых клеток человека, полученные из желудочно-кишечного тракта.Cancer Res. 1993; 53: 5815–21. [PubMed] [Google Scholar] 16. Jing Y, Nakaya K, Han R. Дифференциация клеток промиелоцитарного лейкоза HL-60, индуцированная даидзеином, в vitro и vivo . Anticancer Res. 1993; 13: 1049–54. [PubMed] [Google Scholar] 17. Гаврилевич EJ, Zapata JJ, Blair WH. Соя и экспериментальный рак: исследования на животных. J. Nutr. 1995; 125: 698S – 708S. [PubMed] [Google Scholar] 18. Клинтон СК, Дестри Р., Андерсон Д.Б., Truex CR, Имрей ПБ, Висек В.Дж. Вызванный 1,2-диметилгидразином рак толстой кишки у крыс, получавших говяжий или растительный белок.Nutr. Rep. Int. 1979; 20: 335–42. [Google Scholar] 19. Макинтош Г.Х., Регестер Г.О., Ле Леу Р.К., Ройл П.Дж., Смитерс Г.В. Молочные белки защищают крыс от рака кишечника, вызванного диметилгидразином. J.Nutr. 1995; 125: 809–16. [PubMed] [Google Scholar] 20. Рао CV, Ван CX, Сими Б., Любет Р., Келлофф Дж., Стил В., Редди Б.С. Усиление экспериментального рака толстой кишки генистеином. Cancer Res. 1997; 57: 3717–22. [PubMed] [Google Scholar]

Сравнение влияния соевого и козьего молока на активность онко-маркерных ферментов во время гепатоканцерогенеза у крыс

Malays J Med Sci.2001 Jan; 8 (1): 41–45.

Департамент питания и наук о здоровье, факультет медицины и медицинских наук, Universiti Putra Malaysia 43400, Серданг, Селангор, D.E., Малайзия.

Переписка: доц. Проф. Д-р Асмах Рахмат, Департамент питания и наук о здоровье, Факультет медицины и медицинских наук, Universiti Putra Malaysia 43400, Серданг, Селангор Д.Е., электронная почта: [email protected]

Получено 24 сентября 2000 г .; Пересмотрено 21 декабря 2000 г .; Принято 15 января 2001 г.

Copyright © Penerbit Universiti Sains Malaysia, 2001

Abstract

Молоко - это физиологическая жидкость, которая имеет высокую питательную ценность, а соевые бобы обладают сильными антиоксидантными свойствами, которые, как считается, ингибируют канцерогенез.Целью этого исследования было изучить влияние введения соевого и козьего молока на гепатоканцерогенез у крыс (получавших диэтилнитрозамин; DEN и ацетиламинофлуорен; AAF) путем определения активности плазменной гамма-глутамилтранспептидазы (GGT) и щелочной фосфатазы (ALP). ). Тридцать шесть крыс вида Sprague-Dawley были разделены на 6 групп: контрольная, DEN / AAF, соевые бобы, DEN / AAF с обработкой сои, козье молоко и DEN / AAF с обработкой козьим молоком. Принимали соевое и козье молоко по 5 мл / день.Крыс умерщвляли через 8 недель и собирали кровь. Лечение DEN / AAF вызывало повышение уровней ALP и GGT и значительное снижение веса (p <0,05). Активность ALP и GGT значительно снизилась после приема соевого и козьего молока (p <0,05). Введение только козьего молока и сои не вызывало каких-либо изменений активности ферментов. Сравнение эффекта сои и козьего молока на снижение активности ферментов (ALP и GGT) не дало значимых значений (p> 0.05). Однако снижение веса наблюдалось у крыс, получавших соевое, а также козье молоко. Полученные результаты позволяют предположить, что соевое и козье молоко могут действовать как противораковые агенты при гепатоканцерогенезе, хотя для дальнейшего выяснения этого аспекта требуются дальнейшие исследования.

Ключевые слова: соя, козье молоко и гепатоканцерогенез

Введение

Молоко - это физиологическая жидкость с высокой питательной ценностью, поскольку оно естественно богато энергией, белками, витаминами и минералами.Сообщается, что компонент сывороточного протеина в грудном молоке обладает противоопухолевой активностью (1). Одно исследование (2) показало, что молочный жир содержит ряд потенциальных антиканцерогенных компонентов, включая конъюгированную линолевую кислоту, сфингомиелин, масляную кислоту и простые эфиры липидов. Конъюгированная линолевая кислота подавляла пролиферацию клеточных линий злокачественной меланомы человека, колоректального рака, рака груди и легких. У животных он уменьшал частоту химически индуцированных эпидермальных опухолей у мышей, неоплазии желудка у мышей и аберрантных очагов крипт в толстой кишке крыс (1).

Соя содержит несколько природных фенольных и флавоноидов, которые обладают сильными антиоксидантными свойствами и, как считается, ингибируют канцерогенез. Большое внимание было уделено генистеину и даидзеину, преобладающим изофлавонам сои (3). Эпидемиологические исследования, in vitro, и лабораторные животные подтверждают гипотезу о том, что фитохимические вещества в соевых продуктах обладают антиканцерогенными свойствами (4,5). Кроме того, ингибиторы протеаз, ингибитор Боумена-Бирка, гексафосфат инозита (фитиновая кислота), лигнаны, фитостерины и сапонины, содержащиеся в соевых продуктах, также могут обладать биологической активностью, связанной с ингибированием канцерогенеза (4–7).

γ-глутамилтранспептидаза (GGT, E.C 2.3.2.2) и щелочная фосфатаза (ALP, E.C 3.1.3.1) относятся к маркерным ферментам, которые отслеживаются во время канцерогенеза (8,9). GGT - фермент-маркер рака печени. Сообщалось, что ALP, фермент-маркер в тесте функции печени, полезен в качестве маркера неопластической трансформации и гепатоканцерогенеза (10). Целью этого исследования было сравнить эффекты введения соевого и козьего молока на активность ALP и GGT у крыс, индуцированных гепатоканцерогенезом, с использованием диэтилнитрозамина (DEN) и 2-ацетиламинофлуорена (AAF).

Материалы и методы

Chemicals

Диэтилнитрозамин (DEN) (Sigma Chemical Co, США), 2-ацетиламинофлуорен (AAF) (Sigma Chemical Co, США), γ-глутамилкарбоксинитроанилид (Sigma Chemical Co, США), p- динатрий нитрофенилфосфат (Sigma Chemical Co, США) и все другие химические вещества и другие используемые реагенты были самого высокого качества, доступного на рынке. Основной рацион из крысиного корма был приобретен у Gold Coin Co. Ltd. (Малайзия).

Обработка животных

Использовали

самцов крыс Sprague-Dawley (Animal House, Universiti Putra Malaysia) в возрасте 7–8 недель и массой 120–150 г.Крыс содержали индивидуально в хорошо вентилируемом помещении (30 ° C), содержали на обычном или обработанном корме для крыс и давали воду ad libitum . Крысы были разделены на шесть групп по 5–8 крыс в каждой. Контрольная группа (группа 1) на протяжении всего эксперимента получала базовую диету. Контрольные группы соевого и козьего молока (группы 3 и 5) получали основной рацион и добавляли соевое или козье молоко по 5 мл / день для каждой крысы. Группы 2, 4 и 6 были индуцированы гепатоканцерогеном; крысы в ​​группе 2 получали основной рацион, крысы в ​​группах 4 и 6 получали добавку либо соевого, либо козьего молока в дозах, указанных ранее.

Индукция гепатоканцерогенеза

Химически индуцированный гепатоканцерогенез проводили с использованием метода Солта и Фарбера (11). Крысам внутрибрюшинно вводили однократную дозу ДЭН из расчета 200 мг / кг массы тела. После 2-недельного периода восстановления крыс кормили диетой (мас. / Мас.), Содержащей 0,02% (мас. / Мас.) AAF, в течение 2 недель. Добавки соевого и козьего молока крысам, получавшим гепатоканцероген, начали в начале введения DEN. Прием добавок продолжали в общей сложности 8 недель, после чего крыс умерщвляли.

Определение активности ферментов-маркеров

Кровь была взята из сердечной пункции. Активность GGT и ALP в плазме определяли согласно методикам, описанным Jacobs (12) (с некоторыми модификациями) и Jahan и Butterworth (13), соответственно. Активности как GGT, так и ALP в плазме выражали в МЕ / л.

Статистический анализ

Полученные результаты были проанализированы с использованием дисперсионного анализа и t-критерия Стьюдента. Значение p <0,05 считалось достоверным.

Результаты

Результаты показывают, что лечение DEN / AAF вызывало повышение уровней ALP и GGT и значительное снижение веса (p <0,05) (). Активности ALP и GGT значительно снизились у крыс, получавших DEN / AAF, после введения соевого и козьего молока (p <0,05). Введение только козьего молока и сои не вызывало значительных изменений активности ферментов по сравнению с контрольными значениями. Достоверных различий в активности ALP и GGT не было (p> 0.05) среди двух обработок. Однако снижение веса также наблюдалось у крыс, получавших соевые бобы и козье молоко ().

Таблица 1.

Влияние соевого и козьего молока на активность гамма-глутамилтранспептидазы и щелочной фосфатазы у крыс, вызванных раком плазмы.

Группы ГГТ в плазме (МЕ / л) ЩФ в плазме (МЕ / л)
1. Контроль 6.19 ± 0,50 343,80 ± 21,98
2. DEN / AAF 10,15 ± 0,66 a 490,85 ± 36,50 a
3. Соя 7,31 ± 0,65 b 338,32 ± 17,64 b
4. Обработка DEN / AAF + сои 8,05 ± 0,45 b 312,68 ± 28,57 b
5. Козье молоко 6,95 ± 0,37 b 292.74 ± 29,97 b
6. Обработка DEN / AAF + козьим молоком 8,47 ± 0,26 b 333,29 ± 37,54 b

Таблица 2.

Влияние различных обработок на Прирост массы тела

Группы Прирост массы (г)
1. Контрольный 218,33 ± 2,19
2. DEN / AAF 170.00 ± 9,36 a
3. Соя 171,25 ± 9,04 a
4. Обработка DEN / AAF + сои 177,67 ± 3,51 a
5. Козье молоко 160,80 ± 6,87 a
6. DEN / AAF + лечение козьим молоком 177,67 ± 7,47 a

Обсуждение

Оптимальный подход к борьбе с раком - профилактика.Хотя рацион человека содержит компоненты, способствующие развитию рака, в нем также есть компоненты, которые могут его предотвратить (2). Наблюдения в ходе исследований на животных показали, что молочный жир снижает частоту возникновения химически индуцированных опухолей (14). До сих пор не сообщалось об определении ферментов у животных, получавших соевое или козье молоко с экспериментально индуцированным канцерогенезом. Из результатов, полученных в настоящей работе, следует, что соевое и козье молоко снижало тяжесть канцерогенеза, что отражалось в снижении активности ферментов маркеров опухолей плазмы i.e GGT и ALP (8–10). Различные методы лечения повлияли на вес тела. Снижение веса также наблюдалось у крыс, получавших только соевые бобы и козье молоко. Это может указывать на то, что соевое и козье молоко можно использовать для снижения или поддержания массы тела.

Молочная корова или коза обладают способностью извлекать из корма потенциальные антиканцерогенные агенты, такие как бета-ионон и госсипол, и переносить их в молоко (2). В исследованиях на животных, сравнивающих канцерогенный потенциал молочного жира или сливочного масла с богатыми линолевой кислотой растительными маслами или маргарином, было выявлено меньшее развитие опухолей при использовании молочных продуктов (2).

Было показано, что изолят соевого белка подавляет рост опухолей простаты человека, трансплантированных мышам (14). Сообщалось о in vivo ингибировании заболеваемости или прогрессирования рака соевыми продуктами или чистым изофлавоном при раке желудка (15), лейкемии (16), раке груди (17) и других (18). Напротив, некоторые исследования не обнаружили ингибирующего действия in vivo на сои на онкогенез. Макинтош и др. (19) и Рао (20) сообщили в своих исследованиях, что соевые диетические средства способствуют развитию опухолей.Здесь мы сообщаем о влиянии добавок сои на химически индуцированный канцерогенез. Сравнение действия соевого и козьего молока не дает большой разницы. Различия в активности ALP и GGT в обоих вариантах лечения не были значительными. Интересно отметить, что соевые бобы имели эффект, аналогичный козьему молоку.

Механизм действия, предложенный для защитного действия соевого и козьего молока во время канцерогенеза, аналогичен для витамина E или C и других антиоксидантов.Возможные механизмы включают удаление свободных радикалов, образующихся при гепатоканцерогенезе. Хорошо известно, что антиоксиданты замедляют или ингибируют окисление и перекисное окисление липидов.

Заключение

В заключение, добавление соевого и козьего молока вызывало снижение тяжести канцерогенеза, что указывает на защитный эффект соевого и козьего молока у крыс, индуцированных гепатоканцерогенезом. Полученные результаты свидетельствуют о том, что соевое и козье молоко эффективно действуют как противораковые агенты при гепатоканцерогенезе, хотя необходимы дальнейшие исследования.

Благодарности

Авторы благодарят Malaysian Animals Genetics Sdn. Bhd., На поставку козьего молока, а также UPM на краткосрочный грант (1998 г.).

Ссылки

1. Хаканссон А., Борис З., Стен О., Хемант С. Апоптоз, индуцированный белком грудного молока. Труды национальных академических наук США. 1995. 92: 8064–68. [Google Scholar] 2. Parodi PW. Компоненты жира коровьего молока как потенциальные антиканцерогенные средства. Журнал питания. 1997. 127 (6): 1055–60. [PubMed] [Google Scholar] 3.Ван Х., Мерфи, Пенсильвания. Изофлавоновый состав американской и японской сои в Айове: влияние сорта, года урожая и местоположения. J. Agric. Food Chem. 1999; 42: 1647–77. [Google Scholar] 4. Кеннеди AR. Доказательства использования соевых бобов в качестве средств профилактики рака. J. Nutr. 1995; 125: 733S – 743S. [PubMed] [Google Scholar] 5. Messina MJ, Persky V, Setchell KD, Barnes S. Потребление сои и риск рака: обзор данных in vitro, и in vivo, . Nutr Cancer. 1994; 21: 113–31. [PubMed] [Google Scholar] 6.Рао А.В., Сун МК. Сапонин как антиканцерогены. J. Nutr. 1995; 125: 717S – 724 S. [PubMed] [Google Scholar] 7. Шамсуддин AM. Инозитолфосфатаза обладает новой противораковой функцией. J.Nutr. 1995; 125: 725S – 732S. [PubMed] [Google Scholar] 8. Хендрих С., Пито ХК. Ферменты метаболизма глутатиона как биохимические маркеры гепатоканцерогенеза. Обзоры рака и метастазов. 1987. 6: 155–78. [PubMed] [Google Scholar] 9. Мох DW. Множественные формы кислой и щелочной фосфатазы: генетика, экспрессия и тканеспецифическая модификация.Clin Chim Acta. 1986. 161: 123–35. [PubMed] [Google Scholar] 10. Рахмат Асмах, Нга Ван Зурина Ван, Шамаан Нор Арипин, Гапор Абдул, Кадир Халид Абдул. Длительное введение токотриенолов и активности ферментов-маркеров опухолей во время гепатоканцерогенеза у крыс. Питание. 1993; 9: 229–32. [PubMed] [Google Scholar] 11. Солт Д., Фарбер Э. Новый принцип анализа химических канцерогенов. Природа. 1976; 263: 701–3. [Google Scholar] 12. Джейкобс WLW. Колориметрический анализ гамма-глутамилтранспептидазы.Clin Chim Acta. 1971; 31: 175–79. [PubMed] [Google Scholar] 13. Джахан М., Баттерворт П.Дж. Щелочная фосфатаза куриной почки. Фермент. 1986; 35: 61–69. [PubMed] [Google Scholar] 14. Чжоу JR, Gugger ET, Tanakan T, Guo Y, Blackburn GL, Clinton SK. Фитохимические вещества сои подавляют рост перевиваемой карциномы простаты человека и ангиогенез опухоли у мышей. J. Nutr. 1999; 129: 1628–35. [PubMed] [Google Scholar] 15. Янагихара К., Ито А., Тоге Т., Нумото М. Антипролиферативные эффекты изофлавонов на линии раковых клеток человека, полученные из желудочно-кишечного тракта.Cancer Res. 1993; 53: 5815–21. [PubMed] [Google Scholar] 16. Jing Y, Nakaya K, Han R. Дифференциация клеток промиелоцитарного лейкоза HL-60, индуцированная даидзеином, в vitro и vivo . Anticancer Res. 1993; 13: 1049–54. [PubMed] [Google Scholar] 17. Гаврилевич EJ, Zapata JJ, Blair WH. Соя и экспериментальный рак: исследования на животных. J. Nutr. 1995; 125: 698S – 708S. [PubMed] [Google Scholar] 18. Клинтон СК, Дестри Р., Андерсон Д.Б., Truex CR, Имрей ПБ, Висек В.Дж. Вызванный 1,2-диметилгидразином рак толстой кишки у крыс, получавших говяжий или растительный белок.Nutr. Rep. Int. 1979; 20: 335–42. [Google Scholar] 19. Макинтош Г.Х., Регестер Г.О., Ле Леу Р.К., Ройл П.Дж., Смитерс Г.В. Молочные белки защищают крыс от рака кишечника, вызванного диметилгидразином. J.Nutr. 1995; 125: 809–16. [PubMed] [Google Scholar] 20. Рао CV, Ван CX, Сими Б., Любет Р., Келлофф Дж., Стил В., Редди Б.С. Усиление экспериментального рака толстой кишки генистеином. Cancer Res. 1997; 57: 3717–22. [PubMed] [Google Scholar]

Противораковая активность коровьего, овечьего, козьего, кобыльего, ослиного и верблюжьего молока и их казеинов и белков сыворотки, а также сравнение казеинов in silico

Mol Biol Res Commun.2017 июн; 6 (2): 57–64.

Кафедра биотехнологии, Факультет передовых наук и технологий, Исфаханский университет, Исфахан, Иран

* Автор, ответственный за переписку: Кафедра биотехнологии, Факультет передовых наук и технологий, Исфаханский университет, Исфахан, Иран, тел: + 98-31-37934391, факс: +98-31-37932342, эл. Почта: [email protected]

Это статья в открытом доступе, распространяемая в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution License, (http : // creativecommons.org / licenses / by / 3.0 /), который разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии правильного цитирования оригинальной работы. Эта статья цитируется в других статьях PMC.

Abstract

Настоящее исследование было проведено для оценки противоопухолевой активности коровьего, козьего, овечьего, кобыльего, ослиного и верблюжьего молока, а также их казеина и белков сыворотки против линии клеток MCF7. Структурные свойства казеиновых белков также были исследованы с использованием инструментов биоинформатики, чтобы найти объяснение их противоопухолевой активности.Влияние различных видов молока и содержащихся в них казеина и сывороточных белков на пролиферацию MCF7 измеряли с помощью анализа МТТ при различных концентрациях (0,5, 1 и 2 мг / мл). Результаты показали, что кобылье, ослиное, коровье и верблюжье молоко и их казеин и сывороточные белки обладают мощной цитотоксической активностью в отношении клеток MCF7 в зависимости от дозы, в то время как овечье и козье молоко и их белки не проявляют никакой цитотоксической активности. Результаты in silico показали, что казеины кобылы, осла и верблюда имеют самые высокие положительные и отрицательные заряды.Прогноз вторичной структуры показал, что у казеинов кобылы и осла был максимальный процент α-спирали, а у казеина верблюда был самый высокий процент удлиненной цепи. Это исследование предполагает, что существует поразительная корреляция между противораковой активностью казеинов молока и их физико-химическими свойствами, такими как структура альфа-спирали, а также положительные и отрицательные заряды. В заключение, результаты показали, что кобылье, верблюжье и ослиное молоко могут быть хорошими кандидатами против клеток рака груди.

Ключевые слова: Молоко, казеин, сывороточные белки, анализ МТТ, In silico Исследование

ВВЕДЕНИЕ

Рак - одно из самых распространенных злокачественных новообразований во всем мире. Следовательно, очень необходимы открытие и разработка новых противораковых агентов с новыми способами действия. Многие исследователи сообщили, что компоненты молока обладают биологическими свойствами, превышающими их питательную ценность. Биологические функции молока в основном связаны с молочными пептидами и белками.Белки молока включают примерно 20% сыворотки и 80% казеина. Сыворотка содержит пять основных белков, включая α-лактальбумин, гликомакропептид, β-лактоглобулин, иммуноглобулины и сывороточный альбумин. Казеин содержит казеин αs1, αs2, β и κ [1]. Было несколько сообщений об антибактериальной, противовирусной, противогрибковой и антиоксидантной активности казеина и белков сыворотки [2].

Сообщалось также об иммуномодулирующей функции пептидов молока и казеина и белков сыворотки [3-5]. Несколько исследований также показали, что сывороточные белки, такие как лизоцим, лактоферрин и бычий сывороточный альбумин, обладают эффективной противоопухолевой активностью.Xueying Mao и др. Сообщили, что сывороточные белки ослиного молока обладают мощной антипролиферативной активностью против рака легких. Пять разных казоморфинов; Также сообщалось, что αs1-CN (f90–95), αs1-CN (f 90–96), β-казоморфин-7, β-казоморфин-7 (f1-5) и морфицептин ингибируют пролиферацию клеток линии клеток рака молочной железы человека. [6, 7]. Однако до сих пор не было представлено никаких научных исследований об активности ослиного, козьего, овечьего и кобыльего молока в отношении клеток MCF7. В настоящем исследовании казеин и сывороточные белки ослиного, верблюжьего, овечьего, козьего, коровьего и кобыльего молока были выделены и инкубированы с клеточными линиями рака груди (MCF7).Было исследовано влияние шести различных видов молока (ослиное, верблюжье, овечье, козье, коровье и кобыльское) и их казеинов и белков сыворотки на ингибирование роста клеток MCF7. Кроме того, в настоящем исследовании были изучены различные свойства казеина с использованием инструментов биоинформатики, чтобы найти объяснения их противоопухолевой активности.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Переработка молока: В данном исследовании использовалось молоко с разных ферм в Исфахане (Иран). Образцы молока собирали и нагревали на термостатической водяной бане при температуре предварительной пастеризации 63ºC в течение 20 минут и охлаждали до 4ºC.До анализа образцы хранили при -20ºC [6]. Обезжиренное молоко готовили из свежего молока центрифугированием при 5000 × g в течение 20 мин при 4ºC и вытягивали жировой слой [5]. Цельный казеин молока получали из обезжиренного молока путем доведения pH до 4,6 (изоэлектрическая точка казеина) и центрифугировали при 8000 × г в течение 20 минут при 20ºC для получения супернатанта сывороточных белков [8]. Белки сыворотки получали после осаждения казеинов. Белки сыворотки промывали и центрифугировали трижды, затем их pH доводили до 6.8 с использованием 1н. NaOH [5]. Затем казеин и сывороточные белки лиофилизировали и хранили при -20 ° C [6].

Культура клеток и анализ цитотоксичности: Клеточные линии MCF-7 (рак груди человека) были приобретены в Национальном банке клеток пастбищного института, Тегеран, Иран. Клеточные линии поддерживали в RPMI с добавлением 10% (об. / Об.) Инактивированной нагреванием фетальной бычьей сыворотки (FBS), 100 ед. Мл -1 пенициллина и 100 мкг мл -1 стрептомицина и 5 мМ L-глутамина. Клеточные линии поддерживали при 37ºC в увлажненном инкубаторе (N-Biotek Korea), содержащем 5% CO 2 , в условиях отсутствия Mycoplasma [9].

Влияние различных концентраций (0,5, 1 и 2 мг / мл) молока, казеина и сывороточных белков на клетки MCF-7 определяли с помощью модифицированного 3- (4,5-диметилтиазол-2-ил) -2, Анализ 5-дифенилтетразолийбромида (МТТ) [10]. После 48 часов инкубации при 37 ° C в каждую лунку добавляли раствор МТТ (5 мг / мл) и планшет инкубировали в течение 4 часов. Наконец, 50 мкл PrOH / HCl / TX (0,04 М HCl в 2-пропаноле плюс 10% Triton X-100) добавляли для растворения образовавшихся кристаллов формазана [11]. Планшет повторно инкубировали в течение 24 ч и определяли количество кристаллов формазана путем измерения оптической плотности при 492 нм с использованием спектрофотометра для микропланшетов (Awareness Technology Inc., стат факс 2100). Весь материал приобретен у компании Gibco (Германия). Процент выживаемости клеток рассчитывали следующим образом: Жизнеспособность клеток = (AtreatedAcontrol) × 100

Получение целевых аминокислотных последовательностей и множественное сопоставление последовательностей: Казеин альфа-S1-белки овцы, козы, коровы, верблюда, лошади и осла были проанализированы в настоящем исследовании. Последовательности белков доступны в NCBI. Номера доступа и количество аминокислот αs1-казеина показаны в.CLUSTAL Omega в Европейском институте биоинформатики использовался для генерации множественного выравнивания последовательностей [MSA] последовательностей белка казеина альфа S1 шести различных видов [12].

Таблица 1

Записи последовательности молочного белка в базе данных NCBI и количество аминокислот

Белки Инвентарный номер белков Количество аминокислот
αs1-казеин [ Bos Taurus ] {"type": "entrez-protein", "attrs": {"text": "ABW98936.1 "," term_id ":" 159793183 "," term_text ":" ABW98936.1 "}} ABW98936.1 214
αs1-казеин [ Equus caballus ] {"type": "entrez-protein", "attrs": {"text": "AAK83668.1", "term_id": "195", "term_text": "AAK83668.1"}} AAK83668.1 212
αs1-казеин [ Equus asinus ] {"type": "entrez-protein", "attrs": {"text": "P86272.1 "," term_id ":" 238055131 "," term_text ":" P86272.1 "}} P86272.1 217
αs1-казеин [ Камелус дромедарий ] {"type": "entrez-protein", "attrs": {"text": "CAA10077.1", "term_id": "3860335", "term_text": "CAA10077.1"}} CAA10077.1 222
αs1-казеин [ Капра Гиркус ] {"type": "entrez-protein", "attrs": {"text": "CAD45345.1 "," term_id ":" 22796155 "," term_text ":" CAD45345.1 "}} CAD45345.1 214
αs1-казеин [ Овис Овен ] {"type": "entrez-protein", "attrs": {"text": "AEN84772.1", "term_id": "345422900", "term_text": "AEN84772.1"}} AEN84772.1 214

Построения филогенетического дерева: Clustal Omega - это программа множественного выравнивания последовательностей для белковых последовательностей, после чего выравнивание используется для создания филогенетического анализа, и отображается окончательное филогенетическое дерево.В исследовании Clustal Omega использовали для филогенетического анализа 6 последовательностей казеиновых белков у млекопитающих [12].

Предсказание вторичной структуры: GOR IV в EXPASY, YASPIN Центра интегративной биоинформатики VU и PressAPro в Лаборатории биоинформатики и вычислительной биологии Института пищевых наук, CNR, Италия были использованы для предсказания вторичных структур последовательностей казеина альфа S1 [13 -15].

Физико-химические свойства: Прогнозируемое значение pH изоэлектрической точки (pI), молекулярные массы, а также положительный и отрицательный заряд белков были определены с помощью инструмента protparam в базе данных белков «SwissProt & TrEMBL» [16].NetSurfP использовался для определения доступной поверхности всех белков. Сервер NetSurfP предоставил информацию об обнаруженных и скрытых аминокислотах белков [17].

Статистический анализ: Значения представлены как среднее ± стандартное отклонение (SD). Анализ дисперсии с последующим тестом LSD был использован для оценки значимости между тестируемым образцом и контролем растворителя. P <0,05 считали статистически значимым.

Результаты

Козье, коровье, верблюжье, овечье, кобылье и ослиное молоко и их казеин и сывороточные белки были протестированы на цитотоксичность в отношении клеток MCF7.Все виды молока и протеины были протестированы при различных концентрациях (0,5, 1 и 2 мг / мл). Кобылье, ослиное, коровье и верблюжье молоко показало дозозависимую цитотоксическую активность в отношении клеток MCF7, в то время как овечье и козье молоко не показало никакой цитотоксической активности (). Самая высокая цитотоксическая активность казеинов наблюдалась у казеина кобыльего молока, за которым следовали верблюжьи, ослиные и коровьи (). Результаты анализа сывороточных белков показали, что верблюжий сывороточный белок проявлял сильную противораковую активность, в то время как коровье, а ослиное молоко проявляло слабую противораковую активность ().

Цитотоксическая активность козьего, коровьего, верблюжьего, овечьего, кобыльего и ослиного молока в отношении клеток MCF7 (0,5 мг / мл, 1 мг / мл, 2 мг / мл

Цитотоксическая активность коз, коров, верблюдов, овец, кобыл и ослов казеины против клеток MCF7 (0,5 мг / мл, 1 мг / мл, 2 мг / мл

Цитотоксическая активность сывороточных белков козы, коровы, верблюда, овцы, кобылы и осла против клеток MCF7 (0,5 мг / мл, 1 мг / мл, 2 мг / мл

Множественное выравнивание последовательностей было получено с использованием Clustal Omega с последовательностями казеина αs1, полученными из базы данных NCBI (), также результаты NCBI BLAST показали 44-89% идентичности между последовательностями казеина.Взаимоотношения последовательностей показали, что последовательности αs1казеина не принадлежали к высококонсервативному семейству.

Множественное выравнивание последовательностей казеина альфа S1 козы, коровы, верблюда, овцы, кобылы и осла

Структура филогенетического дерева показывает, что эти белки были разделены на три отдельные группы. Члены этих двух групп не очень разнообразны, и между ними существует высокая идентичность последовательностей. Между этими двумя отдельными группами не было комбинации членов, что свидетельствует о том, что они были разделены на ранней стадии эволюции ().

Филогенетическое дерево казеинов разных видов, построенное с помощью CLUSTAL omega.

Результаты показали, что типы казеина в основном различаются по процентному содержанию альфа-спирали, бета-листа и случайной спирали. Расчетная вторичная структура с веб-серверов GorIV, PreSSApro и YASPIN для αs1-казеина составляла от 39 до 46% α-спирали; От 8 до 14% вытянутой нити (β-листовой) и от 42 до 49% случайной спирали (). У верблюжьего казеина был самый высокий процент удлиненной пряди, в то время как у овец и коз был самый низкий процент в этом отношении.Максимальный процент α-спирали был получен у казеинов лошади и осла, а минимальный процент был также получен у казеинов козы и верблюда.

Таблица 2

: Прогнозирование вторичной структуры казеина альфа s1 с помощью GORIV, PreSSApro и YASPIN

αS1 Казеин α спираль (%) Удлиненная прядь (%) Случайная катушка (%)
Лошадь 46.85 10,21 42,92
Верблюд 39,33 14,11 46,54
Корова 42,59 10,74 45,32
Овцы 42,46 9,19 48,28
Осел 44,85 10,29 45,46

Результаты protparam физико-химических свойств показаны в.Алифатический индекс белков казеина верблюда и коровы был явно выше, чем у других типов казеина. Результаты также показали, что положительные и отрицательные заряды явно различались между этими типами казеина. Наибольший положительный заряд имели казеины лошади и осла, за ними следуют казеины верблюда, коровы, овцы и козы. Наибольший отрицательный заряд казеинов получил казеин верблюда, за которым следуют казеины осла, лошади, коровы, овцы и козы. Результаты захоронения и экспонирования остатков были также получены с помощью NetsurfP ().Максимальный и минимальный процент захороненных остатков были достигнуты казеинами коровы и лошади соответственно. И наоборот, казеины лошади и коровы показали самый высокий и самый низкий процент экспонированных остатков соответственно.

Таблица 3

Физико-химические свойства казеина альфа S1 по протпарам

900,19
αS1 Казеин МВт Отрицательный заряд Позиционный заряд Алифатический индекс
Лошадь 25.30 32 28 82,83
Верблюд 25,84 36 25 85,14
Корова 24,53 32 21 900,19 900,78 24,27 26 20 82,06
Овцы 24,30 27 21 83,88
Осел 25.96 33 29 80,92

Таблица 4

Процент захороненных и открытых остатков казеина альфа s1 по NetsurfP

αS1 Казеин Похоронен% Открыто%
Лошадь 40,09% 59,90%
Верблюд 41,89% 58,10%
Корова 45.79% 54,20%
Коза 45,32% 54,67%
Овца 44,39% 55,60%
Осел 44,23% 55,76148 55,7614% ОБСУЖДЕНИЕ

Молоко содержит более 25 различных белков. Примерно 82% белков молока млекопитающих составляют казеины, а остальные 18% - белки сыворотки. В этом исследовании проверялась антипролиферативная активность различных видов молока, казеинов и сывороточных белков.Результаты показали, что кобылье, ослиное и коровье молоко и их казеины обладают сильной противораковой активностью в отношении клеток MCF7. Наибольшую противораковую активность продемонстрировал казеин кобылы, за которым следовали казеины верблюда, осла и коровы. Результаты показали, что овечье и козье молоко и их казеины не обладают противораковой активностью. Эти данные свидетельствуют о том, что противораковая активность молока животных в основном связана с физическими и химическими характеристиками казеинов. Сообщалось о нескольких результатах о противораковой активности молока животных.О цитотоксической активности кобыльего молока , против клеток Raji и CEM-SS также сообщалось ранее [18]. Сообщалось об одном исследовании цитотоксической активности пептида, полученного из казеина αs1 человека (αs1-казоморфин и αs1-казоморфин амид), против клеток T47D [7]. Наши результаты показали, что сывороточные белки верблюда, коровы и осла обладают недельной цитотоксической активностью. Аналогичные исследования показали, что белки молочной сыворотки осла и крупного рогатого скота обладают цитотоксической активностью против A549 и клеток рака груди человека [6].В настоящем исследовании последовательности казеина as1 коровы, козы, овцы, кобылы, осла и верблюда были проанализированы с использованием метода биоинформатики. In silico Результаты показали, что самый высокий процент отрицательных и положительных зарядов достигается у казеинов кобылы, верблюда и осла. Аналогичная картина была также получена для структуры альфа-спирали казеинов, поскольку казеин кобылы имел самый высокий уровень структуры альфа-спирали и сильную противораковую активность.

Это исследование предполагает, что существует поразительная корреляция между противораковой активностью казеинов молока и их физико-химическими свойствами, такими как структура альфа-спирали, а также положительные и отрицательные заряды.Хуанг и др. Показали, что высоко заряженные производные COS (хитоолигосахарида) могут значительно снизить жизнеспособность раковых клеток, независимо от положительных или отрицательных зарядов [19]. Вторичная структура (α-спираль или β-лист) противоопухолевых пептидов связана с высоким процентом отрицательных и положительных зарядов. В нескольких исследованиях сообщалось, что альфа-спиральные катионные противораковые пептиды (ACP) проявляют уникальные механизмы действия и несколько необычных свойств, таких как активность широкого спектра и быстрое действие, и раковые клетки не могут бороться с ними [20].Согласно нашим результатам, казеин молока может быть хорошим кандидатом для лечения онкологических больных in vivo.

Благодарность

Авторы хотели бы поблагодарить Университет Исфахана за финансовую поддержку этого исследования.

Конфликт интересов:

Автор не имеет финансовых или нефинансовых конкурирующих интересов

Ссылки

1. Джаббари С., Хасани Р., Кафилзаде Ф., Джанфешан С. Противомикробные пептиды из молочных белков: проспект.Ann Biol Res. 2012; 3: 5313–5318. [Google Scholar] 2. López-Expósito I, Quirós A, Amigo L, Recio I. Гидролизаты казеина как источник антимикробных, антиоксидантных и гипотензивных пептидов. Lait. 2007. 87: 241–249. [Google Scholar] 3. Беллами В., Ямаути К., Вакабаяши Н., Такасе М., Такакура Н., Шимамура С., Томита М. Противогрибковые свойства лактоферрицина B, пептида, полученного из N-концевой области бычьего лактоферрина. Lett Appl Microbiol. 1994; 18: 230–233. [Google Scholar] 4. Лахов Э., Регельсон В.Антибактериальные и иммуностимулирующие казеиновые вещества, полученные из молока: казецидин, израцидиновые пептиды. Food Chem Toxicol. 1996. 34: 131–145. [PubMed] [Google Scholar] 5. Салями М., Моосави-Мовахеди А.А., Эхсани М.Р., Юсефи Р., Хертле Т., Чоберт Дж. М., Разави С.Х., Генрих Р., Балалай С., Эбади С.А., Пуртакдуст С. Улучшение антимикробной и антиоксидантной активности белков сыворотки верблюда и коровы за счет ограничения протеолиз. J. Agric Food Chem. 2010. 58: 3297–3302. [PubMed] [Google Scholar] 6. Мао X, Гу Дж, Сунь Y, Сюй С, Чжан X, Ян Х, Рен Ф.Антипролиферативный и противоопухолевый эффект активных компонентов ослиного молока на клетки рака легких человека A549. Int Dairy J. 2009; 19: 703–708. [Google Scholar] 7. Hatzoglou A, Bakogeorgou E, Hatzoglou C, Martin PM, Castanas E. Антипролиферативные и рецепторные связывающие свойства α- и β-казоморфинов в линии клеток рака молочной железы человека T47D. Eur J Pharmacol. 1996. 310: 217–223. [PubMed] [Google Scholar] 8. Herrouin M, Mollé D, Fauquant J, Ballestra F, Maubois JL, Léonil J. Новые генетические варианты, идентифицированные в сывороточных белках ослиного молока.J. Protein Chem. 2000. 19: 105–116. [PubMed] [Google Scholar] 9. Брайан Дж. П., Закари Л. В., Сет Дж. Дазатиниб действует синергично как с цитотоксическими ингибиторами, так и с ингибиторами сигнальной трансдукции в гетерогенных клеточных линиях рака молочной железы: уроки по разработке комбинированной таргетной терапии. Cancer Lett. 2012; 320: 104–110. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 10. Мосманн Т. Быстрый колориметрический анализ клеточного роста и выживаемости. Применение в анализах пролиферации и цитотоксичности. J Immunol Methods. 1983; 65: 55–63.[PubMed] [Google Scholar] 11. Morgan DM. Анализ тетразолия (МТТ) на жизнеспособность и активность клеток. Протоколы полиаминов, Humana Press, Totowa, NJ, 1998: 179–184. [Google Scholar] 12. Сиверс Ф., Вильм А., Дайнин Д., Гибсон Т. Дж., Карплус К., Ли В., Лопес Р., Мак-Вильям Х., Реммерт М., Сёдинг Дж., Томпсон Дж. Д.. Быстрое и масштабируемое создание высококачественного выравнивания множественных последовательностей белков с помощью Clustal Omega. Mol Syst Biol. 2011; 7: 1–9. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 13. Гарнье Дж., Жибрат Дж. Ф., Робсон Б.Метод GOR для прогнозирования вторичной структуры белка по аминокислотной последовательности. Meth Enzymol. 1996; 266: 540–553. [PubMed] [Google Scholar] 14. Costantini S, Colonna G, Facchiano AM. На склонность аминокислот к вторичным структурам влияет структурный класс белка. Biochem Biophys Res Commun. 2006; 342: 441–451. [PubMed] [Google Scholar] 15. Lin K, Simossis VA, Taylor WR, Heringa J. Простой и быстрый метод прогнозирования вторичной структуры с использованием скрытых нейронных сетей. Биоинформатика. 2005. 21: 152–159.[PubMed] [Google Scholar] 16. Гастайгер Э., Хугланд С., Гаттикер А., Дюво С.Е., Уилкинс М.Р., Аппель Р.Д., Байрох А. Инструменты идентификации и анализа белков на сервере ExPASy. Humana Press; 2005. С. 571–607. [Google Scholar] 17. Петерсен Б., Петерсен Т. Н., Андерсен П., Нильсен М., Лундегаард С. Общий метод присвоения оценок надежности, применяемый к прогнозам доступности растворителей. BMC Struct Biol. 2009; 9: 51–61. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 18. Рахмат А., Росли Р., Тан М. Х., Умар-Цафе Н., Али А. М., Бакар А., Фадзелли М.Сравнительная оценка цитотоксического действия молока различных видов на клеточные линии лейкемии. Malays J Med Health Sci. 2006; 2: 1–10. [Google Scholar] 19. Хуанг Р., Мендис Э, Раджапакс Н., Ким С.К. Сильный электронный заряд как важный фактор противораковой активности хитоолигосахаридов (COS) Life Sci. 2006; 78: 2399–2408. [PubMed] [Google Scholar] 20. Хуан И, Фэн Ци, Ян Ц., Хао Х, Чен Ю. Альфа-спиральные катионные противоопухолевые пептиды: многообещающий кандидат на новые противораковые препараты. Mini Rev Med Chem.2015; 15: 73–81. [PubMed] [Google Scholar]

Противораковая активность коровьего, овечьего, козьего, кобыльего, ослиного и верблюжьего молока и их казеинов и белков сыворотки, а также сравнение казеинов in silico

Mol Biol Res Commun. 2017 июн; 6 (2): 57–64.

Кафедра биотехнологии, Факультет передовых наук и технологий, Исфаханский университет, Исфахан, Иран

* Автор, ответственный за переписку: Кафедра биотехнологии, Факультет передовых наук и технологий, Исфаханский университет, Исфахан, Иран, тел: + 98-31-37934391, Факс: +98-31-37932342, Э.mail: [email protected]

Это статья в открытом доступе, распространяемая в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution License (http://creativecommons.org/licenses/by/3.0/), которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии правильного цитирования оригинальной работы. Эта статья цитируется в других статьях PMC.

Abstract

Настоящее исследование было проведено для оценки противоопухолевой активности коровьего, козьего, овечьего, кобыльего, ослиного и верблюжьего молока, а также их казеина и белков сыворотки против линии клеток MCF7.Структурные свойства казеиновых белков также были исследованы с использованием инструментов биоинформатики, чтобы найти объяснение их противоопухолевой активности. Влияние различных видов молока и содержащихся в них казеина и сывороточных белков на пролиферацию MCF7 измеряли с помощью анализа МТТ при различных концентрациях (0,5, 1 и 2 мг / мл). Результаты показали, что кобылье, ослиное, коровье и верблюжье молоко и их казеин и сывороточные белки обладают мощной цитотоксической активностью в отношении клеток MCF7 в зависимости от дозы, в то время как овечье и козье молоко и их белки не проявляют никакой цитотоксической активности.Результаты in silico показали, что казеины кобылы, осла и верблюда имеют самые высокие положительные и отрицательные заряды. Прогноз вторичной структуры показал, что у казеинов кобылы и осла был максимальный процент α-спирали, а у казеина верблюда был самый высокий процент удлиненной цепи. Это исследование предполагает, что существует поразительная корреляция между противораковой активностью казеинов молока и их физико-химическими свойствами, такими как структура альфа-спирали, а также положительные и отрицательные заряды.В заключение, результаты показали, что кобылье, верблюжье и ослиное молоко могут быть хорошими кандидатами против клеток рака груди.

Ключевые слова: Молоко, казеин, сывороточные белки, анализ МТТ, In silico Исследование

ВВЕДЕНИЕ

Рак - одно из самых распространенных злокачественных новообразований во всем мире. Следовательно, очень необходимы открытие и разработка новых противораковых агентов с новыми способами действия. Многие исследователи сообщили, что компоненты молока обладают биологическими свойствами, превышающими их питательную ценность.Биологические функции молока в основном связаны с молочными пептидами и белками. Белки молока включают примерно 20% сыворотки и 80% казеина. Сыворотка содержит пять основных белков, включая α-лактальбумин, гликомакропептид, β-лактоглобулин, иммуноглобулины и сывороточный альбумин. Казеин содержит казеин αs1, αs2, β и κ [1]. Было несколько сообщений об антибактериальной, противовирусной, противогрибковой и антиоксидантной активности казеина и белков сыворотки [2].

Сообщалось также об иммуномодулирующей функции пептидов молока и казеина и белков сыворотки [3-5].Несколько исследований также показали, что сывороточные белки, такие как лизоцим, лактоферрин и бычий сывороточный альбумин, обладают эффективной противоопухолевой активностью. Xueying Mao и др. Сообщили, что сывороточные белки ослиного молока обладают мощной антипролиферативной активностью против рака легких. Пять разных казоморфинов; Также сообщалось, что αs1-CN (f90–95), αs1-CN (f 90–96), β-казоморфин-7, β-казоморфин-7 (f1-5) и морфицептин ингибируют пролиферацию клеток линии клеток рака молочной железы человека. [6, 7]. Однако до сих пор не было представлено никаких научных исследований об активности ослиного, козьего, овечьего и кобыльего молока в отношении клеток MCF7.В настоящем исследовании казеин и сывороточные белки ослиного, верблюжьего, овечьего, козьего, коровьего и кобыльего молока были выделены и инкубированы с клеточными линиями рака груди (MCF7). Было исследовано влияние шести различных видов молока (ослиное, верблюжье, овечье, козье, коровье и кобыльское) и их казеинов и белков сыворотки на ингибирование роста клеток MCF7. Кроме того, в настоящем исследовании были изучены различные свойства казеина с использованием инструментов биоинформатики, чтобы найти объяснения их противоопухолевой активности.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Переработка молока: В данном исследовании использовалось молоко с разных ферм в Исфахане (Иран).Образцы молока собирали и нагревали на термостатической водяной бане при температуре предварительной пастеризации 63ºC в течение 20 минут и охлаждали до 4ºC. До анализа образцы хранили при -20ºC [6]. Обезжиренное молоко готовили из свежего молока центрифугированием при 5000 × g в течение 20 мин при 4ºC и вытягивали жировой слой [5]. Цельный казеин молока получали из обезжиренного молока путем доведения pH до 4,6 (изоэлектрическая точка казеина) и центрифугировали при 8000 × г в течение 20 минут при 20ºC для получения супернатанта сывороточных белков [8].Белки сыворотки получали после осаждения казеинов. Белки сыворотки промывали и центрифугировали трижды, затем их pH доводили до 6,8 с помощью 1 н. NaOH [5]. Затем казеин и сывороточные белки лиофилизировали и хранили при -20 ° C [6].

Культура клеток и анализ цитотоксичности: Клеточные линии MCF-7 (рак груди человека) были приобретены в Национальном банке клеток пастбищного института, Тегеран, Иран. Клеточные линии поддерживали в RPMI с добавлением 10% (об. / Об.) Инактивированной нагреванием фетальной бычьей сыворотки (FBS), 100 ед. Мл -1 пенициллина и 100 мкг мл -1 стрептомицина и 5 мМ L-глутамина.Клеточные линии поддерживали при 37ºC в увлажненном инкубаторе (N-Biotek Korea), содержащем 5% CO 2 , в условиях отсутствия Mycoplasma [9].

Влияние различных концентраций (0,5, 1 и 2 мг / мл) молока, казеина и сывороточных белков на клетки MCF-7 определяли с помощью модифицированного 3- (4,5-диметилтиазол-2-ил) -2, Анализ 5-дифенилтетразолийбромида (МТТ) [10]. После 48 часов инкубации при 37 ° C в каждую лунку добавляли раствор МТТ (5 мг / мл) и планшет инкубировали в течение 4 часов.Наконец, 50 мкл PrOH / HCl / TX (0,04 М HCl в 2-пропаноле плюс 10% Triton X-100) добавляли для растворения образовавшихся кристаллов формазана [11]. Планшет повторно инкубировали в течение 24 ч и определяли количество кристаллов формазана путем измерения оптической плотности при 492 нм с использованием спектрофотометра для микропланшетов (Awareness Technology Inc., stat fax 2100). Весь материал приобретен у компании Gibco (Германия). Процент выживаемости клеток рассчитывали следующим образом: Жизнеспособность клеток = (AtreatedAcontrol) × 100

Получение целевых аминокислотных последовательностей и множественное сопоставление последовательностей: Казеин альфа-S1-белки овцы, козы, коровы, верблюда, лошади и осла были проанализированы в настоящем исследовании.Последовательности белков доступны в NCBI. Номера доступа и количество аминокислот αs1-казеина показаны в. CLUSTAL Omega в Европейском институте биоинформатики использовался для генерации множественного выравнивания последовательностей [MSA] последовательностей белка казеина альфа S1 шести различных видов [12].

Таблица 1

Записи последовательности молочного белка в базе данных NCBI и количество аминокислот

Белки Инвентарный номер белков Количество аминокислот
αs1-казеин [ Bos Taurus ] {"type": "entrez-protein", "attrs": {"text": "ABW98936.1 "," term_id ":" 159793183 "," term_text ":" ABW98936.1 "}} ABW98936.1 214
αs1-казеин [ Equus caballus ] {"type": "entrez-protein", "attrs": {"text": "AAK83668.1", "term_id": "195", "term_text": "AAK83668.1"}} AAK83668.1 212
αs1-казеин [ Equus asinus ] {"type": "entrez-protein", "attrs": {"text": "P86272.1 "," term_id ":" 238055131 "," term_text ":" P86272.1 "}} P86272.1 217
αs1-казеин [ Камелус дромедарий ] {"type": "entrez-protein", "attrs": {"text": "CAA10077.1", "term_id": "3860335", "term_text": "CAA10077.1"}} CAA10077.1 222
αs1-казеин [ Капра Гиркус ] {"type": "entrez-protein", "attrs": {"text": "CAD45345.1 "," term_id ":" 22796155 "," term_text ":" CAD45345.1 "}} CAD45345.1 214
αs1-казеин [ Овис Овен ] {"type": "entrez-protein", "attrs": {"text": "AEN84772.1", "term_id": "345422900", "term_text": "AEN84772.1"}} AEN84772.1 214

Построения филогенетического дерева: Clustal Omega - это программа множественного выравнивания последовательностей для белковых последовательностей, после чего выравнивание используется для создания филогенетического анализа, и отображается окончательное филогенетическое дерево.В исследовании Clustal Omega использовали для филогенетического анализа 6 последовательностей казеиновых белков у млекопитающих [12].

Предсказание вторичной структуры: GOR IV в EXPASY, YASPIN Центра интегративной биоинформатики VU и PressAPro в Лаборатории биоинформатики и вычислительной биологии Института пищевых наук, CNR, Италия были использованы для предсказания вторичных структур последовательностей казеина альфа S1 [13 -15].

Физико-химические свойства: Прогнозируемое значение pH изоэлектрической точки (pI), молекулярные массы, а также положительный и отрицательный заряд белков были определены с помощью инструмента protparam в базе данных белков «SwissProt & TrEMBL» [16].NetSurfP использовался для определения доступной поверхности всех белков. Сервер NetSurfP предоставил информацию об обнаруженных и скрытых аминокислотах белков [17].

Статистический анализ: Значения представлены как среднее ± стандартное отклонение (SD). Анализ дисперсии с последующим тестом LSD был использован для оценки значимости между тестируемым образцом и контролем растворителя. P <0,05 считали статистически значимым.

Результаты

Козье, коровье, верблюжье, овечье, кобылье и ослиное молоко и их казеин и сывороточные белки были протестированы на цитотоксичность в отношении клеток MCF7.Все виды молока и протеины были протестированы при различных концентрациях (0,5, 1 и 2 мг / мл). Кобылье, ослиное, коровье и верблюжье молоко показало дозозависимую цитотоксическую активность в отношении клеток MCF7, в то время как овечье и козье молоко не показало никакой цитотоксической активности (). Самая высокая цитотоксическая активность казеинов наблюдалась у казеина кобыльего молока, за которым следовали верблюжьи, ослиные и коровьи (). Результаты анализа сывороточных белков показали, что верблюжий сывороточный белок проявлял сильную противораковую активность, в то время как коровье, а ослиное молоко проявляло слабую противораковую активность ().

Цитотоксическая активность козьего, коровьего, верблюжьего, овечьего, кобыльего и ослиного молока в отношении клеток MCF7 (0,5 мг / мл, 1 мг / мл, 2 мг / мл

Цитотоксическая активность коз, коров, верблюдов, овец, кобыл и ослов казеины против клеток MCF7 (0,5 мг / мл, 1 мг / мл, 2 мг / мл

Цитотоксическая активность сывороточных белков козы, коровы, верблюда, овцы, кобылы и осла против клеток MCF7 (0,5 мг / мл, 1 мг / мл, 2 мг / мл

Множественное выравнивание последовательностей было получено с использованием Clustal Omega с последовательностями казеина αs1, полученными из базы данных NCBI (), также результаты NCBI BLAST показали 44-89% идентичности между последовательностями казеина.Взаимоотношения последовательностей показали, что последовательности αs1казеина не принадлежали к высококонсервативному семейству.

Множественное выравнивание последовательностей казеина альфа S1 козы, коровы, верблюда, овцы, кобылы и осла

Структура филогенетического дерева показывает, что эти белки были разделены на три отдельные группы. Члены этих двух групп не очень разнообразны, и между ними существует высокая идентичность последовательностей. Между этими двумя отдельными группами не было комбинации членов, что свидетельствует о том, что они были разделены на ранней стадии эволюции ().

Филогенетическое дерево казеинов разных видов, построенное с помощью CLUSTAL omega.

Результаты показали, что типы казеина в основном различаются по процентному содержанию альфа-спирали, бета-листа и случайной спирали. Расчетная вторичная структура с веб-серверов GorIV, PreSSApro и YASPIN для αs1-казеина составляла от 39 до 46% α-спирали; От 8 до 14% вытянутой нити (β-листовой) и от 42 до 49% случайной спирали (). У верблюжьего казеина был самый высокий процент удлиненной пряди, в то время как у овец и коз был самый низкий процент в этом отношении.Максимальный процент α-спирали был получен у казеинов лошади и осла, а минимальный процент был также получен у казеинов козы и верблюда.

Таблица 2

: Прогнозирование вторичной структуры казеина альфа s1 с помощью GORIV, PreSSApro и YASPIN

αS1 Казеин α спираль (%) Удлиненная прядь (%) Случайная катушка (%)
Лошадь 46.85 10,21 42,92
Верблюд 39,33 14,11 46,54
Корова 42,59 10,74 45,32
Овцы 42,46 9,19 48,28
Осел 44,85 10,29 45,46

Результаты protparam физико-химических свойств показаны в.Алифатический индекс белков казеина верблюда и коровы был явно выше, чем у других типов казеина. Результаты также показали, что положительные и отрицательные заряды явно различались между этими типами казеина. Наибольший положительный заряд имели казеины лошади и осла, за ними следуют казеины верблюда, коровы, овцы и козы. Наибольший отрицательный заряд казеинов получил казеин верблюда, за которым следуют казеины осла, лошади, коровы, овцы и козы. Результаты захоронения и экспонирования остатков были также получены с помощью NetsurfP ().Максимальный и минимальный процент захороненных остатков были достигнуты казеинами коровы и лошади соответственно. И наоборот, казеины лошади и коровы показали самый высокий и самый низкий процент экспонированных остатков соответственно.

Таблица 3

Физико-химические свойства казеина альфа S1 по протпарам

900,19
αS1 Казеин МВт Отрицательный заряд Позиционный заряд Алифатический индекс
Лошадь 25.30 32 28 82,83
Верблюд 25,84 36 25 85,14
Корова 24,53 32 21 900,19 900,78 24,27 26 20 82,06
Овцы 24,30 27 21 83,88
Осел 25.96 33 29 80,92

Таблица 4

Процент захороненных и открытых остатков казеина альфа s1 по NetsurfP

αS1 Казеин Похоронен% Открыто%
Лошадь 40,09% 59,90%
Верблюд 41,89% 58,10%
Корова 45.79% 54,20%
Коза 45,32% 54,67%
Овца 44,39% 55,60%
Осел 44,23% 55,76148 55,7614% ОБСУЖДЕНИЕ

Молоко содержит более 25 различных белков. Примерно 82% белков молока млекопитающих составляют казеины, а остальные 18% - белки сыворотки. В этом исследовании проверялась антипролиферативная активность различных видов молока, казеинов и сывороточных белков.Результаты показали, что кобылье, ослиное и коровье молоко и их казеины обладают сильной противораковой активностью в отношении клеток MCF7. Наибольшую противораковую активность продемонстрировал казеин кобылы, за которым следовали казеины верблюда, осла и коровы. Результаты показали, что овечье и козье молоко и их казеины не обладают противораковой активностью. Эти данные свидетельствуют о том, что противораковая активность молока животных в основном связана с физическими и химическими характеристиками казеинов. Сообщалось о нескольких результатах о противораковой активности молока животных.О цитотоксической активности кобыльего молока , против клеток Raji и CEM-SS также сообщалось ранее [18]. Сообщалось об одном исследовании цитотоксической активности пептида, полученного из казеина αs1 человека (αs1-казоморфин и αs1-казоморфин амид), против клеток T47D [7]. Наши результаты показали, что сывороточные белки верблюда, коровы и осла обладают недельной цитотоксической активностью. Аналогичные исследования показали, что белки молочной сыворотки осла и крупного рогатого скота обладают цитотоксической активностью против A549 и клеток рака груди человека [6].В настоящем исследовании последовательности казеина as1 коровы, козы, овцы, кобылы, осла и верблюда были проанализированы с использованием метода биоинформатики. In silico Результаты показали, что самый высокий процент отрицательных и положительных зарядов достигается у казеинов кобылы, верблюда и осла. Аналогичная картина была также получена для структуры альфа-спирали казеинов, поскольку казеин кобылы имел самый высокий уровень структуры альфа-спирали и сильную противораковую активность.

Это исследование предполагает, что существует поразительная корреляция между противораковой активностью казеинов молока и их физико-химическими свойствами, такими как структура альфа-спирали, а также положительные и отрицательные заряды.Хуанг и др. Показали, что высоко заряженные производные COS (хитоолигосахарида) могут значительно снизить жизнеспособность раковых клеток, независимо от положительных или отрицательных зарядов [19]. Вторичная структура (α-спираль или β-лист) противоопухолевых пептидов связана с высоким процентом отрицательных и положительных зарядов. В нескольких исследованиях сообщалось, что альфа-спиральные катионные противораковые пептиды (ACP) проявляют уникальные механизмы действия и несколько необычных свойств, таких как активность широкого спектра и быстрое действие, и раковые клетки не могут бороться с ними [20].Согласно нашим результатам, казеин молока может быть хорошим кандидатом для лечения онкологических больных in vivo.

Благодарность

Авторы хотели бы поблагодарить Университет Исфахана за финансовую поддержку этого исследования.

Конфликт интересов:

Автор не имеет финансовых или нефинансовых конкурирующих интересов

Ссылки

1. Джаббари С., Хасани Р., Кафилзаде Ф., Джанфешан С. Противомикробные пептиды из молочных белков: проспект.Ann Biol Res. 2012; 3: 5313–5318. [Google Scholar] 2. López-Expósito I, Quirós A, Amigo L, Recio I. Гидролизаты казеина как источник антимикробных, антиоксидантных и гипотензивных пептидов. Lait. 2007. 87: 241–249. [Google Scholar] 3. Беллами В., Ямаути К., Вакабаяши Н., Такасе М., Такакура Н., Шимамура С., Томита М. Противогрибковые свойства лактоферрицина B, пептида, полученного из N-концевой области бычьего лактоферрина. Lett Appl Microbiol. 1994; 18: 230–233. [Google Scholar] 4. Лахов Э., Регельсон В.Антибактериальные и иммуностимулирующие казеиновые вещества, полученные из молока: казецидин, израцидиновые пептиды. Food Chem Toxicol. 1996. 34: 131–145. [PubMed] [Google Scholar] 5. Салями М., Моосави-Мовахеди А.А., Эхсани М.Р., Юсефи Р., Хертле Т., Чоберт Дж. М., Разави С.Х., Генрих Р., Балалай С., Эбади С.А., Пуртакдуст С. Улучшение антимикробной и антиоксидантной активности белков сыворотки верблюда и коровы за счет ограничения протеолиз. J. Agric Food Chem. 2010. 58: 3297–3302. [PubMed] [Google Scholar] 6. Мао X, Гу Дж, Сунь Y, Сюй С, Чжан X, Ян Х, Рен Ф.Антипролиферативный и противоопухолевый эффект активных компонентов ослиного молока на клетки рака легких человека A549. Int Dairy J. 2009; 19: 703–708. [Google Scholar] 7. Hatzoglou A, Bakogeorgou E, Hatzoglou C, Martin PM, Castanas E. Антипролиферативные и рецепторные связывающие свойства α- и β-казоморфинов в линии клеток рака молочной железы человека T47D. Eur J Pharmacol. 1996. 310: 217–223. [PubMed] [Google Scholar] 8. Herrouin M, Mollé D, Fauquant J, Ballestra F, Maubois JL, Léonil J. Новые генетические варианты, идентифицированные в сывороточных белках ослиного молока.J. Protein Chem. 2000. 19: 105–116. [PubMed] [Google Scholar] 9. Брайан Дж. П., Закари Л. В., Сет Дж. Дазатиниб действует синергично как с цитотоксическими ингибиторами, так и с ингибиторами сигнальной трансдукции в гетерогенных клеточных линиях рака молочной железы: уроки по разработке комбинированной таргетной терапии. Cancer Lett. 2012; 320: 104–110. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 10. Мосманн Т. Быстрый колориметрический анализ клеточного роста и выживаемости. Применение в анализах пролиферации и цитотоксичности. J Immunol Methods. 1983; 65: 55–63.[PubMed] [Google Scholar] 11. Morgan DM. Анализ тетразолия (МТТ) на жизнеспособность и активность клеток. Протоколы полиаминов, Humana Press, Totowa, NJ, 1998: 179–184. [Google Scholar] 12. Сиверс Ф., Вильм А., Дайнин Д., Гибсон Т. Дж., Карплус К., Ли В., Лопес Р., Мак-Вильям Х., Реммерт М., Сёдинг Дж., Томпсон Дж. Д.. Быстрое и масштабируемое создание высококачественного выравнивания множественных последовательностей белков с помощью Clustal Omega. Mol Syst Biol. 2011; 7: 1–9. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 13. Гарнье Дж., Жибрат Дж. Ф., Робсон Б.Метод GOR для прогнозирования вторичной структуры белка по аминокислотной последовательности. Meth Enzymol. 1996; 266: 540–553. [PubMed] [Google Scholar] 14. Costantini S, Colonna G, Facchiano AM. На склонность аминокислот к вторичным структурам влияет структурный класс белка. Biochem Biophys Res Commun. 2006; 342: 441–451. [PubMed] [Google Scholar] 15. Lin K, Simossis VA, Taylor WR, Heringa J. Простой и быстрый метод прогнозирования вторичной структуры с использованием скрытых нейронных сетей. Биоинформатика. 2005. 21: 152–159.[PubMed] [Google Scholar] 16. Гастайгер Э., Хугланд С., Гаттикер А., Дюво С.Е., Уилкинс М.Р., Аппель Р.Д., Байрох А. Инструменты идентификации и анализа белков на сервере ExPASy. Humana Press; 2005. С. 571–607. [Google Scholar] 17. Петерсен Б., Петерсен Т. Н., Андерсен П., Нильсен М., Лундегаард С. Общий метод присвоения оценок надежности, применяемый к прогнозам доступности растворителей. BMC Struct Biol. 2009; 9: 51–61. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 18. Рахмат А., Росли Р., Тан М. Х., Умар-Цафе Н., Али А. М., Бакар А., Фадзелли М.Сравнительная оценка цитотоксического действия молока различных видов на клеточные линии лейкемии. Malays J Med Health Sci. 2006; 2: 1–10. [Google Scholar] 19. Хуанг Р., Мендис Э, Раджапакс Н., Ким С.К. Сильный электронный заряд как важный фактор противораковой активности хитоолигосахаридов (COS) Life Sci. 2006; 78: 2399–2408. [PubMed] [Google Scholar] 20. Хуан И, Фэн Ци, Ян Ц., Хао Х, Чен Ю. Альфа-спиральные катионные противоопухолевые пептиды: многообещающий кандидат на новые противораковые препараты. Mini Rev Med Chem.2015; 15: 73–81. [PubMed] [Google Scholar]

Противораковая активность коровьего, овечьего, козьего, кобыльего, ослиного и верблюжьего молока и их казеинов и белков сыворотки, а также сравнение казеинов in silico

Mol Biol Res Commun. 2017 июн; 6 (2): 57–64.

Кафедра биотехнологии, Факультет передовых наук и технологий, Исфаханский университет, Исфахан, Иран

* Автор, ответственный за переписку: Кафедра биотехнологии, Факультет передовых наук и технологий, Исфаханский университет, Исфахан, Иран, тел: + 98-31-37934391, Факс: +98-31-37932342, Э.mail: [email protected]

Это статья в открытом доступе, распространяемая в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution License (http://creativecommons.org/licenses/by/3.0/), которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии правильного цитирования оригинальной работы. Эта статья цитируется в других статьях PMC.

Abstract

Настоящее исследование было проведено для оценки противоопухолевой активности коровьего, козьего, овечьего, кобыльего, ослиного и верблюжьего молока, а также их казеина и белков сыворотки против линии клеток MCF7.Структурные свойства казеиновых белков также были исследованы с использованием инструментов биоинформатики, чтобы найти объяснение их противоопухолевой активности. Влияние различных видов молока и содержащихся в них казеина и сывороточных белков на пролиферацию MCF7 измеряли с помощью анализа МТТ при различных концентрациях (0,5, 1 и 2 мг / мл). Результаты показали, что кобылье, ослиное, коровье и верблюжье молоко и их казеин и сывороточные белки обладают мощной цитотоксической активностью в отношении клеток MCF7 в зависимости от дозы, в то время как овечье и козье молоко и их белки не проявляют никакой цитотоксической активности.Результаты in silico показали, что казеины кобылы, осла и верблюда имеют самые высокие положительные и отрицательные заряды. Прогноз вторичной структуры показал, что у казеинов кобылы и осла был максимальный процент α-спирали, а у казеина верблюда был самый высокий процент удлиненной цепи. Это исследование предполагает, что существует поразительная корреляция между противораковой активностью казеинов молока и их физико-химическими свойствами, такими как структура альфа-спирали, а также положительные и отрицательные заряды.В заключение, результаты показали, что кобылье, верблюжье и ослиное молоко могут быть хорошими кандидатами против клеток рака груди.

Ключевые слова: Молоко, казеин, сывороточные белки, анализ МТТ, In silico Исследование

ВВЕДЕНИЕ

Рак - одно из самых распространенных злокачественных новообразований во всем мире. Следовательно, очень необходимы открытие и разработка новых противораковых агентов с новыми способами действия. Многие исследователи сообщили, что компоненты молока обладают биологическими свойствами, превышающими их питательную ценность.Биологические функции молока в основном связаны с молочными пептидами и белками. Белки молока включают примерно 20% сыворотки и 80% казеина. Сыворотка содержит пять основных белков, включая α-лактальбумин, гликомакропептид, β-лактоглобулин, иммуноглобулины и сывороточный альбумин. Казеин содержит казеин αs1, αs2, β и κ [1]. Было несколько сообщений об антибактериальной, противовирусной, противогрибковой и антиоксидантной активности казеина и белков сыворотки [2].

Сообщалось также об иммуномодулирующей функции пептидов молока и казеина и белков сыворотки [3-5].Несколько исследований также показали, что сывороточные белки, такие как лизоцим, лактоферрин и бычий сывороточный альбумин, обладают эффективной противоопухолевой активностью. Xueying Mao и др. Сообщили, что сывороточные белки ослиного молока обладают мощной антипролиферативной активностью против рака легких. Пять разных казоморфинов; Также сообщалось, что αs1-CN (f90–95), αs1-CN (f 90–96), β-казоморфин-7, β-казоморфин-7 (f1-5) и морфицептин ингибируют пролиферацию клеток линии клеток рака молочной железы человека. [6, 7]. Однако до сих пор не было представлено никаких научных исследований об активности ослиного, козьего, овечьего и кобыльего молока в отношении клеток MCF7.В настоящем исследовании казеин и сывороточные белки ослиного, верблюжьего, овечьего, козьего, коровьего и кобыльего молока были выделены и инкубированы с клеточными линиями рака груди (MCF7). Было исследовано влияние шести различных видов молока (ослиное, верблюжье, овечье, козье, коровье и кобыльское) и их казеинов и белков сыворотки на ингибирование роста клеток MCF7. Кроме того, в настоящем исследовании были изучены различные свойства казеина с использованием инструментов биоинформатики, чтобы найти объяснения их противоопухолевой активности.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Переработка молока: В данном исследовании использовалось молоко с разных ферм в Исфахане (Иран).Образцы молока собирали и нагревали на термостатической водяной бане при температуре предварительной пастеризации 63ºC в течение 20 минут и охлаждали до 4ºC. До анализа образцы хранили при -20ºC [6]. Обезжиренное молоко готовили из свежего молока центрифугированием при 5000 × g в течение 20 мин при 4ºC и вытягивали жировой слой [5]. Цельный казеин молока получали из обезжиренного молока путем доведения pH до 4,6 (изоэлектрическая точка казеина) и центрифугировали при 8000 × г в течение 20 минут при 20ºC для получения супернатанта сывороточных белков [8].Белки сыворотки получали после осаждения казеинов. Белки сыворотки промывали и центрифугировали трижды, затем их pH доводили до 6,8 с помощью 1 н. NaOH [5]. Затем казеин и сывороточные белки лиофилизировали и хранили при -20 ° C [6].

Культура клеток и анализ цитотоксичности: Клеточные линии MCF-7 (рак груди человека) были приобретены в Национальном банке клеток пастбищного института, Тегеран, Иран. Клеточные линии поддерживали в RPMI с добавлением 10% (об. / Об.) Инактивированной нагреванием фетальной бычьей сыворотки (FBS), 100 ед. Мл -1 пенициллина и 100 мкг мл -1 стрептомицина и 5 мМ L-глутамина.Клеточные линии поддерживали при 37ºC в увлажненном инкубаторе (N-Biotek Korea), содержащем 5% CO 2 , в условиях отсутствия Mycoplasma [9].

Влияние различных концентраций (0,5, 1 и 2 мг / мл) молока, казеина и сывороточных белков на клетки MCF-7 определяли с помощью модифицированного 3- (4,5-диметилтиазол-2-ил) -2, Анализ 5-дифенилтетразолийбромида (МТТ) [10]. После 48 часов инкубации при 37 ° C в каждую лунку добавляли раствор МТТ (5 мг / мл) и планшет инкубировали в течение 4 часов.Наконец, 50 мкл PrOH / HCl / TX (0,04 М HCl в 2-пропаноле плюс 10% Triton X-100) добавляли для растворения образовавшихся кристаллов формазана [11]. Планшет повторно инкубировали в течение 24 ч и определяли количество кристаллов формазана путем измерения оптической плотности при 492 нм с использованием спектрофотометра для микропланшетов (Awareness Technology Inc., stat fax 2100). Весь материал приобретен у компании Gibco (Германия). Процент выживаемости клеток рассчитывали следующим образом: Жизнеспособность клеток = (AtreatedAcontrol) × 100

Получение целевых аминокислотных последовательностей и множественное сопоставление последовательностей: Казеин альфа-S1-белки овцы, козы, коровы, верблюда, лошади и осла были проанализированы в настоящем исследовании.Последовательности белков доступны в NCBI. Номера доступа и количество аминокислот αs1-казеина показаны в. CLUSTAL Omega в Европейском институте биоинформатики использовался для генерации множественного выравнивания последовательностей [MSA] последовательностей белка казеина альфа S1 шести различных видов [12].

Таблица 1

Записи последовательности молочного белка в базе данных NCBI и количество аминокислот

Белки Инвентарный номер белков Количество аминокислот
αs1-казеин [ Bos Taurus ] {"type": "entrez-protein", "attrs": {"text": "ABW98936.1 "," term_id ":" 159793183 "," term_text ":" ABW98936.1 "}} ABW98936.1 214
αs1-казеин [ Equus caballus ] {"type": "entrez-protein", "attrs": {"text": "AAK83668.1", "term_id": "195", "term_text": "AAK83668.1"}} AAK83668.1 212
αs1-казеин [ Equus asinus ] {"type": "entrez-protein", "attrs": {"text": "P86272.1 "," term_id ":" 238055131 "," term_text ":" P86272.1 "}} P86272.1 217
αs1-казеин [ Камелус дромедарий ] {"type": "entrez-protein", "attrs": {"text": "CAA10077.1", "term_id": "3860335", "term_text": "CAA10077.1"}} CAA10077.1 222
αs1-казеин [ Капра Гиркус ] {"type": "entrez-protein", "attrs": {"text": "CAD45345.1 "," term_id ":" 22796155 "," term_text ":" CAD45345.1 "}} CAD45345.1 214
αs1-казеин [ Овис Овен ] {"type": "entrez-protein", "attrs": {"text": "AEN84772.1", "term_id": "345422900", "term_text": "AEN84772.1"}} AEN84772.1 214

Построения филогенетического дерева: Clustal Omega - это программа множественного выравнивания последовательностей для белковых последовательностей, после чего выравнивание используется для создания филогенетического анализа, и отображается окончательное филогенетическое дерево.В исследовании Clustal Omega использовали для филогенетического анализа 6 последовательностей казеиновых белков у млекопитающих [12].

Предсказание вторичной структуры: GOR IV в EXPASY, YASPIN Центра интегративной биоинформатики VU и PressAPro в Лаборатории биоинформатики и вычислительной биологии Института пищевых наук, CNR, Италия были использованы для предсказания вторичных структур последовательностей казеина альфа S1 [13 -15].

Физико-химические свойства: Прогнозируемое значение pH изоэлектрической точки (pI), молекулярные массы, а также положительный и отрицательный заряд белков были определены с помощью инструмента protparam в базе данных белков «SwissProt & TrEMBL» [16].NetSurfP использовался для определения доступной поверхности всех белков. Сервер NetSurfP предоставил информацию об обнаруженных и скрытых аминокислотах белков [17].

Статистический анализ: Значения представлены как среднее ± стандартное отклонение (SD). Анализ дисперсии с последующим тестом LSD был использован для оценки значимости между тестируемым образцом и контролем растворителя. P <0,05 считали статистически значимым.

Результаты

Козье, коровье, верблюжье, овечье, кобылье и ослиное молоко и их казеин и сывороточные белки были протестированы на цитотоксичность в отношении клеток MCF7.Все виды молока и протеины были протестированы при различных концентрациях (0,5, 1 и 2 мг / мл). Кобылье, ослиное, коровье и верблюжье молоко показало дозозависимую цитотоксическую активность в отношении клеток MCF7, в то время как овечье и козье молоко не показало никакой цитотоксической активности (). Самая высокая цитотоксическая активность казеинов наблюдалась у казеина кобыльего молока, за которым следовали верблюжьи, ослиные и коровьи (). Результаты анализа сывороточных белков показали, что верблюжий сывороточный белок проявлял сильную противораковую активность, в то время как коровье, а ослиное молоко проявляло слабую противораковую активность ().

Цитотоксическая активность козьего, коровьего, верблюжьего, овечьего, кобыльего и ослиного молока в отношении клеток MCF7 (0,5 мг / мл, 1 мг / мл, 2 мг / мл

Цитотоксическая активность коз, коров, верблюдов, овец, кобыл и ослов казеины против клеток MCF7 (0,5 мг / мл, 1 мг / мл, 2 мг / мл

Цитотоксическая активность сывороточных белков козы, коровы, верблюда, овцы, кобылы и осла против клеток MCF7 (0,5 мг / мл, 1 мг / мл, 2 мг / мл

Множественное выравнивание последовательностей было получено с использованием Clustal Omega с последовательностями казеина αs1, полученными из базы данных NCBI (), также результаты NCBI BLAST показали 44-89% идентичности между последовательностями казеина.Взаимоотношения последовательностей показали, что последовательности αs1казеина не принадлежали к высококонсервативному семейству.

Множественное выравнивание последовательностей казеина альфа S1 козы, коровы, верблюда, овцы, кобылы и осла

Структура филогенетического дерева показывает, что эти белки были разделены на три отдельные группы. Члены этих двух групп не очень разнообразны, и между ними существует высокая идентичность последовательностей. Между этими двумя отдельными группами не было комбинации членов, что свидетельствует о том, что они были разделены на ранней стадии эволюции ().

Филогенетическое дерево казеинов разных видов, построенное с помощью CLUSTAL omega.

Результаты показали, что типы казеина в основном различаются по процентному содержанию альфа-спирали, бета-листа и случайной спирали. Расчетная вторичная структура с веб-серверов GorIV, PreSSApro и YASPIN для αs1-казеина составляла от 39 до 46% α-спирали; От 8 до 14% вытянутой нити (β-листовой) и от 42 до 49% случайной спирали (). У верблюжьего казеина был самый высокий процент удлиненной пряди, в то время как у овец и коз был самый низкий процент в этом отношении.Максимальный процент α-спирали был получен у казеинов лошади и осла, а минимальный процент был также получен у казеинов козы и верблюда.

Таблица 2

: Прогнозирование вторичной структуры казеина альфа s1 с помощью GORIV, PreSSApro и YASPIN

αS1 Казеин α спираль (%) Удлиненная прядь (%) Случайная катушка (%)
Лошадь 46.85 10,21 42,92
Верблюд 39,33 14,11 46,54
Корова 42,59 10,74 45,32
Овцы 42,46 9,19 48,28
Осел 44,85 10,29 45,46

Результаты protparam физико-химических свойств показаны в.Алифатический индекс белков казеина верблюда и коровы был явно выше, чем у других типов казеина. Результаты также показали, что положительные и отрицательные заряды явно различались между этими типами казеина. Наибольший положительный заряд имели казеины лошади и осла, за ними следуют казеины верблюда, коровы, овцы и козы. Наибольший отрицательный заряд казеинов получил казеин верблюда, за которым следуют казеины осла, лошади, коровы, овцы и козы. Результаты захоронения и экспонирования остатков были также получены с помощью NetsurfP ().Максимальный и минимальный процент захороненных остатков были достигнуты казеинами коровы и лошади соответственно. И наоборот, казеины лошади и коровы показали самый высокий и самый низкий процент экспонированных остатков соответственно.

Таблица 3

Физико-химические свойства казеина альфа S1 по протпарам

900,19
αS1 Казеин МВт Отрицательный заряд Позиционный заряд Алифатический индекс
Лошадь 25.30 32 28 82,83
Верблюд 25,84 36 25 85,14
Корова 24,53 32 21 900,19 900,78 24,27 26 20 82,06
Овцы 24,30 27 21 83,88
Осел 25.96 33 29 80,92

Таблица 4

Процент захороненных и открытых остатков казеина альфа s1 по NetsurfP

αS1 Казеин Похоронен% Открыто%
Лошадь 40,09% 59,90%
Верблюд 41,89% 58,10%
Корова 45.79% 54,20%
Коза 45,32% 54,67%
Овца 44,39% 55,60%
Осел 44,23% 55,76148 55,7614% ОБСУЖДЕНИЕ

Молоко содержит более 25 различных белков. Примерно 82% белков молока млекопитающих составляют казеины, а остальные 18% - белки сыворотки. В этом исследовании проверялась антипролиферативная активность различных видов молока, казеинов и сывороточных белков.Результаты показали, что кобылье, ослиное и коровье молоко и их казеины обладают сильной противораковой активностью в отношении клеток MCF7. Наибольшую противораковую активность продемонстрировал казеин кобылы, за которым следовали казеины верблюда, осла и коровы. Результаты показали, что овечье и козье молоко и их казеины не обладают противораковой активностью. Эти данные свидетельствуют о том, что противораковая активность молока животных в основном связана с физическими и химическими характеристиками казеинов. Сообщалось о нескольких результатах о противораковой активности молока животных.О цитотоксической активности кобыльего молока , против клеток Raji и CEM-SS также сообщалось ранее [18]. Сообщалось об одном исследовании цитотоксической активности пептида, полученного из казеина αs1 человека (αs1-казоморфин и αs1-казоморфин амид), против клеток T47D [7]. Наши результаты показали, что сывороточные белки верблюда, коровы и осла обладают недельной цитотоксической активностью. Аналогичные исследования показали, что белки молочной сыворотки осла и крупного рогатого скота обладают цитотоксической активностью против A549 и клеток рака груди человека [6].В настоящем исследовании последовательности казеина as1 коровы, козы, овцы, кобылы, осла и верблюда были проанализированы с использованием метода биоинформатики. In silico Результаты показали, что самый высокий процент отрицательных и положительных зарядов достигается у казеинов кобылы, верблюда и осла. Аналогичная картина была также получена для структуры альфа-спирали казеинов, поскольку казеин кобылы имел самый высокий уровень структуры альфа-спирали и сильную противораковую активность.

Это исследование предполагает, что существует поразительная корреляция между противораковой активностью казеинов молока и их физико-химическими свойствами, такими как структура альфа-спирали, а также положительные и отрицательные заряды.Хуанг и др. Показали, что высоко заряженные производные COS (хитоолигосахарида) могут значительно снизить жизнеспособность раковых клеток, независимо от положительных или отрицательных зарядов [19]. Вторичная структура (α-спираль или β-лист) противоопухолевых пептидов связана с высоким процентом отрицательных и положительных зарядов. В нескольких исследованиях сообщалось, что альфа-спиральные катионные противораковые пептиды (ACP) проявляют уникальные механизмы действия и несколько необычных свойств, таких как активность широкого спектра и быстрое действие, и раковые клетки не могут бороться с ними [20].Согласно нашим результатам, казеин молока может быть хорошим кандидатом для лечения онкологических больных in vivo.

Благодарность

Авторы хотели бы поблагодарить Университет Исфахана за финансовую поддержку этого исследования.

Конфликт интересов:

Автор не имеет финансовых или нефинансовых конкурирующих интересов

Ссылки

1. Джаббари С., Хасани Р., Кафилзаде Ф., Джанфешан С. Противомикробные пептиды из молочных белков: проспект.Ann Biol Res. 2012; 3: 5313–5318. [Google Scholar] 2. López-Expósito I, Quirós A, Amigo L, Recio I. Гидролизаты казеина как источник антимикробных, антиоксидантных и гипотензивных пептидов. Lait. 2007. 87: 241–249. [Google Scholar] 3. Беллами В., Ямаути К., Вакабаяши Н., Такасе М., Такакура Н., Шимамура С., Томита М. Противогрибковые свойства лактоферрицина B, пептида, полученного из N-концевой области бычьего лактоферрина. Lett Appl Microbiol. 1994; 18: 230–233. [Google Scholar] 4. Лахов Э., Регельсон В.Антибактериальные и иммуностимулирующие казеиновые вещества, полученные из молока: казецидин, израцидиновые пептиды. Food Chem Toxicol. 1996. 34: 131–145. [PubMed] [Google Scholar] 5. Салями М., Моосави-Мовахеди А.А., Эхсани М.Р., Юсефи Р., Хертле Т., Чоберт Дж. М., Разави С.Х., Генрих Р., Балалай С., Эбади С.А., Пуртакдуст С. Улучшение антимикробной и антиоксидантной активности белков сыворотки верблюда и коровы за счет ограничения протеолиз. J. Agric Food Chem. 2010. 58: 3297–3302. [PubMed] [Google Scholar] 6. Мао X, Гу Дж, Сунь Y, Сюй С, Чжан X, Ян Х, Рен Ф.Антипролиферативный и противоопухолевый эффект активных компонентов ослиного молока на клетки рака легких человека A549. Int Dairy J. 2009; 19: 703–708. [Google Scholar] 7. Hatzoglou A, Bakogeorgou E, Hatzoglou C, Martin PM, Castanas E. Антипролиферативные и рецепторные связывающие свойства α- и β-казоморфинов в линии клеток рака молочной железы человека T47D. Eur J Pharmacol. 1996. 310: 217–223. [PubMed] [Google Scholar] 8. Herrouin M, Mollé D, Fauquant J, Ballestra F, Maubois JL, Léonil J. Новые генетические варианты, идентифицированные в сывороточных белках ослиного молока.J. Protein Chem. 2000. 19: 105–116. [PubMed] [Google Scholar] 9. Брайан Дж. П., Закари Л. В., Сет Дж. Дазатиниб действует синергично как с цитотоксическими ингибиторами, так и с ингибиторами сигнальной трансдукции в гетерогенных клеточных линиях рака молочной железы: уроки по разработке комбинированной таргетной терапии. Cancer Lett. 2012; 320: 104–110. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 10. Мосманн Т. Быстрый колориметрический анализ клеточного роста и выживаемости. Применение в анализах пролиферации и цитотоксичности. J Immunol Methods. 1983; 65: 55–63.[PubMed] [Google Scholar] 11. Morgan DM. Анализ тетразолия (МТТ) на жизнеспособность и активность клеток. Протоколы полиаминов, Humana Press, Totowa, NJ, 1998: 179–184. [Google Scholar] 12. Сиверс Ф., Вильм А., Дайнин Д., Гибсон Т. Дж., Карплус К., Ли В., Лопес Р., Мак-Вильям Х., Реммерт М., Сёдинг Дж., Томпсон Дж. Д.. Быстрое и масштабируемое создание высококачественного выравнивания множественных последовательностей белков с помощью Clustal Omega. Mol Syst Biol. 2011; 7: 1–9. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 13. Гарнье Дж., Жибрат Дж. Ф., Робсон Б.Метод GOR для прогнозирования вторичной структуры белка по аминокислотной последовательности. Meth Enzymol. 1996; 266: 540–553. [PubMed] [Google Scholar] 14. Costantini S, Colonna G, Facchiano AM. На склонность аминокислот к вторичным структурам влияет структурный класс белка. Biochem Biophys Res Commun. 2006; 342: 441–451. [PubMed] [Google Scholar] 15. Lin K, Simossis VA, Taylor WR, Heringa J. Простой и быстрый метод прогнозирования вторичной структуры с использованием скрытых нейронных сетей. Биоинформатика. 2005. 21: 152–159.[PubMed] [Google Scholar] 16. Гастайгер Э., Хугланд С., Гаттикер А., Дюво С.Е., Уилкинс М.Р., Аппель Р.Д., Байрох А. Инструменты идентификации и анализа белков на сервере ExPASy. Humana Press; 2005. С. 571–607. [Google Scholar] 17. Петерсен Б., Петерсен Т. Н., Андерсен П., Нильсен М., Лундегаард С. Общий метод присвоения оценок надежности, применяемый к прогнозам доступности растворителей. BMC Struct Biol. 2009; 9: 51–61. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 18. Рахмат А., Росли Р., Тан М. Х., Умар-Цафе Н., Али А. М., Бакар А., Фадзелли М.Сравнительная оценка цитотоксического действия молока различных видов на клеточные линии лейкемии. Malays J Med Health Sci. 2006; 2: 1–10. [Google Scholar] 19. Хуанг Р., Мендис Э, Раджапакс Н., Ким С.К. Сильный электронный заряд как важный фактор противораковой активности хитоолигосахаридов (COS) Life Sci. 2006; 78: 2399–2408. [PubMed] [Google Scholar] 20. Хуан И, Фэн Ци, Ян Ц., Хао Х, Чен Ю. Альфа-спиральные катионные противоопухолевые пептиды: многообещающий кандидат на новые противораковые препараты. Mini Rev Med Chem.2015; 15: 73–81. [PubMed] [Google Scholar]

Противораковая активность коровьего, овечьего, козьего, кобыльего, ослиного и верблюжьего молока и их казеинов и белков сыворотки, а также сравнение казеинов in silico

Mol Biol Res Commun. 2017 июн; 6 (2): 57–64.

Кафедра биотехнологии, Факультет передовых наук и технологий, Исфаханский университет, Исфахан, Иран

* Автор, ответственный за переписку: Кафедра биотехнологии, Факультет передовых наук и технологий, Исфаханский университет, Исфахан, Иран, тел: + 98-31-37934391, Факс: +98-31-37932342, Э.mail: [email protected]

Это статья в открытом доступе, распространяемая в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution License (http://creativecommons.org/licenses/by/3.0/), которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии правильного цитирования оригинальной работы. Эта статья цитируется в других статьях PMC.

Abstract

Настоящее исследование было проведено для оценки противоопухолевой активности коровьего, козьего, овечьего, кобыльего, ослиного и верблюжьего молока, а также их казеина и белков сыворотки против линии клеток MCF7.Структурные свойства казеиновых белков также были исследованы с использованием инструментов биоинформатики, чтобы найти объяснение их противоопухолевой активности. Влияние различных видов молока и содержащихся в них казеина и сывороточных белков на пролиферацию MCF7 измеряли с помощью анализа МТТ при различных концентрациях (0,5, 1 и 2 мг / мл). Результаты показали, что кобылье, ослиное, коровье и верблюжье молоко и их казеин и сывороточные белки обладают мощной цитотоксической активностью в отношении клеток MCF7 в зависимости от дозы, в то время как овечье и козье молоко и их белки не проявляют никакой цитотоксической активности.Результаты in silico показали, что казеины кобылы, осла и верблюда имеют самые высокие положительные и отрицательные заряды. Прогноз вторичной структуры показал, что у казеинов кобылы и осла был максимальный процент α-спирали, а у казеина верблюда был самый высокий процент удлиненной цепи. Это исследование предполагает, что существует поразительная корреляция между противораковой активностью казеинов молока и их физико-химическими свойствами, такими как структура альфа-спирали, а также положительные и отрицательные заряды.В заключение, результаты показали, что кобылье, верблюжье и ослиное молоко могут быть хорошими кандидатами против клеток рака груди.

Ключевые слова: Молоко, казеин, сывороточные белки, анализ МТТ, In silico Исследование

ВВЕДЕНИЕ

Рак - одно из самых распространенных злокачественных новообразований во всем мире. Следовательно, очень необходимы открытие и разработка новых противораковых агентов с новыми способами действия. Многие исследователи сообщили, что компоненты молока обладают биологическими свойствами, превышающими их питательную ценность.Биологические функции молока в основном связаны с молочными пептидами и белками. Белки молока включают примерно 20% сыворотки и 80% казеина. Сыворотка содержит пять основных белков, включая α-лактальбумин, гликомакропептид, β-лактоглобулин, иммуноглобулины и сывороточный альбумин. Казеин содержит казеин αs1, αs2, β и κ [1]. Было несколько сообщений об антибактериальной, противовирусной, противогрибковой и антиоксидантной активности казеина и белков сыворотки [2].

Сообщалось также об иммуномодулирующей функции пептидов молока и казеина и белков сыворотки [3-5].Несколько исследований также показали, что сывороточные белки, такие как лизоцим, лактоферрин и бычий сывороточный альбумин, обладают эффективной противоопухолевой активностью. Xueying Mao и др. Сообщили, что сывороточные белки ослиного молока обладают мощной антипролиферативной активностью против рака легких. Пять разных казоморфинов; Также сообщалось, что αs1-CN (f90–95), αs1-CN (f 90–96), β-казоморфин-7, β-казоморфин-7 (f1-5) и морфицептин ингибируют пролиферацию клеток линии клеток рака молочной железы человека. [6, 7]. Однако до сих пор не было представлено никаких научных исследований об активности ослиного, козьего, овечьего и кобыльего молока в отношении клеток MCF7.В настоящем исследовании казеин и сывороточные белки ослиного, верблюжьего, овечьего, козьего, коровьего и кобыльего молока были выделены и инкубированы с клеточными линиями рака груди (MCF7). Было исследовано влияние шести различных видов молока (ослиное, верблюжье, овечье, козье, коровье и кобыльское) и их казеинов и белков сыворотки на ингибирование роста клеток MCF7. Кроме того, в настоящем исследовании были изучены различные свойства казеина с использованием инструментов биоинформатики, чтобы найти объяснения их противоопухолевой активности.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Переработка молока: В данном исследовании использовалось молоко с разных ферм в Исфахане (Иран).Образцы молока собирали и нагревали на термостатической водяной бане при температуре предварительной пастеризации 63ºC в течение 20 минут и охлаждали до 4ºC. До анализа образцы хранили при -20ºC [6]. Обезжиренное молоко готовили из свежего молока центрифугированием при 5000 × g в течение 20 мин при 4ºC и вытягивали жировой слой [5]. Цельный казеин молока получали из обезжиренного молока путем доведения pH до 4,6 (изоэлектрическая точка казеина) и центрифугировали при 8000 × г в течение 20 минут при 20ºC для получения супернатанта сывороточных белков [8].Белки сыворотки получали после осаждения казеинов. Белки сыворотки промывали и центрифугировали трижды, затем их pH доводили до 6,8 с помощью 1 н. NaOH [5]. Затем казеин и сывороточные белки лиофилизировали и хранили при -20 ° C [6].

Культура клеток и анализ цитотоксичности: Клеточные линии MCF-7 (рак груди человека) были приобретены в Национальном банке клеток пастбищного института, Тегеран, Иран. Клеточные линии поддерживали в RPMI с добавлением 10% (об. / Об.) Инактивированной нагреванием фетальной бычьей сыворотки (FBS), 100 ед. Мл -1 пенициллина и 100 мкг мл -1 стрептомицина и 5 мМ L-глутамина.Клеточные линии поддерживали при 37ºC в увлажненном инкубаторе (N-Biotek Korea), содержащем 5% CO 2 , в условиях отсутствия Mycoplasma [9].

Влияние различных концентраций (0,5, 1 и 2 мг / мл) молока, казеина и сывороточных белков на клетки MCF-7 определяли с помощью модифицированного 3- (4,5-диметилтиазол-2-ил) -2, Анализ 5-дифенилтетразолийбромида (МТТ) [10]. После 48 часов инкубации при 37 ° C в каждую лунку добавляли раствор МТТ (5 мг / мл) и планшет инкубировали в течение 4 часов.Наконец, 50 мкл PrOH / HCl / TX (0,04 М HCl в 2-пропаноле плюс 10% Triton X-100) добавляли для растворения образовавшихся кристаллов формазана [11]. Планшет повторно инкубировали в течение 24 ч и определяли количество кристаллов формазана путем измерения оптической плотности при 492 нм с использованием спектрофотометра для микропланшетов (Awareness Technology Inc., stat fax 2100). Весь материал приобретен у компании Gibco (Германия). Процент выживаемости клеток рассчитывали следующим образом: Жизнеспособность клеток = (AtreatedAcontrol) × 100

Получение целевых аминокислотных последовательностей и множественное сопоставление последовательностей: Казеин альфа-S1-белки овцы, козы, коровы, верблюда, лошади и осла были проанализированы в настоящем исследовании.Последовательности белков доступны в NCBI. Номера доступа и количество аминокислот αs1-казеина показаны в. CLUSTAL Omega в Европейском институте биоинформатики использовался для генерации множественного выравнивания последовательностей [MSA] последовательностей белка казеина альфа S1 шести различных видов [12].

Таблица 1

Записи последовательности молочного белка в базе данных NCBI и количество аминокислот

Белки Инвентарный номер белков Количество аминокислот
αs1-казеин [ Bos Taurus ] {"type": "entrez-protein", "attrs": {"text": "ABW98936.1 "," term_id ":" 159793183 "," term_text ":" ABW98936.1 "}} ABW98936.1 214
αs1-казеин [ Equus caballus ] {"type": "entrez-protein", "attrs": {"text": "AAK83668.1", "term_id": "195", "term_text": "AAK83668.1"}} AAK83668.1 212
αs1-казеин [ Equus asinus ] {"type": "entrez-protein", "attrs": {"text": "P86272.1 "," term_id ":" 238055131 "," term_text ":" P86272.1 "}} P86272.1 217
αs1-казеин [ Камелус дромедарий ] {"type": "entrez-protein", "attrs": {"text": "CAA10077.1", "term_id": "3860335", "term_text": "CAA10077.1"}} CAA10077.1 222
αs1-казеин [ Капра Гиркус ] {"type": "entrez-protein", "attrs": {"text": "CAD45345.1 "," term_id ":" 22796155 "," term_text ":" CAD45345.1 "}} CAD45345.1 214
αs1-казеин [ Овис Овен ] {"type": "entrez-protein", "attrs": {"text": "AEN84772.1", "term_id": "345422900", "term_text": "AEN84772.1"}} AEN84772.1 214

Построения филогенетического дерева: Clustal Omega - это программа множественного выравнивания последовательностей для белковых последовательностей, после чего выравнивание используется для создания филогенетического анализа, и отображается окончательное филогенетическое дерево.В исследовании Clustal Omega использовали для филогенетического анализа 6 последовательностей казеиновых белков у млекопитающих [12].

Предсказание вторичной структуры: GOR IV в EXPASY, YASPIN Центра интегративной биоинформатики VU и PressAPro в Лаборатории биоинформатики и вычислительной биологии Института пищевых наук, CNR, Италия были использованы для предсказания вторичных структур последовательностей казеина альфа S1 [13 -15].

Физико-химические свойства: Прогнозируемое значение pH изоэлектрической точки (pI), молекулярные массы, а также положительный и отрицательный заряд белков были определены с помощью инструмента protparam в базе данных белков «SwissProt & TrEMBL» [16].NetSurfP использовался для определения доступной поверхности всех белков. Сервер NetSurfP предоставил информацию об обнаруженных и скрытых аминокислотах белков [17].

Статистический анализ: Значения представлены как среднее ± стандартное отклонение (SD). Анализ дисперсии с последующим тестом LSD был использован для оценки значимости между тестируемым образцом и контролем растворителя. P <0,05 считали статистически значимым.

Результаты

Козье, коровье, верблюжье, овечье, кобылье и ослиное молоко и их казеин и сывороточные белки были протестированы на цитотоксичность в отношении клеток MCF7.Все виды молока и протеины были протестированы при различных концентрациях (0,5, 1 и 2 мг / мл). Кобылье, ослиное, коровье и верблюжье молоко показало дозозависимую цитотоксическую активность в отношении клеток MCF7, в то время как овечье и козье молоко не показало никакой цитотоксической активности (). Самая высокая цитотоксическая активность казеинов наблюдалась у казеина кобыльего молока, за которым следовали верблюжьи, ослиные и коровьи (). Результаты анализа сывороточных белков показали, что верблюжий сывороточный белок проявлял сильную противораковую активность, в то время как коровье, а ослиное молоко проявляло слабую противораковую активность ().

Цитотоксическая активность козьего, коровьего, верблюжьего, овечьего, кобыльего и ослиного молока в отношении клеток MCF7 (0,5 мг / мл, 1 мг / мл, 2 мг / мл

Цитотоксическая активность коз, коров, верблюдов, овец, кобыл и ослов казеины против клеток MCF7 (0,5 мг / мл, 1 мг / мл, 2 мг / мл

Цитотоксическая активность сывороточных белков козы, коровы, верблюда, овцы, кобылы и осла против клеток MCF7 (0,5 мг / мл, 1 мг / мл, 2 мг / мл

Множественное выравнивание последовательностей было получено с использованием Clustal Omega с последовательностями казеина αs1, полученными из базы данных NCBI (), также результаты NCBI BLAST показали 44-89% идентичности между последовательностями казеина.Взаимоотношения последовательностей показали, что последовательности αs1казеина не принадлежали к высококонсервативному семейству.

Множественное выравнивание последовательностей казеина альфа S1 козы, коровы, верблюда, овцы, кобылы и осла

Структура филогенетического дерева показывает, что эти белки были разделены на три отдельные группы. Члены этих двух групп не очень разнообразны, и между ними существует высокая идентичность последовательностей. Между этими двумя отдельными группами не было комбинации членов, что свидетельствует о том, что они были разделены на ранней стадии эволюции ().

Филогенетическое дерево казеинов разных видов, построенное с помощью CLUSTAL omega.

Результаты показали, что типы казеина в основном различаются по процентному содержанию альфа-спирали, бета-листа и случайной спирали. Расчетная вторичная структура с веб-серверов GorIV, PreSSApro и YASPIN для αs1-казеина составляла от 39 до 46% α-спирали; От 8 до 14% вытянутой нити (β-листовой) и от 42 до 49% случайной спирали (). У верблюжьего казеина был самый высокий процент удлиненной пряди, в то время как у овец и коз был самый низкий процент в этом отношении.Максимальный процент α-спирали был получен у казеинов лошади и осла, а минимальный процент был также получен у казеинов козы и верблюда.

Таблица 2

: Прогнозирование вторичной структуры казеина альфа s1 с помощью GORIV, PreSSApro и YASPIN

αS1 Казеин α спираль (%) Удлиненная прядь (%) Случайная катушка (%)
Лошадь 46.85 10,21 42,92
Верблюд 39,33 14,11 46,54
Корова 42,59 10,74 45,32
Овцы 42,46 9,19 48,28
Осел 44,85 10,29 45,46

Результаты protparam физико-химических свойств показаны в.Алифатический индекс белков казеина верблюда и коровы был явно выше, чем у других типов казеина. Результаты также показали, что положительные и отрицательные заряды явно различались между этими типами казеина. Наибольший положительный заряд имели казеины лошади и осла, за ними следуют казеины верблюда, коровы, овцы и козы. Наибольший отрицательный заряд казеинов получил казеин верблюда, за которым следуют казеины осла, лошади, коровы, овцы и козы. Результаты захоронения и экспонирования остатков были также получены с помощью NetsurfP ().Максимальный и минимальный процент захороненных остатков были достигнуты казеинами коровы и лошади соответственно. И наоборот, казеины лошади и коровы показали самый высокий и самый низкий процент экспонированных остатков соответственно.

Таблица 3

Физико-химические свойства казеина альфа S1 по протпарам

900,19
αS1 Казеин МВт Отрицательный заряд Позиционный заряд Алифатический индекс
Лошадь 25.30 32 28 82,83
Верблюд 25,84 36 25 85,14
Корова 24,53 32 21 900,19 900,78 24,27 26 20 82,06
Овцы 24,30 27 21 83,88
Осел 25.96 33 29 80,92

Таблица 4

Процент захороненных и открытых остатков казеина альфа s1 по NetsurfP

αS1 Казеин Похоронен% Открыто%
Лошадь 40,09% 59,90%
Верблюд 41,89% 58,10%
Корова 45.79% 54,20%
Коза 45,32% 54,67%
Овца 44,39% 55,60%
Осел 44,23% 55,76148 55,7614% ОБСУЖДЕНИЕ

Молоко содержит более 25 различных белков. Примерно 82% белков молока млекопитающих составляют казеины, а остальные 18% - белки сыворотки. В этом исследовании проверялась антипролиферативная активность различных видов молока, казеинов и сывороточных белков.Результаты показали, что кобылье, ослиное и коровье молоко и их казеины обладают сильной противораковой активностью в отношении клеток MCF7. Наибольшую противораковую активность продемонстрировал казеин кобылы, за которым следовали казеины верблюда, осла и коровы. Результаты показали, что овечье и козье молоко и их казеины не обладают противораковой активностью. Эти данные свидетельствуют о том, что противораковая активность молока животных в основном связана с физическими и химическими характеристиками казеинов. Сообщалось о нескольких результатах о противораковой активности молока животных.О цитотоксической активности кобыльего молока , против клеток Raji и CEM-SS также сообщалось ранее [18]. Сообщалось об одном исследовании цитотоксической активности пептида, полученного из казеина αs1 человека (αs1-казоморфин и αs1-казоморфин амид), против клеток T47D [7]. Наши результаты показали, что сывороточные белки верблюда, коровы и осла обладают недельной цитотоксической активностью. Аналогичные исследования показали, что белки молочной сыворотки осла и крупного рогатого скота обладают цитотоксической активностью против A549 и клеток рака груди человека [6].В настоящем исследовании последовательности казеина as1 коровы, козы, овцы, кобылы, осла и верблюда были проанализированы с использованием метода биоинформатики. In silico Результаты показали, что самый высокий процент отрицательных и положительных зарядов достигается у казеинов кобылы, верблюда и осла. Аналогичная картина была также получена для структуры альфа-спирали казеинов, поскольку казеин кобылы имел самый высокий уровень структуры альфа-спирали и сильную противораковую активность.

Это исследование предполагает, что существует поразительная корреляция между противораковой активностью казеинов молока и их физико-химическими свойствами, такими как структура альфа-спирали, а также положительные и отрицательные заряды.Хуанг и др. Показали, что высоко заряженные производные COS (хитоолигосахарида) могут значительно снизить жизнеспособность раковых клеток, независимо от положительных или отрицательных зарядов [19]. Вторичная структура (α-спираль или β-лист) противоопухолевых пептидов связана с высоким процентом отрицательных и положительных зарядов. В нескольких исследованиях сообщалось, что альфа-спиральные катионные противораковые пептиды (ACP) проявляют уникальные механизмы действия и несколько необычных свойств, таких как активность широкого спектра и быстрое действие, и раковые клетки не могут бороться с ними [20].Согласно нашим результатам, казеин молока может быть хорошим кандидатом для лечения онкологических больных in vivo.

Благодарность

Авторы хотели бы поблагодарить Университет Исфахана за финансовую поддержку этого исследования.

Конфликт интересов:

Автор не имеет финансовых или нефинансовых конкурирующих интересов

Ссылки

1. Джаббари С., Хасани Р., Кафилзаде Ф., Джанфешан С. Противомикробные пептиды из молочных белков: проспект.Ann Biol Res. 2012; 3: 5313–5318. [Google Scholar] 2. López-Expósito I, Quirós A, Amigo L, Recio I. Гидролизаты казеина как источник антимикробных, антиоксидантных и гипотензивных пептидов. Lait. 2007. 87: 241–249. [Google Scholar] 3. Беллами В., Ямаути К., Вакабаяши Н., Такасе М., Такакура Н., Шимамура С., Томита М. Противогрибковые свойства лактоферрицина B, пептида, полученного из N-концевой области бычьего лактоферрина. Lett Appl Microbiol. 1994; 18: 230–233. [Google Scholar] 4. Лахов Э., Регельсон В.Антибактериальные и иммуностимулирующие казеиновые вещества, полученные из молока: казецидин, израцидиновые пептиды. Food Chem Toxicol. 1996. 34: 131–145. [PubMed] [Google Scholar] 5. Салями М., Моосави-Мовахеди А.А., Эхсани М.Р., Юсефи Р., Хертле Т., Чоберт Дж. М., Разави С.Х., Генрих Р., Балалай С., Эбади С.А., Пуртакдуст С. Улучшение антимикробной и антиоксидантной активности белков сыворотки верблюда и коровы за счет ограничения протеолиз. J. Agric Food Chem. 2010. 58: 3297–3302. [PubMed] [Google Scholar] 6. Мао X, Гу Дж, Сунь Y, Сюй С, Чжан X, Ян Х, Рен Ф.Антипролиферативный и противоопухолевый эффект активных компонентов ослиного молока на клетки рака легких человека A549. Int Dairy J. 2009; 19: 703–708. [Google Scholar] 7. Hatzoglou A, Bakogeorgou E, Hatzoglou C, Martin PM, Castanas E. Антипролиферативные и рецепторные связывающие свойства α- и β-казоморфинов в линии клеток рака молочной железы человека T47D. Eur J Pharmacol. 1996. 310: 217–223. [PubMed] [Google Scholar] 8. Herrouin M, Mollé D, Fauquant J, Ballestra F, Maubois JL, Léonil J. Новые генетические варианты, идентифицированные в сывороточных белках ослиного молока.J. Protein Chem. 2000. 19: 105–116. [PubMed] [Google Scholar] 9. Брайан Дж. П., Закари Л. В., Сет Дж. Дазатиниб действует синергично как с цитотоксическими ингибиторами, так и с ингибиторами сигнальной трансдукции в гетерогенных клеточных линиях рака молочной железы: уроки по разработке комбинированной таргетной терапии. Cancer Lett. 2012; 320: 104–110. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 10. Мосманн Т. Быстрый колориметрический анализ клеточного роста и выживаемости. Применение в анализах пролиферации и цитотоксичности. J Immunol Methods. 1983; 65: 55–63.[PubMed] [Google Scholar] 11. Morgan DM. Анализ тетразолия (МТТ) на жизнеспособность и активность клеток. Протоколы полиаминов, Humana Press, Totowa, NJ, 1998: 179–184. [Google Scholar] 12. Сиверс Ф., Вильм А., Дайнин Д., Гибсон Т. Дж., Карплус К., Ли В., Лопес Р., Мак-Вильям Х., Реммерт М., Сёдинг Дж., Томпсон Дж. Д.. Быстрое и масштабируемое создание высококачественного выравнивания множественных последовательностей белков с помощью Clustal Omega. Mol Syst Biol. 2011; 7: 1–9. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 13. Гарнье Дж., Жибрат Дж. Ф., Робсон Б.Метод GOR для прогнозирования вторичной структуры белка по аминокислотной последовательности. Meth Enzymol. 1996; 266: 540–553. [PubMed] [Google Scholar] 14. Costantini S, Colonna G, Facchiano AM. На склонность аминокислот к вторичным структурам влияет структурный класс белка. Biochem Biophys Res Commun. 2006; 342: 441–451. [PubMed] [Google Scholar] 15. Lin K, Simossis VA, Taylor WR, Heringa J. Простой и быстрый метод прогнозирования вторичной структуры с использованием скрытых нейронных сетей. Биоинформатика. 2005. 21: 152–159.[PubMed] [Google Scholar] 16. Гастайгер Э., Хугланд С., Гаттикер А., Дюво С.Е., Уилкинс М.Р., Аппель Р.Д., Байрох А. Инструменты идентификации и анализа белков на сервере ExPASy. Humana Press; 2005. С. 571–607. [Google Scholar] 17. Петерсен Б., Петерсен Т. Н., Андерсен П., Нильсен М., Лундегаард С. Общий метод присвоения оценок надежности, применяемый к прогнозам доступности растворителей. BMC Struct Biol. 2009; 9: 51–61. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 18. Рахмат А., Росли Р., Тан М. Х., Умар-Цафе Н., Али А. М., Бакар А., Фадзелли М.Сравнительная оценка цитотоксического действия молока различных видов на клеточные линии лейкемии. Malays J Med Health Sci. 2006; 2: 1–10. [Google Scholar] 19. Хуанг Р., Мендис Э, Раджапакс Н., Ким С.К. Сильный электронный заряд как важный фактор противораковой активности хитоолигосахаридов (COS) Life Sci. 2006; 78: 2399–2408. [PubMed] [Google Scholar] 20. Хуан И, Фэн Ци, Ян Ц., Хао Х, Чен Ю. Альфа-спиральные катионные противоопухолевые пептиды: многообещающий кандидат на новые противораковые препараты. Mini Rev Med Chem.2015; 15: 73–81. [PubMed] [Google Scholar]

Мванги Ва Мбузи - рак, положительное употребление сырого козьего молока ...

Рак, положительное употребление сырого козьего молока
Вэл Рейнольдс
Наталья Маркелова поставила диагноз рака и его последующая ремиссия , 49-летняя разведенная женщина отправилась на создание козьей фермы в Тольятти, Россия, и в конечном итоге получила признание всей страны за свою работу в качестве бизнес-леди
Когда друг организовал для меня визит к кому-то, с кем я хотел бы покончить с собой. Я ожидал увидеть сурового иссохшего старого фермера, называемого «женщина-коза».Вместо этого я встретил большую пухлую женщину с дружелюбными васильковыми глазами , ореолом серебристо-серых волос и нежной улыбкой.
Наталья объяснила, что у нее диагностировали рак матки, и впоследствии она решила отказаться от традиционной химиотерапии. Вместо этого она приступила к интенсивной программе исследования медицинских преимуществ употребления козьего молока. Убежденная, что она на правильном пути, она упорно придерживалась своего предпочтительного самолечения - пить козье молоко только для того, чтобы обнаружить, что ее рак находится в стадии ремиссии.
Вдохновленная собственным самолечением и поскольку единственный способ получить козье молоко в этом городе с почти миллионным населением - это владеть козочкой, она пообещала открыть козью ферму с целью производства молока для своих собратьев. больные раком и другими недугами.

Козье стадо Франция © Pintail
Тридцать восемь коз Натальи дают 110 литров молока каждый день. Этой смелой женщине помогают четыре рабочих, двое из которых работают одновременно в одну из двух смен. Молоко отправляют в детские сады, больницы и детские дома.После осмотра сарая, где козлов отделили от козлов и блеющих козлят, Наталья объяснила, что после того, как ее болезнь была диагностирована, она полностью отказалась от коровьего молока и перешла на козье молоко. С того дня, как ей сказали, что ей осталось жить всего шесть месяцев, теперь она продлила свою жизнь еще на семь лет.
Она считает, что мы, как общество, должны быть ближе к природе и больше ориентироваться на ее преимущества. Действительно, судя по ее близким товарищам: нервному игрушечному пуделю, сонному черному коту, пушистому белому коту и тому факту, что она говорит, что знает всех своих коз по именам, очевидно, что она практикует так, как проповедует.
Ей потребовалось три года, чтобы создать ферму с нуля и выполнить обещание, данное ее козочке: «Я буду помогать другим, как ты помогал мне». Наталья побывала в девяти штатах США, чтобы узнать о разведении коз и импортировать определенные породы, превосходящие местные. Она также посетила козьи фермы в Великобритании. Она была избрана руководителем Ассоциации козоводов России, которую она помогла основать.
Я спросил ее, что она думает о диагнозе рака.«Сначала я боялась три дня, но потом решила, что не собираюсь принимать диагноз и найду способ с ним бороться», - говорит она, добавляя, что ее трое детей были ее главной мотивацией остаться в живых. . «Я хотел доказать им, что в жизни нет ничего, что могло бы вытащить вас из жизненного седла, если вы не готовы выбраться первым, если вы сами».
Наталья объяснила, что научные исследования показали, что переваривание козьего молока занимает 15 минут, в отличие от коровьего молока, которое занимает около 45 минут.Козье молоко также считается единственным продуктом, который помогает избавить организм от металлических продуктов. Она также считает, что это помогает избавиться от аллергии у детей и успокаивает язвы.
Я спросил ее, изменила ли она свою диету, когда ей поставили диагноз, каким-либо другим способом. «Я ем все, что хочу, кроме всех козьих продуктов, включая мясо, молоко и сыр». Что касается других случаев, когда козье молоко лечит рак, она направила меня к работе доктора Бернарда Дженсена, доктора философии, американского врача, у которого был диагностирован рак в 35 лет, но который вылечил себя козьим молоком и дожил до глубокой старости 96 лет. .Она является приверженцем его книги «Магия козьего молока». (Эта книга все еще находится в печати. ​​Ред.)
Затем она достает толстую папку, заполненную письмами, которые, по ее словам, принадлежат людям, которые рассказывают, как их спасло козье молоко. Наталья предлагает, чтобы если кто-то болен раком, она посоветовала бы им прочитать о целебных свойствах козьего молока, а затем принять собственное решение о том, использовать его или нет.
Соавторы: Мартина Селф и Анна Гармаш, [email protected] lworld.com
Примечание редактора:
Растущий интерес к альтернативам коровьему молоку отражается в доступности пастеризованного козьего молока, которое теперь широко доступно в супермаркетах Великобритании.
Козий сыр из Франции, особенно поставляемый Tesco, очень быстро растет. Некоторые козьи сыры делают из непастеризованного молока.
Огромный объем информации был обнаружен при общем поиске в Google с использованием непастеризованного козьего молока.

Белок, содержащийся в молоке, может значительно снизить скорость роста раковых клеток толстой кишки с течением времени, сообщили исследователи из Лундского университета в Швеции в Journal of Dairy Science, официальном журнале Американской ассоциации молочных наук.

Предыдущие исследования показали, что молоко может снизить риск развития диабета и метаболического синдрома. Одно исследование показало, что молоко также может положительно повлиять на ваш мозг и умственную работоспособность.

Профессор Стина Оредссон и его команда обнаружили, что Lfcin4-14 (lactoferricin4 -14), молочный белок, который, как выяснили исследователи, имеет ряд преимуществ для здоровья, значительно снижает скорость роста раковых клеток толстой кишки в долгосрочной перспективе. Белок продлевает период клеточного цикла до репликации хромосом.
Более миллиона человек во всем мире ежегодно заболевают раком толстой кишки. Ежегодно от этой болезни умирает около полумиллиона человек. С 2008 года рак толстой кишки является вторым по распространенности раком у взрослых женщин и третьим по распространенности у мужчин. Рак толстой кишки гораздо чаще встречается в промышленно развитых странах.

Химиотерапия и облучение часто вызывают изменения кожи, вызывая ее сухость, шелушение и повышенную чувствительность.

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *

Copyright © 2019 Sozvezdie